Aula Microtomia

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Disciplina: Histologia e Processamento de Tecidos Moles I
Professora: Andrea Fernanda R. de Paula
Universidade Federal da Paraíba
Centro de Ciências da Saúde
Escola Técnica de Saúde
MICROTOMIA
MICROTOMIA
- Técnica de cortar delgadas seções de tecido (cortes histológicos) para
estudo microscópico
- Para permitir a execução de cortes finos é necessário que os fragmentos de
tecidos sejam previamente tratados
DESIDRATAÇÃOCOLETA DO MATERIAL FIXAÇÃO
DIAFANIZAÇÃO
IMPREGNAÇÃO PELA 
PARAFINA
INCLUSÃO
MICROTOMIA
Micrótomo (micro= pequeno + tomo= cortar)
Aparelho especializado para execução cortes histológicos
- Unidade de medida: micrômetro (µm)
cada micrômetro corresponde à
milésima parte de 1 milímetro
(0,001mm)
- Espessura para cortes em microscopia
varia de 3 a 20 µm.
-São sempre aparelhos pesados (20 a 30 kg) que devem ficar dispostos 
em mesas ou balcões para evitar trepidações 
Micrótomo: partes fundamentais
2) Carro da faca:
fixação e movimentação 
da navalha; movimento 
horizontal: para 
frente/atrás
1) Carro porta-objeto:
dispositivo onde se aloja 
a peça; movimento 
vertical: cortar – para 
cima/baixo
Micrótomo rotativo
Micrótomo rotativo de 1905
Micrótomo de 1901, 
espanhol Ramón y Cajal 
Micrótomos antigos
Micrótomo de 1905
TIPOS DE MICRÓTOMOS
Micrótomo rotativo 
ou modelo Minot
Criostato
Micrótomo de corrediça
Ultramicrótomo
Fonte: www.lupe.com.br
Micrótomo rotativo semi-automático
MICRÓTOMO ROTATIVO: ESPECIFICAÇÕES DO APARELHO
Indicação da 
espessura do corte Botão de controle
para ajuste de
espessura de
cortes
Alavanca de 
fixação do 
porta -navalha
Porta -navalha
Bloco de 
parafina
Protetor da 
navalha
Base do porta –
navalha com recurso 
para deslocamento 
lateral
Alavanca de 
fixação para a 
base do porta-
navalha
Alavanca de 
fixação para a 
função de 
deslocamento 
lateral do porta-
navalha
Alavanca para
ativar a função 
de aparagem
mecânica
Roda de
avanço
horizontal
Prendedores 
de amostras
Lateral direita do micrótomo rotativoLateral direita do micrótomo rotativo
Lateral direita do micrótomo rotativo
1 - Roda de mão
2 - Freio da roda de mão
- A roda de mão pode ser travada na
posição de 12 horas por meio do cabo da
roda de mão.
- EMPURRAR P/ ESQUERDA: TRAVA /
DIREITA: DESTRAVA
-Mecanismo de freio permite que você
trave a roda de mão em qualquer
posição por meio da alavanca de
travamento integrada à base da placa
● TRAVA ○ DESTRAVA
Lateral direita do micrótomo rotativo
Alavanca de fixação do 
porta - navalha
Alavanca de fixação do 
ângulo de afastamento
Medida do ângulo de 
afastamento - 5°
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
1. FIXAÇÃO DA AMOSTRA
Blocos de parafina etiquetados e
dispostos em um recipiente com
gelo
Orientação da amostra: Face da amostra a ser cortada voltada para frente
do observador
1.1 Gire a roda de mão até que o prendedor de amostras fique
na posição mais elevada possível. Trave a roda de mão na
posição de 12 horas
1.2 Insira o bloco da amostra no prendedor de amostras.
Aperte até fixar o bloco.
1. FIXAÇÃO DA AMOSTRA
Prendedor da 
amostra
Bloco de parafina
- Prenda sempre o bloco
da amostra ANTES de
prender a navalha.
2. INSERÇÃO DA NAVALHA 
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
2.1 Insira a navalha ou a lâmina descartável com cuidado no porta-navalha e 
prenda-a.
Alavanca de fixação 
do porta -navalha
Obs.
- Cuidado ao manusear as
navalhas, seus gumes são
extremamente afiados e podem
causar lesões graves
-A superfície da navalha não
deve possuir impurezas
-Trave a roda de mão e cubra o
fio da navalha com o protetor de
navalha antes de qualquer
manipulação da navalha ou da
amostra*** Navalha 
descartável em 
aço (80x14mm) 
cx/50 un.
3. AJUSTE DO ÂNGULO DE AFASTAMENTO
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
3.1 Gire a alavanca em sentido anti-
horário para liberação
3.2 Mova o porta-navalha até que a
marca indicadora do ângulo de
afastamento desejado coincida com a
linha de referência na base do porta-
navalha
Medida de 4 a 5º -
Ajuste do ângulo de
afastamento da
navalha mais usado
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
4. APARAGEM DA AMOSTRA (1°DESBASTAR)
Obs. Antes de iniciar as etapas dos cortes, é importante verificar se todas
as alavancas de fixação do micrótomo estão presas
Roda de avanço horizontal
(retirar o excesso de parafina 
até se alcançar o material)
Função: usado para o
movimento horizontal rápido
da amostra - avançando em
direção à navalha - e
voltando, para longe da
navalha
Sentido do movimento
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
4. APARAGEM DA AMOSTRA (1° DESBASTAR)
4.1 Aparagem da amostra com o avanço horizontal
Gire a roda de avanço horizontal para que a amostra se 
aproxime gradualmente da navalha
- Selecione uma espessura
de corte apropriada para a
aparagem (ex. 10 μm)
utilizando o botão de seleção
de espessura de corte.
