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Laboratório de Fitopatologia (aula 6) 
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UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO 
DEPARTAMENTO DE PRODUÇÃO VEGETAL 
FITOPATOLOGIA BÁSICA (DPV 05382) 
 
LABORATÓRIO DE FITOPATOLOGIA (aula 6) 
 
Prof. Celson Rodrigues 
 
MÉTODO DE MICROCULTURA (cultura em lâmina) 
 
1. INTRODUÇÃO 
 
Algumas estruturas fúngicas são frágeis ou sua natureza é de difícil interpretação. Para a 
sua visualização foi desenvolvida uma técnica que permite o mínimo de interferência. Ela se 
tornou fundamental para o estudo de diversos hifomicetos e alguns celomicetos, sendo 
particularmente útil para a visualização de apressórios em fungos como os pertencentes ao 
gênero Colletotrichum, cadeias de esporos e outras. 
 
2. PROCEDIMENTO 
 
a) Esterilize placas de Petri (180 °C, 2 h) contend o lâmina e lamínula para microscopia 
dispostos sobre bastão de vidro em “U” ou “V” (opcional). O fundo da placa deve conter 
um disco de papel de filtro, correspondente ao seu diâmetro total. 
 
b) Coloque um fragmento de meio de cultura (BDA) de cerca de 1 cm2 e 2 mm de 
espessura sobre a lâmina esterilizada, trabalhando em condições assépticas próximo à 
chama de uma lamparina ou bico de Bunsen. 
 
c) Utilizando alça microbiológica ou até mesmo estilete, previamente flambado e resfriado, 
inocule a parte central de cada um dos lados do quadrilátero de meio de cultura, com o 
fungo a ser cultivado (sempre trabalhando em condições assépticas). A cultura de origem 
deverá ser uma cultura pura, fornecida pelo instrutor. 
 
d) Cubra o quadrilátero de meio de cultura com a lamínula disponível na placa de Petri, 
exercendo ligeira pressão sobre a mesma, para justapô-la ao meio de cultura. 
 
e) Verta água destilada esterilizada no papel de filtro do fundo da placa, volume suficiente 
para o seu umidecimento, sem contudo encharcá-lo. Tal procedimento visa evitar o 
dessecamento do meio de cultura durante o período de incubação, e propiciar condições 
de elevada UR para o desenvolvimento do fungo. 
 
f) Etiquete a placa com o nome do operador, nome do fungo e a data da montagem da 
microcultura. 
 
g) Passe um filme de PVC ou similar ao redor da placa para ajudar a evitar a desidratação e 
a contaminação advinda do meio externo e, proceder à incubação a 28°C. 
 
h) Após um período de incubação de 3-7 dias a lâmina e lamínula já apresentarão vestígios 
de crescimento fúngico. 
 
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Laboratório de Fitopatologia (aula 6) 
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i) Abra a placa e retire a lamínula cuidadosamente de cima do bloco de meio com uma 
pinça e deposite sobre uma lâmina limpa, onde já terá sido depositada uma gota do 
líquido de montagem. Exerça uma leve pressão sobre a lamínula e retire, com papel 
absorvente, o excesso do líquido porventura presente nos bordos da lamínula (evita que 
suje a lentes das objetivas do microscópio). 
 
j) Descarte o bloco de meio que ficou sobre a lâmina da microcultura e pingue, sobre o lugar 
onde ele estava, uma gota do líquido de montagem. Deposite uma lamínula sobre o local, 
exerça leve pressão sobre a mesma e, retire o excesso do líquido de montagem 
porventura presente nos seus bordos, utilizando papel absorvente. 
 
k) Remova com papel absorvente, com bastante cuidado, possíveis gotas de água 
condensadas sobre as lâminas e ou lamínulas. 
 
l) Examine ao microscópio, cuidadosamente, as estruturas vetetativas e reprodutivas do 
fungo cultivado, prestando atenção às formações esporogênicas. 
 
m) As lâminas de boa qualidade devem ser lutadas com esmalte ou base incolor, 
etiquetadas com o nome do fungo, data e nome do operador, e entregues ao instrutor. 
 
 
 
3) SEQUENCIA VISUAL DA MONTAGEM DA MICROCULTURA 
 
 
 
 
 
 
 
 
4. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA 
 
AGRIOS, G.N. Introduction. In: AGRIOS, G.N. Plant pathology. 5 ed. San Diego: Elsevier 
Academic Press, 2005. 
ALFENAS, A.C.; MAFIA, R.G. (edt). Métodos em fitopatologia. Viçosa: Ed. UFV, 2007. 
MENEZES, M.; ASSIS, S.M.P. Guia prático para fungos fitopatogênicos. Recife: UFRPE, 
Imprensa Universitária, 2004.