Aula prática 6 relatório 5 Extração do DNA de células do bulbo da cebola (Allium cepa)

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Relatório V
Aula prática 6
Extração de DNA de células do bulbo da cebola (Allium cepa)
Disciplina: Citologia 
Professor: Dr. José Aliçandro Bezerra da Silva
Introdução
O ácido desoxirribonucléico é um composto orgânico cujas moléculas contêm as instruções genéticas que coordenam o desenvolvimento e funcionamento de todos os seres vivos e alguns vírus. O seu principal papel é armazenar as informações necessárias para a construção das proteínas e RNA. Os segmentos de DNA responsáveis por carregar a informação genética são denominados genes. O restante da seqüência de DNA tem importância estrutural ou está envolvido na regulação do uso da informação genética. 
A molécula de DNA consiste em duas cadeias de nucleotídeos dispostas em hélice em torno de um eixo. As bases púricas e pirimídicas de cada cadeia polinucleotídica situam-se dentro da hélice dupla, em planos paralelos entre si e perpendiculares ao eixo da hélice (JUNQUEIRA & CARNEIRO, 2005).
Dentro da célula, o DNA pode ser observado numa estrutura chamada cromossoma. Antes da divisão celular os cromossomas são duplicados através de um processo chamado replicação. Eucariontes como animais, plantas e fungos têm o seu DNA dentro do núcleo enquanto que procariontes como as bactérias o têm disperso no citoplasma. Dentro dos cromossomas, proteínas da cromatina como as histonas compactam e organizam o DNA. Estas estruturas compactas guiam as interações entre o DNA e outras proteínas, ajudando a controlar que partes do DNA são transcritas. O DNA é responsável pela transmissão das características hereditárias de cada ser vivo.
O isolamento do DNA de material vegetal é uma etapa importante quando se tem por objetivo a análise da estrutura e organização do material genético das plantas. Diversas técnicas foram e vem sendo desenvolvidas para se obter ácidos nucléicos íntegros, sem modificações estruturais, e forma a beneficiar os estudos na área de biologia celular e molecular vegetal.
Estrutura de um DNA
Objetivo
Observar estruturas de DNA a partir de mecanismos de isolamento em laboratório.
Materiais e métodos
Cebola
Detergente sódio dodecil sulfato (SDS)
Água destilada
Banho Maria
Papel filtro
Álcool 99%
Cloreto de sódio
Balança analítica
Gelo
Béqueres
Funil
Álcool etílico comercial (ou etanol 95%) gelado
Tubo de ensaio
Procedimento
Picar 50g de cebola em quadrados de 5mm. Misturar em um béquer 10 mL de SDS 10%, 3g de NaCl e completar com água até obter 100 mL de solução. Agitar até dissolver. Juntar essa solução com a cebola e levar ao banho maria a 60 ºC pro 15 minutos. Resfriar rapidamente a solução no gelo, aguardando de 5 a 10 minutos. Agitar novamente. Coar a mistura em papel de filtro, excluir o material sólido, colocar o material líquido em um tubo de ensaio. Verificar o DNA precipitado no etanol.
Resultados e discussões
O NaCl se dissocia em íons Na+ Cl-, depois de imerso em solução. Tais íons interagem com os fosfatos das moléculas de DNA, neutralizando e estabilizando-as, possibilitando que o DNA se torne menos solúvel em água.
A função do detergente sódio dodecil sulfato é a de emulsionar gorduras; o SDS atua nas membranas que são formadas por fosfolipídios, desestruturando-as.
A maceração pode ser substituída pelo uso do liquidificador, sendo que seu uso é limitado a no máximo 5 segundos, pois pode haver degradação das moléculas de DNA.
 
A temperatura de 60 ºC por 15 minutos tem a função de desnaturar as proteínas, inclusive as DNases, além de degradar a parece celular e lisa da célula. O gelo em que é submetida a solução após o aquecimento serve para reduzir a quebra das moléculas de DNA.
 
O álcool etílico permite uma maior desidratação das moléculas. É possível a observação do DNA (emaranhado), que se apresenta por filamentos esbranquiçados; porém a observação das hélices só é possível através do uso de aparelhos sofisticados.
 
Conclusão
O DNA é material genético que compõe grande parte dos vírus e todos os organismos celulares. O armazenamento e a transmissão das informações genéticas é função primordial do DNA. O estudo do mesmo é importante para a identificação de doenças, bem como a sua posterior correção, além de proporcionar modificações com a finalidade de adaptação das espécies a determinados fatores externos, o que possibilita uma maior produtividade, se tratando de vegetais. Compreender como as plantas produzem o alimento que comemos é, portanto, importante para sermos capazes de alimentar o mundo e fornecer segurança alimentar para as futuras gerações, como exemplo através do cruzamento entre plantas.
Referências bibliográficas
JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO J. Biologia Celular e Molecular. Rio de Janeiro: 8ª ed. Guanabara. 2005.
ÁCIDOS desoxirribonucléico. Origem: Wikipédia, a enciclopédia livre. Wikipedia. Disponível em:
<http://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_desoxirribonucleico>
Acesso em 5 out. 2009
MENCK, Carlos Frederico Martins.Estudo de reparo de DNA e suas conseqüências biológicas. Projetos de pesquisa temáticos. Disponível em:
<http://www.bv.fapesp.br/projetos-tematicos/1865/estudos-reparo-dna-consequencias-biologicas/>
Acesso em 5 out. 2009
BOTÂNICA. Origem: Wikipédia, a enciclopédia livre. Wikipedia. Disponível em:
<http://pt.wikipedia.org/wiki/Bot%C3%A2nica>
Acesso em 5 out. 2009