aula 1 tecnicas histologicas

Prévia do material em texto

*
Histologia
Prof. Felipe Leite de Oliveira
Universidade Federal do Rio de Janeiro
Instituto de Ciências Biomédicas
Programa de Graduação de Histologia
Laboratório de Proliferação e Diferenciação Celular
Bloco F. 2º andar. Sala 01
felipe@histo.ufrj.br
 
*
Técnicas Histológicas
 
 Preparação dos tecidos analisados através da microscopia de luz. 
 O exame ao microscópio é feito geralmente por luz transmitida
 A luz deve atravessar o objeto a ser examinado
 É necessária a obtenção de fragmentos (pedaços pequenos) dos tecidos estudados
 
 Os fragmentos são coletados em lâminas muito finas e transparentes.
*
Microscópio óptico
oculares
objetivas
mesa
Micrométrico 
Macrométrico 
Luz incidente
base
*
MICROSCÓPIO
ÓPTICO
*
MICROSCÓPIO
ELETRÔNICO
*
MICROSCÓPIO
ELETRÔNICO
*
Microscópio óptico
luz
*
Visão Geral do Processamento de Tecidos 
Os tecidos devem ser preparados de modo a preservar sua estrutura original. 
Todos os preparados apresentam artefatos (alterações nas células)‏
Etapas das técnicas histológicas:
 - fixação dos tecidos
 - desidratação
 - inclusão
 - microtomia (corte em fatias finas)‏
 - coloração
 - montagem de lâminas
*
OBTENÇÃO DO MATERIAL E FIXAÇÃO 
Obtenção: retirada de pequenos pedaços dos órgãos a serem analisados
Objetivos da fixação 
- Preserva as estruturas do tecido para os tratamentos posteriores
- Impede a proliferação de microorganismos
- Mantém as estruturas próximas à realidade
Fixador: 
- Substância utilizada para fixar os tecidos
- Deve causar o mínimo de dano aos tecidos 
- Varia de acordo com o material que irá ser usado nas análises
- Ex: glutaraldeído, formol e formaldeído são os mais utilizados
 
*
DESIDRATAÇÃO , INCLUSÃO E MICROTOMIA 
Objetivos 
A espessura do tecido a ser analisado na lâmina deve ser delgado (muito fino)‏
O material deve ser atravessado por um raio de luz
Os tecidos devem ser preparados para receber um meio “endurecedor” (inclusão)‏
*
DESIDRATAÇÃO , INCLUSÃO E MICROTOMIA 
Desidratação: 
 - imersão numa bateria de soluções alcoólicas (concentrações crescentes)‏
 - substituição da água pelo álcool
Diafanização: 
 - imersão numa bateria de soluções com xilol
 - substituição do álcool pelo xilol
Inclusão em parafina: 
 - imersão numa bateria de parafina líquida
 - substituição do xilol pela parafina líquida
Emblocamento:
 
 - resfriamento da parafina líquida
 - endurecimento do material biológico
 - pronto para a microtomia (cortes ultrafinos)‏
*
MICRÓTOMO
*
Tecido a ser analisado aderido na lâmina de vidro
*
Microscópio óptico
luz
*
COLORAÇÃO 
Objetivo da coloração:
 Os cortes de tecidos apresentam-se incolores após a microtomia
 A coloração visa contrastar as estruturas teciduais
 A maioria dos corantes age de acordo com as interações entre substâncias ácidas ou básicas presentes no citoplasma das células
 Ex: Hematoxilina e Eosina
 Hematoxilina – corante básico, tem afinidade por regiões ácidas da célula
 Eosina – corante ácido, tem afinidade por regiões básicas da célula
*
Lâminas coradas com hematoxilina e eosina
*
Tricromo de Gomori
Verhoeff-van Gieson 
*
PAS
Mallory 
*
Imuno-histoquímica
Microscópio óptico
Microscópio de fluorescência
*
Princípios da imuno-histoquímica 
*
Princípios da imuno-histoquímica 
*
Princípios da imuno-histoquímica 
*
Princípios da imuno-histoquímica 
*