Varredura de tempo

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Varredura de tempo
Introdução
	A espectrofotometria, técnica largamente utilizada para dosagens de substâncias e reações em laboratórios clínicos e de pesquisa, requer alguns cuidados como o tempo de incubação ideal e comprimento de onda (ʎ) ideal. Com a técnica de varredura de tempo é possível definir o melhor tempo de incubação dos reagentes para que estes possam então ser utilizados. 
	O tempo de incubação ideal é aquele que corresponde à maior absorbância e, consequentemente, à maior concentração da substância dosada. 
Objetivo
	Determinar o melhor tempo de incubação dos reagentes para a dosagem de glicose através do kit da Labtest e comparar o resultado obtido com o tempo determinado pelo kit. 
Materiais 
Kit Glicose Liquiform Labtest (Referência: 133-1/500, Lote 3006, Validade 31/10/2014 )
Pipetas de 1000μl, 20μl e ponteiras correspondentes;
Banho-maria;
Estante;
Tubos de ensaio;
Espectrofotômetro;
Cubetas de vidro;
Luvas descartáveis;
Métodologia
Utilizamos como amostra o padrão do Kit. Fizemos um tubo de ensaio para o branco e um para o padrão. Adaptamos o volume descrito no kit para o volume das nossas cubetas que eram de 2,0ml, conforme mostra o quadro abaixo.
	
	Branco
	Teste
	Amostra
	-
	-
	Padrão
	-
	0,02ml
	Reagente 1
	2,0ml
	2,0ml
Agitamos vigorosamente a solução e sem incubar em banho-maria (recomendado pelo kit), medimos e anotamos as absorbâncias a cada minuto, zerando o aparelho com o branco entre as leituras. As leituras no espectrofotômetro foram feitas em um comprimento de onda de 505 nm, ideal para leitura da glicose, como indicado pelo kit, de 0 a 40 minutos. As anotações estão descritas no quadro abaixo. A seguir, o gráfico de absorbância por tempo, plotado a partir das anotações feitas.
	Varredura de tempo (ʎ = 505nm)
	Incubação (minutos)
	Abs padrão
	1
	0,126
	2
	0,130
	3
	0,133
	4
	0,086
	5
	0,078
	6
	0,149
	7
	0,151
	8
	0,155
	9
	0,152
	10
	0,158
	11
	0,162
	12
	0,160
	13
	0,163
	14
	0,166
	15
	0,166
	16
	0,166
	17
	0,166
	18
	0,169
	19
	0,169
	20
	0,167
	21
	0,167
	22
	0,167
	23
	0,168
	24
	0,169
	25
	0,172
	26
	0,169
	27
	0,166
	28
	0,170
	29
	0,172
	30
	0,168
	31
	0,172
	32
	0,168
	33
	0,171
	34
	0,168
	35
	0,169
	36
	0,171
	37
	0,168
	38
	0,167
	39
	0,170
	40
	0,168
Discussão e conclusão
	A partir do gráfico observamos que após os 13 minutos a absorbância se apresenta em platô se mantém em platô, com valores muito próximos. Além disso observamos que após os 30 minutos começa a ter uma instabilidade maior nas medições. No entanto, o tempo de incubação ideal dos reagentes do kit Glicose Liquiform da Labtest é de 10 minutos. 
	É importante ressaltar que as condições do nosso experimento não foram idênticas ao procedimento de dosagem de glicose, pois nesse caso é necessário incubar os tubos com os reagentes em banho-maria a 37°C. Para que a varredura de tempo fosse mais fidedigna, o ideal seria usar um espectrofotômetro termoestável que mantivesse a temperatura de 37°C, simulando a incubação em banho-maria. Acreditamos que ao fato de não termos incubado o material a 37ºC, procedimento que provavelmente catalisa a reação, seja responsável por essa diferença de tempo, encontrada entre nosso experimento e o tempo estabelecido pelo kit.