Prática 6

Prévia do material em texto

UNIVERSIDADE FEDERAL DA GRANDE DOURADOS
FCBA– FACULDADE DE CIENCIAS BIOLÓGICAS E AMBIENTAIS
CURSO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Prática de Morfofisiologia Celular Comparada
Tema: Material Genético.
Prática: Extração de DNA do tomate (Solanum Iycopersicum) e cebola (Allium cepa).
 Mariana Palachini de Oliveira.
DOURADOS, 2°SEMESTRE DE 2013.
 
Introdução:
Durante a evolução da célula formou-se uma molécula, que hoje sabemos ser o ácido desoxirribonucléico (DNA ou ADN): molécula longa, constituída por uma sequência de nucleotídeos, que por sua vez é formado por três diferentes tipos de moléculas: um açúcar (pentose), um grupo fosfato, e uma base nitrogenada. Essa importante molécula contém as informações básicas para a formação de um ser vivo e para sua reprodução.
O DNA é formado por nucleotídeos, existem quatro tipos de nucleotídeos, representados pelas letras A(adenina), C(citosina), G(guanina) e T(timina). As formas como esses nucleotídeos se arrumam é que faz com que os seres vivos sejam diferentes um dos outros. E por isso, as mínimas mutações ocorridas em apenas um nucleotídeo de sua fita podem alterar a produção de uma proteína importante e causar doenças genéticas, que podem comprometer o ser vivo. Assim, os quatro tipos de nucleotídeos se arrumam de diversas maneiras na molécula de DNA, formando os diferentes seres vivos.
Uma molécula de DNA é formada por duas fitas de nucleotídeos, que ligados pelas pontes de hidrogênio, forma o que é chamado de dupla hélice. O modelo da dupla-hélice de Watson e Crick foi prontamente aceito pela comunidade científica; ele explicava pelo menos três características fundamentais do material genético: a capacidade de duplicação, a capacidade de conter informações para a produção de proteínas e a capacidade de sofrer mutação. Nessa fita, as bases nitrogenadas seguem o seguinte padrão de combinação: A (adenina) sempre se liga com T (timina), e C(citosina) com G (guanina). A simples combinação dessas letras é o que forma os seres vivos.
Pouco mais de 50 anos se passaram desde a descoberta da estrutura de DNA, e hoje assistimos a um espantoso avanço nesta área de pesquisa. As discussões sobre o DNA estão em toda parte: clonagem, Projeto Genoma, alimentos transgênicos, testes de paternidades; são várias as aplicações desse novo conhecimento, que também levanta questões éticas fundamentais que os cientistas tentam responder.
Objetivos:
Executar protocolo de extração de DNA de dois vegetais.
Observar moléculas de DNA.
Materiais:
1 tomate.
1 cebola.
Cloreto de sódio ou sal.
Água destilada.
Etanol 96% (álcool etílico comercial; como alternativa pode ser utilizado também álcool de cereais 99% encontrado em lojas de produtos para perfumaria e farmácias de manipulação).
Detergente comercial.
Gelo.
Papel filtro.
Bandeja plástica (para fazer banho de gelo).
Faca e Funil.
Béquer de 500 ml.
Béquer de 100 ml.
Tubos de ensaio.
Mixer ou liquidificador.
Banho-maria.
Procedimentos:
Picou-se 1 tomate com uma faca e depois triturou-se utilizando um mixer ou liquidificador, e depositou-se o extrato formado em um béquer de 500 ml.
Em um béquer de 100 ml, preparou-se a solução de lise: 6 ml de detergente concentrado, 4 g de cloreto de sódio, completando o volume com água até 60ml.
Adicionou-se a solução de lise (60 ml) ao béquer de 500 ml contendo o tomate triturado.
Homogeneizou-se a solução de lise com a polpa de tomate e colocou-se o béquer em banho-maria por 10 minutos a 55°C.
Preparou-se um banho de gelo em uma bandeja.
Após os 10 min. de banho-maria, transferiu-se o béquer para o banho de gelo por um período de 5 minutos.
Filtrou-se 4 ml da solução para um tubo de ensaio. 
Adicionou-se, delicadamente, 4 ml de etanol gelado ao tubo de ensaio. Durante a adição do etanol, observou-se atentamente o que ocorre no tubo.
Coletou-se com pinça ou bastão de vidro um pouco do DNA visível para a observação nos aumentos de 40x, 100x, 400x e 1000x.
Esquematizou-se somente nos aumentos de 400x e 1000x.
Realizou-se o mesmo procedimento, porém ao invés do tomate utilizou-se a cebola.
Resultados:
c
c
 B. 
Aumento de 400x-DNA da cebola. Aumento de 1000x-DNA da cebola.
Conclusão:
Podemos concluir que o DNA é pouco solúvel (pois não se dissolve facilmente), é muito pouco denso (dirigiu-se em direção ao álcool, que já por si é muito pouco denso) e possui ligações muito fracas, pois se partem com muita facilidade, porque estas ligações são feitas através de pontes de hidrogénio (as ligações através do hidrogênio são pouco intensas do ponto de vista energético).
Discussão:
Foi possível visualizar o DNA insolúvel no etanol? Como é a aparência das moléculas de DNA visualizadas na solução?
R: Sim. Foi possível a observação do DNA (emaranhado), que se apresenta por filamentos esbranquiçados.
Qual o aspecto da molécula de DNA quando observada ao microscópio óptico?
R: A estrutura de dupla hélice só pode ser visualizada de modo indireto e através de aparelhos sofisticados. O que observamos são milhares de fitas de DNA juntas.
Qual a função da solução de lise preparada?
R: O detergente teve a função de desagregar as membranas fosfolipídicas, o cloreto de sódio teve como objetivo impedir a repulsão elétrica entre as moléculas de DNA por ter carga positiva neutralizando a carga negativa do grupo de fosfato do DNA e permitiu a sua agregação de modo a formar filamentos mais espessos e compridos sendo assim mais visíveis.
Qual a função do etanol gelado utilizado no processo?
R: O álcool etílico permite uma maior desidratação das moléculas. O DNA ficou ascendido porque este é insolúvel a etanol de concentração 96%, separando assim o DNA. E como este é menos denso que a água, posicionou-se na parte superior do filtrado.
Para que você poderia utilizar o DNA extraído neste experimento?
R: Poderia ser utilizado na engenharia genética, ser inserido na estrutura de outros organismos, entre outras. 
Como é a estrutura molecular do DNA?
R: As duas cadeias helicoidais antiparalelas, com a "coluna vertebral" de açúcar e fosfato na parte externa e as bases (adenina, timina, guanina e citosina) no interior. Devido aos ângulos em que as substâncias químicas do DNA se ligam umas às outras, todas as moléculas de DNA consistem em duas faixas paralelas espiraladas, como corrimão de uma escada em espiral - daí o nome que imediatamente se celebrizou com a descoberta de Crick-Watson : a hélice dupla.
Referências Bibliográficas:
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAfGSIAH/relatorio-sobre-extracao-dna
http://pt.scribd.com/doc/70406400/Relatorio-Biologia-11º-Extracao-do-DNA 
http://www.portalsaofrancisco.com.br/alfa/dna/estrutura-molecular-de-dna.php
http://genoma.ib.usp.br/wordpress/wp-content/uploads/2012/01/GENOMA_Apostila_Capacitacao_Professores_2.pdf