- Libere o mecanismo de
freio pela alavanca. Gire a
roda de mão até que a
amostra tenha sido aparada
até o plano desejado.
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
4.2 Aparagem com a função de aparagem mecânica
- Selecione o valor de aparagem desejado.
Os dois pontos marcam as duas posições de 
aparagem:
● 10 μm ●● 50 µm
- Apare a amostra girando a roda de mão até 
atingir o plano desejado.
- No final libere o acionador de aparagem
Gire a roda de avanço horizontal para 
que a amostra se aproxime 
gradualmente da navalha
5. SECIONAMENTO – 2º Corte
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
5.2 5.1
5.1 Use o botão de ajuste do micrótomo
para selecionar a espessura desejada
de corte ( 4 ou 5 µm)
5.2 Marca de referencia vermelha
corresponde ao valor selecionado para
espessura.
Obs. Faça cortes histológicos usando uma parte
diferente do fio da lâmina daquele usado para aparagem
5. SECIONAMENTO – 2º Corte
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
5.4 Inicie o secionamento girando a
roda de mão de maneira uniforme e
em sentido horário
▶ Consistência do material 
+ sólido > velocidade de rotação
+ flexível < velocidade de rotação
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
6. OBTENÇÃO DOS CORTES FINAIS – término da microtomia
Selecionar os cortes mais
íntegros com o auxílio de
uma pinça, a qual facilita a
manipulação da fita
formada
Defeitos nos cortes durante a microtomia
Problemas Principais causas
Fitas de cortes curvas ou
irregulares
A navalha e o bloco não estão paralelos.
Borda de corte da navalha irregular. Parafina 
misturada não homogeneamente ou impura
Cortes comprimidos, irregulares
ou pregueados
Navalha mal afiada; Ângulo irregular da 
navalha; Parafuso do micrótomo solto
Fragmentação dos cortes ou
rasgados
Inclusão imperfeita; Parafina quente demais 
durante a infiltração ou inclusão
Arranhaduras nos cortes ou
cortes divididos em segmentos
Parafina suja (não filtrada durante a inclusão);
Sujeira no bloco ou na navalha; Dente na faca
6. DISTENSÃO DOS CORTES E TRANSFERÊNCIA PARA AS LÂMINAS
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
6.1 Retirar a fita do micrótomo com o
auxílio da pinça ou pincel
6.2 Transfira a fita para uma solução
intermediária (água destilada com 30%
de álcool etílico) para facilitar o
estiramento do corte
6.3 Realize a pescaria dos cortes com
auxílio de lâminas
6.4 Transfira os mesmos para o banho-
maria (40°C) – Banho histológico
6.1
6.2
6.4
6.3 (40°C
6.5 Realize a “pescaria” dos cortes
que estão no banho histológicocom auxílio de lâminas limpas.
Coloque as lâminas em um suporte
para secar na estufa
6. DISTENSÃO DOS CORTES E TRANSFERÊNCIA PARA AS LÂMINAS
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMO
- Estufa aquecida a 60 °C para retirar o
excesso de parafina e melhorar a adesão do
corte a lâmina (10 a 15 minutos)
Etapas seguintes: 
coloração e 
montagem
ETAPAS DA UTILIZAÇÃO DO MICRÓTOMORelembrando ...
FIXAÇÃO 
DA AMOSTRA
INSERÇÃO 
DA NAVALHA 
AJUSTE DO ÂNGULO 
DE AFASTAMENTO
APARAGEM DA AMOSTRA 
(1°DESBASTAR)
SECIONAMENTO 
(2º Corte)
OBTENÇÃO DOS CORTES 
FINAIS – término da 
microtomia
DISTENSÃO DOS 
CORTES E 
TRANSFERÊNCIA 
PARA AS 
LÂMINAS 
Limpeza do micrótomo
▶ Não se deve fazer durante a limpeza do micrótomo
• Jamais abra o equipamento para limpeza. Nenhum líquido poderá
penetrar no interior do aparelho durante a limpeza.
•Não limpe as superfícies externas com álcool ou com produtos de
limpeza à base de álcool (limpa-vidros!), nem com produtos abrasivos ou
com solventes que contenham acetona ou xilol.
As superfícies esmaltadas não são resistentes a acetona ou a xilol
▶ O que se deve fazer durante a limpeza do micrótomo
•Travar a roda de mão antes de iniciar a limpeza do aparelho
•Retirar a lâmina ou a navalha do porta-navalha e insira no recipiente
para lâminas usadas na base do dispensador de lâminas ou guarde no
estojo de navalhas
•Retirar o porta-navalha e a base do porta-navalha para limpeza
•Retirar os resíduos de cortes com um pincel seco
Limpeza do micrótomo
 - Superfícies esmaltadas externas podem ser limpadas com um produto
suave para limpeza doméstica ou com água e sabão; em seguida,
deverão ser secadas com um pano
Limpeza do micrótomo
▶ O que se deve fazer durante a limpeza do micrótomo
- Todo ambiente de trabalho deverá ser limpo
Advertências referentes ao transporte do micrótomo
•O aparelho somente poderá ser transportado na posição vertical
•Ao transportar, nunca segure o aparelho pelos cabos das rodas de mão
ou da roda de avanço horizontal, nem pelo botão para ajuste de espessura
de cortes
• Travar roda de mão e retirar a amostra e navalha
•Não se deve remover, nem modificar os dispositivos de proteção, tanto
do aparelho como de seus acessórios