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TECNOLOGIA GENÉTICA: DIAGNÓSTICO MOLECULAR E BIOINFORMÁTICA SIMULADO Respostas em Negrito, Itálico e Vermelho Assinale a alternativa correta: 1. A Genética Forense é uma ciência que cada vez mais tem auxiliado o direito na identificação de pessoas, investigação de parentesco e elucidação de crimes. De acordo com esta ciência, tem-se o seguinte: a) o DNA mitocondrial, por sua conformação circular e localização extracromossômica, tem utilidade em grandes desastres; b) o DNA mitocondrial, por sua conformação linear e localização cromossômica, tem utilidade em grandes desastres; c) o DNA mitocondrial, por sua conformação linear e localização extracromossômica, tem utilidade em grandes desastres; d) o DNA mitocondrial, por ser muito sensível, não tem utilidade em grandes desastres 2. Analise as afirmações abaixo. I - PCR pode ser feito a partir de amostras com pouco DNA dos indivíduos, já que a técnica possibilita a amplificação de sequências específicas de DNA. II - O resultado revela que SP não deve ser o pai da criança, já que uma das bandas de DNA deste não é encontrada no DNA da criança. III - Microssatélites são regiões do genoma nas quais ocorrem repetições de sequências nucleotídicas e por isso cada locus pode resultar em variações de tamanho nos indivíduos testados. M F SP Está correto o que se afirmar em (A) II, somente. (B) I e II, somente. (C) I e III, somente. (D) II e III, somente. (E) I, II e III. 3. As endonucleases de restrição são enzimas que reconhecem uma sequência específica de nucleotídeos do DNA e o digerem (cortam) num ponto determinado. O emprego dessas enzimas no diagnóstico de doenças infecciosas, neoplásicas e hereditárias vem crescendo dia a dia, e está preconizado em alguns programas de saúde pública do Governo Federal. O esquema abaixo mostra a sequência de bases reconhecida pela enzima Dde I, seu ponto de corte (representado pela seta) e dois fragmentos de DNA a serem examinados. Considerando a especificidade da enzima e os fragmentos em estudo, e sabendo que o fragmento “A” é o normal e o fragmento “S” representa uma mutação, qual a representação do resultado da corrida eletroforética dos fragmentos resultantes da digestão do DNA de um indivíduo normal e de um homozigoto doente? (A) Normal = 1 banda; doente = 1 banda. (B) Normal = 1 banda; doente = 2 bandas. (C) Normal = 2 bandas; doente = 1 banda. (D) Normal = 2 bandas; doente = 2 bandas. (E) Não é possível diferenciar a mutação nestes fragmentos. 4 Preencha as lacunas. As enzimas de restrição podem gerar extremidades coesivas ou cegas 5. A bioinformática é uma ferramenta muito utilizada na Biologia Molecular. Um dos programas mais utilizados é o Blast (conforme figura abaixo) que tem como um de seus objetivos: a) Comparar uma sequência de DNA com uma de proteína, depositada no GenBank; b) Comparar uma sequência de DNA com outra, também de DNA, depositada no GenBank; c) Comparar uma sequência de proteína com outra de DNA, depositada no GenBank; d) Converter uma sequência de RNA em outra de DNA; e) Converter uma sequência de DNA em outra de RNA. Questões dissertativas: 1) Diferencie marcadores moleculares do tipo STRs e VNTRs. Os STRs são unidades de repetição que tem 2 a 10 NT e os VNTRs 11 a 149 NT 2) Quais técnicas são utilizadas para a análise de marcadores moleculares do tipo STRs? Os marcadores STR podem ser analisados após amplificação pela técnica PCR Multiplex, Eletroforese Capilar, Eletroferograma. 3) Quais técnicas são utilizadas para a análise de marcadores moleculares do tipo VNTRs? Os marcadores VNTR são analisados através da técnica RFLP ou Southern-Blotting. 4) Quais são as palavras-chave que devem estar presentes em um laudo de identificação genética, quando o exame vinculou a amostra pesquisada à amostra referência e quando não vinculou? Inclusão ou exclusão e inconclusivo 5) O que é multiplex PCR e como esta técnica de correlaciona com a Genética Forense? A reação em cadeia da polimerase para amplificar várias sequências de DNA diferentes simultaneamente. Esse processo amplifica o DNA em amostras usando vários iniciadores e uma polimerase de DNA mediada por temperatura em um termociclador. 6) O que é enzima de restrição e qual a sua função? São enzimas que clivam o DNA em pontos específicos. A função é fragmentar os filamentos de DNA para estudos ou pesquisas 7) Como se define unidade enzimática para uma enzima de restrição? Uma unidade enzimática é a quantidade para clivar 1 Ug de DNA em uma hora. 8) O que é RFLP? Explique. O RFLP (Polimorfismo no Comprimento de Fragmentos de Restrição) é uma técnica da biologia molecular que analisa pedaços de DNA que foram cortados por enzimas de restrição (esses pedaços são chamados de fragmentos de restrição). Utilizada para comparação de genomas. 9) Nos testes de paternidade, como os ensaios de hibridização com sondas de DNA podem ser úteis? As sondas de DNA de VNTRS apontam vínculo genético entre genomas de parentes ou supostos parentes em ensaios de hibridização. Tratam-se de sequencias repetitivas em alelos presentes nos cromossomos herdados do pai e da mãe. 10) O que é um autoradiograma? Autograma é um filme de raio X ou chapa fotográfica, que revela o resultado do Southern-Blotting. 11) Escreva uma frase que use as palavras DNA, digestão, enzima de restrição, transferência, auto- radiograma. O DNA sofre uma digestão com enzimas de restrição, cujos fragmentos gerados são separados por eletroforese. Estes fragmentos são submetidos à uma transferência para uma membrana de Nylon ou nitro celulose, passando uma uma hibridização com sondas radioativas. O resultado deste experimento é revelado em autorradiograma.
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