relatório- esfregaço e coloração de lamina

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FACULDADES INTEGRADAS 
MARIA IMACULADA
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA DE HEMATOLOGIA
PROFESSORA SANDRA
ESFREGAÇO E COLORAÇÃO DE LÂMINAS SANGUÍNEAS
LAURA APARECIDA MARTINS SILVA – 2014
MONISE CRISTINA DA SILVA – RA 20170169
FARMÁCIA
2018
INTRODUÇÃO
A confecção do esfregaço sanguíneo é o fator mais importante para a realização de um hemograma. Há todo um procedimento técnico para que o esfregaço seja satisfatório, ele deve ser fino e regular, e de margens livres, para haver boa distribuição das células. Por meio dessa técnica, é possível fazer uma contagem do número de neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos, e chegar a uma porcentagem de cada célula encontrada. Para a técnica de esfregaço sanguíneo é utilizada uma mistura especial de corantes para tingir todas as células sanguíneas. Existem muitas variações como a coloração de Leishman, Giemsa, Wright ou May-Grünwald. Trata-se de modificações da coloração a base de corantes Romanovsky. A denominação confere ao médico russo Dmitri Leonidovich Romanowsky os créditos pelo desenvolvimento do método, em 1891. A mistura de corantes inclui um corante básico e um corante ácido, consistindo basicamente em azul de metileno e eosina Y (ou similar). A afinidade das estruturas celulares por corantes específicos ou por combinações de corantes dessa mistura proporciona uma visualização diferenciada das células sanguíneas.
OBJETIVO
Ter o primeiro contato com a técnica do esfregaço e coloração de laminas sanguínea para identificar os seguintes componentes do sangue humano: linfócitos, neutrófilos, monócitos, basófilos e eosinófilos.
MATERIAIS
Água destilada e Água corrente
Álcool 70%
Algodão
Amostra de sangue em tubo com EDTA
Capilar
Corante de Leishman 
Corante tipo rápido (Panótico) 
Garrote
Lâminas extensoras 
Lâminas
Luvas
Microscópio óptico 
Óleo de imersão para lâmina 
Pipeta de Pasteur 
Seringa agulhada
PROCEDIMENTOS
Conforme a orientação da professora, para começar o experimento foi necessária colher amostras de sangue humano e colocá-las em tubos de ensaios tampados contendo EDTA. Essa parte do experimento foi realizada uma aula anterior somente para treinarmos a fazer o esfregaço, para a aula pratica de coloração as amostras foram colhidas pela professora e já estavam prontas para serem utilizadas.
O primeiro passo do experimento foi pegar duas lâminas, com o capilar colhemos o sangue que estava no tubo de ensaio e pipetou-se uma pequena quantidade na lâmina, com essa lâmina extensora arrastou-se o sangue um pouco para trás preenchendo toda a borda e fez-se o esfregaço utilizando a lâmina em um ângulo aproximado de 45°. Depois de alguns minutos, pegou-se uma das lâminas com o esfregaço seco e demarcamos o nome com lápis, para facilitar a identificação e a mergulhou no fixador que estava dentro do primeiro refratário por 5 vezes. Após ser tirada do fixador, ela foi mergulhada no segundo refratário por 5 vezes, para receber o primeiro corante. O terceiro refratário havia o segundo corante, então a lâmina foi mergulhada neste refratário por mais 5 vezes, totalizando um minuto. Após a etapa do corante, a lâmina foi levada até uma torneira onde continha água corrente e foi aos poucos mergulhada num jato moderado de água. Em seguida levou-se para secar. Quando a lâmina já estava totalmente seca, ela foi levada ao microscópio óptico para ser focada e visualizada. A segunda lâmina com o esfregaço seco e com o nome demarcado com lápis foi corada com a coloração de Leishman durante 3 minutos, depois acrescentamos água destilada por mais 6 minutos e após esse tempo lavamos a lâmina com agua destilada e secamos a parte de trás da lâmina com álcool 70% , esperamos secar e levamos ao microscópio.
É importante frisar que todo o experimento foi feito com luvas para não haver perigo de contaminação.
Técnica de esfregaço de sangue
RESULTADOS
Os resultados do experimento foram parcialmente satisfatórios, segue imagens do microscópio das nossas laminas:
 
 
Realizando pesquisas, descobrimos importantes detalhes para a realização de um esfregaço confiável:
O esfregaço satisfatório deve ser fino e regular, de margens livres para se ter boa distribuição das células, dessa forma apresentará cabeça, corpo e cauda.
O ângulo da lâmina extensora em relação a que foi pipetado o sangue deve ser de 45° para que haja uma melhor distribuição sanguínea.
Os segundos que foram citados para mergulhar a lâmina no fixador e nos corantes devem ser rigorosamente seguidos para que não estrague os componentes do sangue.
A maior dificuldade com o experimento proposto foi a falta de prática, o que pode ter influenciado nos resultados obtidos. Para realizar um esfregaço satisfatório é preciso de precisão em todas as etapas do experimento e a falta de experiência no manuseio dos utensílios prejudicou a visualização de algumas lâminas. O auxilio da professora foi de fundamental importância para a realização do esfregaço sanguíneo, pois ela guiou todos os passos do experimento.
CONCLUSÃO
Para que o esfregaço sanguíneo seja satisfatório se faz necessário uma boa técnica na realização dos métodos, pois vários fatores podem influenciar na visualização e identificação das células do tecido sanguíneo humano. Além da técnica do esfregaço, os procedimentos realizados com os corantes também são essenciais para a visualização e diferenciação dos vários tipos celulares que poderão ser encontrados no meio. Através disso, foi possível observar que as hemácias estão presentes predominantemente em relação às demais células. Os leucócitos em suas variedades estão presentes em menor número. Foram encontrados em maior número os linfócitos e neutrófilos, seguidos pelos eosinófilos e monócitos. Basófilos são raramente encontrados devidos sua função estar relacionada à promoção da resposta alérgica e ao aumento da defesa antiparasitos.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Coleta extensão sanguínea e coloração. Disponível em; https://social.stoa.usp.br/articles/0026/8329/Coleta__extens%C3%A3o_sanguinea_e_colora%C3%A7%C3%A3o_010313.pdf. Acesso em: 11/03/18
Corantes usados no esfregaço hematológico. Disponível em: https://www.biomedicinapadrao.com.br/2013/10/corantes-usados-no-esfregaco.html. Acesso em: 11/03/18
Esfregaço de sangue Hematologia. Disponível em: http://www.kasvi.com.br/esfregaco-de-sangue-hematologia/. Acesso em: 11/03/18