Métodos de Estudo em Patologia

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Métodos de Estudo em Patologia
Profa Renata Manfrinato
Patologia
Patologia (derivado do grego pathos: sofrimento, doença; logus: ciência, estudo).
 
Compreende o estudo das doenças, visando compreender as alterações estruturais (morfológicas) e funcionais das células, dos tecidos e dos órgãos que estão ou podem estar sujeitos a doenças. 
 
Classificação da Patologia
Patologia geral: Está envolvida com as reações básicas das células e tecidos aos estímulos anormais provocados pelas doenças. 
Patologia especial: Examina as respostas específicas de órgãos especializados e tecidos a estímulos mais ou menos bem definidos. 
Áreas da Patologia
A patologia engloba áreas diferentes como: 
1) Etiologia: estuda as causa das doenças. 
2) Patogenia: é o processo de eventos do estímulo inicial até a expressão morfológica da doença. 
3) Alterações morfológicas: alterações estruturais em células e tecidos características da doença ou diagnósticas dos processos etiológicos. Pode ser visualizado macro ou microscopicamente. 
4) Fisiopatologia: Estuda os distúrbios funcionais e o significado clínico. A natureza das alterações morfológicas e sua distribuição nos diferentes tecidos influenciam o funcionamento normal e determinam as características clínicas, o curso e também o prognóstico da doença.
Métodos de Estudo em Patologia
1- Citopatologia - método que consiste, no estudo das células isoladas. As células são obtidas para análise microscópica através de raspados (células isoladas, em geral descamadas de pele e mucosas) ou obtidas de líquidos naturais do corpo, de secreções (da árvore traqueobrônquica, escarros, ...), de líquidos (urina,...)ou por punção aspirativa. 
Após a obtenção das células, essas são fixadas no álcool etílico 95% e vão para a etapa de coloração, tais como Papanicolau. Depois de coradas, tais células são estudadas com o objetivo de ser detectadas as lesões citológicas pré-malignas. Normalmente, citologias mais comuns são: Cérvico-vaginal, Tireoide, Mama, Escarro, e líquidos(Ascítico, Pleural, etc).
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Quando é feito para um rastreamento de lesões pré-malignas ou diagnóstico de lesões malignas, muitos patologistas ainda fornecem o resultado de acordo com a classificação proposto por Papanicolaou.
Classe 0
Material inadequado ou insuficiente para o diagnóstico. Deve-se repetir a colheita.
Classe I
Ausência de alterações citológicas. Esfregaço normal.
Classe II
Presença de atipias celulares, porém não associadas a malignidade.
Refere-se em geral a processos inflamatórios
Classe III
Esfregaço duvidoso para malignidade.
Classe IV
Esfregaço sugestivo, mas não conclusivo de malignidade.
Classe V
Esfregaço positivo para malignidade
 
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2- Biópsia é o estudo do tecido (Histológico). É um exame que permite muitos diagnósticos na prática médica e orienta(define) tratamentos. 
A biópsia pode ser excisional ou ablativa quando se faz a retirada de toda a lesão ou incisional quando se retira apenas uma parte para diagnóstico. 
Após a retirada o tecido para a análise, que pode ser pequenos fragmentos de qualquer órgão ou peças cirúrgicas, este é mergulhado em formol a 10% e depois vai para processamento histológico, etapa que dura cerca de 24-48h.
Métodos de Estudo em Patologia
Exame histopatológico
Processamento dos fragmentos. 
Desidratação gradativa em álcoois
Diafanização em xilol
Impregnação e inclusão em parafina
Corte dos fragmentos em micrótomo.
Desparafinização
Coloração
A coloração universal é a de hematoxilina-eosina (HE).
Com frequência a necessidade de colorações especiais ou histoquímicas.
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Exame microscópico
O mais utilizado é o microscópio óptico (MO) (aumento cerca de 1.000 x)
Existem dispositivos especiais para análise de certos tipos de partículas
Microscópio de luz polarizada
Microscópio de campo escuro
Microscópio de contraste de fase
Microscópio invertido
Microscópio de fluorescência
Microscópio de varredura confocal a laser
Microscópio comum acoplado a um sistema digital a laser que ativa luz fluorescente de diferentes comprimentos de onda. Permite a análise morfológica em planos de diversas profundidades.
Microscópio Eletrônico (ME)
Grande poder de aumento, aumentos de até 1.000.000 x
Dispendioso, aplicado na maioria das vezes para fins de investigação científica
Métodos de estudo em Patologia
3- Biópsia de Congelação: Método que fornece resultados mais rápidos, porém, menos precisos(cerca de 15-20 minutos), sendo realizada por intermédio de um aparelho(Criostato) que congela o tecido enviado sem formol, com o paciente sendo operado no centro cirúrgico e a equipe de cirurgia esperando pelo resultado. É um exame de muita responsabilidade. 
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4- Necropsia ou autópsia: Necropsia ou autópsia significa o exame post mortem sistemático dos órgãos ou de parte deles para se determinar a causa de morte e conhecer lesões e doenças existentes no indivíduo. Necropsia é um exame que ajuda e muito no sentido epidemiólogico, alertando para os problemas de saúde mais comuns de determinada população e visando a melhorar a qualidade de vida do povo, combatendo as mazelas que provocam morbidade e mortalidade. 
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Classificação da Necropsia:
A- Necropsia médico-científica
Com o surgimento das inúmeras técnicas de diagnóstico por imagem houve declíneo no interesse pela realização das necropsias. Mas apesar dos progressos destes recursos, a discordância entre os diagnósticos clínicos ainda varia de 10 a 50% nos bons centros médicos em vários países. Assim a necropsia continua sendo um procedimento de grande valor para o aprimoramento do trabalho médico.
 
