Parede celular de bactérias gram + e gram

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PAREDE CELULAR DE BACTÉRIAS Gram + e gram -
Alunas: Fabiane Paulitsch, Larissa Medeiros, Maria Clara Urquiaga e Milena Serenato Klepa.
Prof.: Gerson 
 gram +
Parede celular de bactérias gram +
90% peptideoglicano
(até 25 camadas)
10% glicopolímeros e proteínas de parede
MADIGAN et al., 2016
ESTRUTURA DOS ÁCIDOS TEICÓICOS E LIPOTEICÓICOS
BROWN; SANTA MARIA e WALKER, 2013 
Ácidos teicóicos de parede ligados covalentemente a resíduos de ácido murâmico do peptideoglicano
Ácidos lipoteicóicos ligados covalentemente a lipídeos de membrana
Estrutura básica  polímeros de ribitol ou glicerol + fosfato + d – alanina + açúcares
Glicopolímeros
(WTA)
(LTA)
Função dos ácidos teicóicos e lipoteicóicos
WEIDENMAIER e PESCHEL, 2008
Mutantes de WTA e LTA mostraram redução da virulência em implantes pela baixa produção de biofilmes
Troca de prótons e afinidade com cátions bivalentes
Auxilia na disposição correta do maquinário de divisão celular
Disponibilizam cátions para a ação de autolisinas na divisão celular
Sítios de ligação para fagos e para receptores de hospedeiros 
Responsáveis parciais pela carga negativa da superfície celular
Susceptibilidade de substâncias antimicrobianas carregadas
AÇÃO DA lisozima
Imunidade inata
PROTOPLASTO
Técnica de coloração de Gram
Hans Christian Gram - 1984
Simples e rápida
Alta capacidade de resolução
Baixo custo com investimento e manutenção
Microscópio com objetiva de imersão
Lâmina com material fixado
Corantes, Solução mordente e Agente descolorante
Materiais necessários
Técnica de coloração de Gram
Metodologia Original
Metodologia Atual
Corante violeta-de-genciana
Corante violeta-de-metila
Mistura de solventes
Álcool etílico
Corante fucsina fenicada
Corante safranina
Pegar uma lâmina limpa e estéril;
Identificar o lado da lâmina onde será feito o esfregaço; 
Flambar a alça bacteriológica e colocar na lâmina uma gota de solução salina fisiológica;
Flambar a agulha bacteriológica e tocar a colônia escolhida para retirada da amostra;
Esfregar o material com movimentos de rotação da alça bacteriológica, para se obter um esfregaço de forma oval, bem fino e uniforme;
Assegurar que o esfregaço esteja seco.
1º Passo: Preparação da lâmina
2º Passo: Aplicação do cristal violeta
Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta de metila (corante roxo), aguardar um minuto;
 Lavar rapidamente em água destilada.
3º Passo: Aplicação da solução de iodo
 Cobrir a lâmina com solução de lugol (mordente) por um minuto;
Lavar em água destilada.
Qual o papel do Lugol?
Ele é um agente fixador, capaz de formar um complexo insolúvel de cristal violeta-iodo no interior da célula.
4º Passo: Aplicação de álcool absoluto
Inclinar a lâmina e gotejar álcool absoluto (cerca de 15 segundos);
Lavar a lâmina rapidamente com água destilada.
Qual o papel do Álcool?
Atua como agente descorante. Sua lavagem dissolve o complexo cristal violeta-iodo, e se a parede celular for permeável a este, arrasta-o para fora da célula.
5º Passo: Aplicação da safranina
Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos;
Lavar a lâmina em água destilada e secar (sem esfregar);
Colocar uma gota de óleo de imersão sobre a lâmina e observar em objetiva de imersão (1OOX).
Ação dos antibióticos na parede celular
Antimicrobianos β-lactâmicos: 
Presença de um anel β-lactâmico;
Têm a sua ação na fase final da biossíntese do peptidoglicano;
Atacam com maior facilidade as bactérias gram-positivas.
Vancomicina: liga-se à D-alanina-D-alanina inibindo, portanto a transpeptidação (ligação-cruzada). 
Ciclosserina: É um análogo da D-alanina e interfere na conversão enzimática da L-alanina em D-alanina no citoplasma
Bacitracina: Inibe a reação de desfosforilação e na ausência do carreador monofosforilado a síntese da subunidade do peptidoglicano para. 
Referências bibliográficas
MADIGAN, Michael T. et al. Microbiologia de Brock-14ª Edição. Artmed Editora, 2016.
BROWN, Stephanie; SANTA MARIA JR, John P.; WALKER, Suzanne. Wall teichoic acids of gram-positive bacteria. Annual review of microbiology, v. 67, p. 313-336, 2013.
WEIDENMAIER, Christopher; PESCHEL, Andreas. Teichoic acids and related cell-wall glycopolymers in Gram-positive physiology and host interactions.  Nature Reviews Microbiology, v. 6, n. 4, p. 276, 2008.
TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2003.