Exercicios de Biologia Molecular 2018(1)

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Exercícios de Biologia Molecular
RESOLUÇÃO
Considerando a sequência do DNA da amostra abaixo, e que essa amostra seja incubada com a enzima EcoRI, 
cujo sítio de reconhecimento é 5’- GAATTC-3’, responda:
5’ – CAGTGATCTCGAATTCGCTAGTAACGTTGAATTCGTAACTTTCCCT – 3’
a) número de sítios de Eco RI ............................................................................................................
b) número de fragmentos gerados após a clivagem...........................
c) tamanho do(s) fragmento(s) em pares de bases (pb)..................... 
As endonucleases de restrição são enzimas que reconhecem uma sequência específica de nucleotídeos do DNA e o digerem num ponto determinado. O emprego dessas enzimas no diagnóstico de doenças infecciosas, neoplásicas e hereditárias vem crescendo dia a dia, e está preconizado em alguns programas de saúde pública do Governo Federal. O esquema abaixo mostra a seqüência de bases reconhecida pela enzima Dde I, seu ponto de corte (representado pela seta) e dois fragmentos de DNA a serem examinados.
 CTNAG – sequência reconhecida pela Dde I; N = nucleotídeo qualquer
 Fragmento 1: ... ACT CCT GAG GAG....
 Fragmento 2: …ACT CCT GTG GAG…
Considerando a especificidade da enzima e os fragmentos em estudo, e sabendo que o fragmento 1 é o normal e o fragmento 2 representa uma mutação, qual o padrão da corrida eletroforética dos fragmentos resultantes da digestão do DNA de um indivíduo normal e de um indivíduo homozigoto doente?
a) Normal = 1 banda; mutante = 1 banda.
b) Normal = 1 banda; mutante = 2 bandas.
c) Normal = 2 bandas; mutante = 1 banda.
d) Normal = 2 bandas; mutante = 2 bandas.
e) Não é possível detectar a mutação nestes fragmentos.
 
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O fragmento a seguir foi observado após amplificação de segmento do gene FACTOR V, que codifica o fator V de coagulação:
Alelo normal:
GGGCTAATAGGACTACTTCTAATCTGTAAGAGCA
GATCCCTGGACAGGCGAGGAATACAGGTATTTTG
TCCTTGAAGTAACCTTTCAGAAATTCTGAGAATT
TCTTCTGGCTAGAACATGTTAGGTCTCCTGGCTAA
ATAATGGGGCATTTCCTTCAAGAGA
 
Alelo mutado 
GGGCTAATAGGACTACTTCTAATCTGTAAGAGCA
GATCCCTGGACAGGCGGGGAATACAGGTATTTTG
TCCTTGAAGTAACCTTTCAGAAATTCTGAGAATT
TCTTCTGGCTAGAACATGTTAGGTCTCCTGGCTAA
ATAATGGGGCATTTCCTTCAAGAGA
a) Qual o tamanho do fragmento de DNA?
b) Usando a enzima MnlI (GAGGNNNNNNN), como seria o padrão eletroforético das digestões para os indivíduos normais(AA), heterozigoto (AG) e para os indivíduos homozigotos afetados (GG)? 
c) Indicar o tamanho dos fragmentos e representa-los em gel de agarose.
 
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