Hidrólise do Amido | Açúcares Redutores | Relatório | Bioquímica | Experimental

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1ª Aula Prática de Bioquímica
Título da Prática: Monitoramento da Hidrólise do Amido e Identificação de Açúcares Redutores
Discentes: @bolzan.studies
Data de realização da prática: 12/03/2018
Data de entrega do relatório: 26/03/2018
Nilópolis – RJ
Março de 2018
SUMÁRIO
	1. Introdução
	3
	2. Objetivos
	4
	3. Materiais e Métodos
	4
	  3.1. Materiais e reagentes
	4
	  3.2. Métodos
	4
	4. Resultados e Discussão
	5
	5. Conclusão
	10
	6. Referências Bibliográficas
	11
1. INTRODUÇÃO
Um dos polissacarídeos de armazenamento mais importantes é o amido, em células vegetais. As suas moléculas são bem hidratadas, pois contém muitos grupos hidroxila disponíveis para formar ligação de hidrogênio com a água, portanto, não possui propriedades redutoras. Ou seja, não possui hidroxilas disponíveis no carbono anomérico após a ligação glicosídica. O amido contém dois tipos de polímeros de glicose, a amilose e amilopectina.
Figura 1 - Fonte: http://www.professoraangela.com.br/site/ler.php?id=27
Figura 2 - Fonte: http://www.professoraangela.com.br/site/ler.php?id=27
Uma solução de amido com ácido em aquecimento causam sucessivas hidrólises das ligações glicosídicas até que suas moléculas sejam revertidas completamente em glicose, um açúcar redutor, que pode ser caracterizada pelo reagente de Fehling, assim como a maltose e a lactose, e diferentemente da sacarose que também precisa ser hidrolisada para ter caráter redutor.
O reagente de Fehling foi descoberto por Hermann Von Fehling (1812 – 1885), é utilizado para determinar se um composto com grupos funcionais carbonilíco se trata de um aldeído ou de uma cetona. Levando-o juntamente com a solução estudada em aquecimento, verifica-se a formação de um precipitado avermelhado, o que prova que a substância em estudo é redutora.
2. OBJETIVOS
Realizar o monitoramento da hidrólise do amido, através de uma hidrólise ácida na presença de uma fonte de calor, identificar também a presença de açúcares redutores em 3 soluções (glicose, maltose e sacarose).
3. MATERIAIS E MÉTODOS
3.1 Materiais e reagentes
· Amido;
· Ácido clorídrico 3N;
· Lugol (solução de iodo e iodeto);
· Água destilada;
· Reagente de Fehling A e B;
· Soluções a 4% de glicose, maltose e sacarose;
· Tubos de ensaio;
· Estante para tubos de ensaio;
· Pipetas de 1 mL;
· Pipetador;
· Vidro de relógio;
· Balança analítica;
· Banho de água a 80 ºC;
· Chapa aquecedora.
3.2 Métodos
3.2.1 Monitoramento de Hidrólise do Amido
	Pesou-se uma amostra de aproximadamente 0,50 gramas de amido em um vidro de relógio, adicionou-se o amido pesado em um tubo de ensaio que continha 15 mL de ácido clorídrico 3N. Retirou-se deste tubo de ensaio uma alíquota de 1 mL, onde foi dividido 0,5 mL para dois outros tubos de ensaio – o tubo I para o teste com os reagentes de Fehling e o tubo II – para o teste de Iodo, no qual a mesma marcaria o tempo zero da hidrólise. O restante da suspensão foi levado para um banho com água a 80 ºC por 60 minutos. Posteriormente foram retiradas outras alíquotas de 1 mL nos tempos de 10, 20, 40 e 60 minutos, repetindo-se o mesmo procedimento de 0,5 mL em dois tubos de ensaio diferentes.
Sobre os testes realizados:
- Teste de açúcares redutores com os reagentes de Fehling (método de Lane-Eynon)
	Adicionou-se 0,5 mL de suspensão de amido com 0,5 mL de água destilado em um tubo de ensaio, foi acrescido 1 mL de Fehling A e 1 mL de Fehling B, respectivamente. Colocou-se o tubo em aquecimento no banho-maria por 5 minutos.
- Teste de Iodo
	Adicionou-se 0,5 mL de suspensão de amido e 1 gota de Lugol e observou-se a transformação.
3.2.2 Identificação de açúcares redutores
Para a identificação de açúcares redutores 3 soluções de açúcares à 4% foram submetidas ao teste de Fehling. 
Adicionou-se 1,0 mL de soluções de glicose, sacarose e maltose em três tubos de ensaio distintos. A cada um dos tubos foi adicionado 1,0 mL de Fehling A e 1,0 mL de Fehling B. Os tubos foram submetidos a aquecimento em banho Maria por 5 minutos e, as mudanças de coloração foram anotadas.
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO
4.1 Hidrólise do amido
Realizou-se dois testes para o monitoramento da hidrólise do amido. O teste I - utilizando o reagente de Fehling e o teste II - utilizando o lugol (solução de iodo e iodeto).