B- Necropsia médico-legal
Objetivo fundamental é determinar a causa de morte. É obrigatória por lei em certas condições, sobretudo quando se trata de morte violenta (homicídio, suicídio, acidentes de trânsito, acidentes de trabalho, etc...). Nestes casos, além da retirada de órgãos para exame morfológico, faz-se coleta de sangue e de secreções para análise toxicológica.
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5- Imunocitoquímica
Conjunto de procedimentos que utilizam anticorpos como reagente específicos para detecção de antígenos presentes em células ou tecidos.
6- Citometria: Consiste na determinação quantitativa de componentes celulares. Existem dois métodos: A citofotometria (citometria estática) onde uma estrutura ou componente celular é corado por meio de uma reação histoquímica. Quando colocado no caminho de um feixe luminoso, há interferência na passagem da luz. Um sensor capta e quantifica a quantidade de luz que chega. Comparado com a quantidade de luz que por uma estrutura não corada, pode-se saber a quantidade da substância presente na amostra que reagiu com o agente. Outro tipo de citometria é a citometria de fluxo, sendo uma técnica mais avançada, porém dependente de equipamentos especializados e de elevado custo. A citometria de fluxo é realizada em células em suspensão. A células são tratadas com um fluorocrômios que se liga especificamente a estrutura de interesse, o qual depois é reconhecido e quantificado por um sensor. As células tratadas são passadas em alta velocidade em um canal de tamnnho apropriado, de modo que apenas uma célula de cada vez possa ser reconhecida pelo sensor. a intensidade do fluorocrômio é captada é tranfirida para o computador, que faz cálculos necessários e fornece resultados quantitativos. Pode se separa células com determinados parâmetros (volume, por exemplo). Milhares de células podem ser analisadas em poucos minutos.
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7- Auto-radiografia
Procedimento que permite a identificação de elementos radioativos incorporados a células ou tecidos. O método depende da administração a um animal ou células em cultura de um precursor de uma determinada substância marcado com um isótopo radioativo. Cortes histológicos ou esfregaços celulares feitoscom amostras marcadas com isótopo radioativo são cobertos com uma película de emulsão fotográfica e ficam mantidos no escuro por dias. Após este período as preparações são reveladas pelos procedimentos convencionais de fotografia e em seguida contracoradas. Nas estruturas que contém o radioisótopo aparecem grãos negros de prata metálica gerada pela ação das radiações sobre o brometo de prata contido na emulsão. A aplicação mais frequente é nos estudo de distúrbios do crescimento celular, notadamente nas neoplasias.
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8- Biologia Molecular
Em conjunto os procedimentos de biologia molecular visam detectar sequências particulares de ácidos nucléicos, que podem representar um microrganismo patogênico (vírus, bactérias...) ou a estrutura e expressão de genes específicos (mutações oncogenes...). Tem aplicação no estudo de neoplasias, de doenças genéticas e de doenças infecciosas.