	O teste I realizado com o reagente de Fehling A e o reagente de Fehling B, são utilizados para determinar a presença de açúcares redutores na amostra. O teste com o reagente de Fehling resulta em uma oxidação seletiva de aldeídos e cetonas, também gera uma oxidação de carboidratos, e que em meio alcalino e sob aquecimento o Cu2+ é reduzido a Cu1+.
Açúcar redutor + CuSO4 →  Cu2O
Açúcar redutor + Cu2+ → Cu1+
	O Fehling A é uma solução aquosa de sulfato de cobre (II), enquanto o Fehling B é uma solução aquosa incolor de tartarato de sódio e potássio (também conhecido como sal de Rochelle) e uma base forte (normalmente hidróxido de sódio). O tartarato duplo de sódio e potássio na reação de Lane-Eynon para identificar açúcares redutores tem a função de quelar o cobre livre da solução, impedindo assim que ocorra a formação do hidróxido de cobre (Cu(OH)2) insolúvel e o hidróxido de sódio (NaOH) tem a função de tornar o meio alcalino para que desta maneira a reação aconteça.
Figura 3 - Teste de açúcares redutores utilizando os reagentes de Fehling.
	O teste II utilizando lugol tem como objetivo identificar a presença de ramificações presentes nas estruturas das substâncias.
	Após realizar os testes com na solução de amido com HCl 3N, com os tempos de 0,10,20,40 e 60 minutos foram obtidos os resultados expressos na tabela 1.
Tabela 1: Colorações obtidas nos testes de Fehling e Lugol, nos tempos de 0 à 60 minutos
	 
	Coloração obtida *
	Tempo de aquecimento
	Teste de Fehling
	Teste de Lugol
	0 minutos
	Azul piscina
	Azul marinho
	10 minutos
	Azul claro
	Marrom esverdeado
	20 minutos
	Marrom com precipitado vermelho
	Marrom claro
	40 minutos
	Laranja com precipitado vermelho
	Castanho
	60 minutos
	Castanho com precipitado vermelho
	Castanho
 * Colorações obtidas nos tubos de ensaios nos tempos podem ser observadas nas Figuras 4 e 5.
Figura 4 - Coloração dos testes nos tempos 0 à 20 minutos
Figura 5 - Coloração dos testes nos tempos 40 e 60 minutos
Podemos perceber que à medida que o tempo da hidrólise do amido se passava, o resultado do teste de Lugol, para identificação de iodo, foi se tornando uma solução mais clara, com apenas a cor do iodo. Isso nos mostra que a hidrólise foi efetiva, assim nos tempos finais não tinha mais quase amido em solução. 
 E o tubo I, o qual foi realizado o teste com os reagentes de Fehling, no decorrer do tempo, gerava como produto final dos aquecimentos a glicose, a medida que a hidrólise acontecia, diminuía a quantidade de amido ao mesmo tempo que aumentava a de glicose.
4.2 Identificação de açúcares redutores
	O teste de Fehling foi utilizado para identificar quais dos açúcares, glicose, sacarose e maltose, eram redutores. A visualização de precipitado vermelho, decorrente da formação do Cu2O, é positivo para açúcar redutor.
	Os resultados obtidos estão expressos na tabela 2:
Tabela 2: Teste com sacarose, maltose e glicose
	Solução 4%
	Teste de Fehling
	Açúcar redutor
	Sacarose (1)
	Azul intenso
	Negativo
	Maltose (2)
	Precipitado vermelho
	Positivo
	Glicose (3)
	Precipitado vermelho
	Positivo
 * As colorações obtidas nos testes encontram-se na figura 6, numeradas conforme o descrito na tabela.
Figura 6 - Colorações obtidas nos testes com sacarose (1), maltose (2) e glicose (3).
A identificação de açúcares redutores revelou a glicose e maltose como redutores e a sacarose não. A sacarose não é redutora por não possuir as hidroxilas dos carbonos anoméricos livres, pois estão condensados na ligação entre a glicose e frutose. A glicose e a maltose possuem a esta hidroxila livre.
5. CONCLUSÃO
Podemos concluir que a hidrólise ácida do amido foi efetiva utilizando os testes de iodo com Lugol e os testes para açúcares redutores com os reagentes deFehling para confirmar-lá.
A identificação de açúcares redutores revelou a glicose e maltose como redutores e a sacarose não, confirmando a teoria.
O experimento proporcionou a visualização das reações envolvendo os carboidratos, gerando uma melhor compreensão dos conteúdos estudados em sala de aula.
6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
· Disponível em: <http://www.fciencias.com/2014/10/16/teste-de-fehling-laboratorio-onlin>. Acesso dia: 24/03/2018.
· NELSON, David L.; COX, Michael M. Princípios de Bioquímica de Lehninger. 6ª ed. Porto Alegre: Artmed, 2004.
· TAVARES, J.T.Q. et al. Interferência do ácido ascórbico na determinação de açúcares redutores pelo método de Lane e Eynon. Química Nova. V. 33, n.4, p. 805-809, 2010.
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