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Microbiologia Geral Formas das bactérias: Cocos → esfera; Bacilos → cilíndricos/bastonetes; Espiralados/Helicoidais → vibrião, espirilo e espiroqueta. Arranjos de Bactérias: Cocos: Diplococos → dupla; Estreptococos → cadeias; Tetracocos → Grupos de 4; Sarcinas → Grupos de 8; Estafilococos → cacho de uva. Bacilos: Diplobacilos → dupla; Estreptobacilos → cadeia. Obs.: apresentam muita diferença de dimensões e tamanhos. Espiralados: Bactérias curtas com espiras incompletas Vibrião Bastonetes curtos com espiras cerradas Espirilo Longos com uma série de encurvações Espiroquetas Obs: células isoladas com diferenças no comprimento, número e amplitude dos espirais Estrutura das Células Bacterianas: Estruturas externas a parede celular: Glicocálice (cápsula) Composta por polissacarídeos e polipeptídeos É reservatório de agua e nutrientes, proteção contra a dessecação do meio e podem ser fonte de nutrientes, aumento da resistência microbiana a desinfetantes Flagelos: Órgão de locomoção, se estendem a partir da MP e atravessam a parede celular Composto por três partes: Filamento helicoidal, alça ou gancho, corpo basal Monotríquio: um único flagelo Anfitriquio: um único flagelo em cada extremidade da célula Lofotríquio: dois ou mais flagelos em um polo da célula Peritriquio: toda a célula Filamentos axiais Localizado no espeço periplasmático Locomoção através de contração e distensão Fimbrias Apêndices filamentosos protéicos, muito pequenos, numerosos Não estão relacionados com a motilidade Função: Fimbria F ou sexual (porta de entrada de material genético durante a conjugação), sitio receptor de bacteriófagos, Fimbria receptora (auxilia na fixação e colonização de membranas mucosas) Membrana externa: Tem função de evasão das defesas do hospedeiro, barreira para certos antibióticos enzimas digestivas detergentes metais pesados sais biliares e certos corantes, passagem de nucleotídeos dissacarídeos peptídeos aminoácidos vitamina B12 e Fe, fixação de vírus e substâncias nocivas, evitar perda de enzimas periplasmáticas. Parede Celular É uma estrutura complexa e semi-rígida. Com função de dar forma à célula, proteger contra condições adversas, evitar ruptura, servir como ponto de ancoragem para flagelos, contribuir para a capacidade de causar doença, sítio de ação de vários ATB. Tem na sua composição química peptideoglicano (rede de dissacarídeos e polipeptídeos) Gram +: muitas camadas de peptideoglicano (50%) e ácidos teicóicos. São coradas facilmente com violeta genciana. Gram -: uma ou poucas camadas de peptideoglicano com lipoproteínas, lipopolissacarideos, fosfolipídeos e porinas na membrana externa. No espaço periplasmático terá peptideoglicano, enzimas e proteínas de transporte. Parede celular atípica: Mycoplasma (sem parede) e Pseudomureína/sem peptideoglicano (arquebactérias) Danos a parede celular: drogas antimicrobianas (síntese da parede celular) e lisozima (hidrolisa ligações entre açúcares) Estruturas internas a parede celular: Membrana plasmática: Composta por camada dupla de fosfolipideos (40%) e proteínas periféricas e integrais (60%), são muito finas. O movimento das moléculas segue o modelo do mosaico fluido. Apresenta sítios de ação de antimicrobianos (álcoois, amônia quaternária, plomixinas) Tem função de transporte de solutos (ativo – gasto de energia, contra o gradiente. Passivo – sem gasto, a favor do gradiente). É uma barreira altamente seletiva. Excreta substâncias inúteis para a célula, digere nutriente, biossínteses de enzimas e macromoléculas componentes da estrutura externa, secreta enzimas hidrolíticas que rompem as macromoléculas do meio. Citoplasma: Solução aquosa, com grânulos (armazenam substancias de reserva e subunidades de macromoléculas para compor outras estruturas celulares) e vacúolos gasosos (flutuação de organismos aquáticos) Plasmídeos: Moléculas de DNA dupla fita circular que existem no citoplasma bacteriao Cromossomo: Estrutura interna das células que fisicamente carrega a informação hereditária, necessárias à sobrevivência e a autoduplicação da célula. DNA + proteína Ribossomos: Síntese proteica, composto de RNA (60%) e proteína (40%) Endosporos/esporos: Estruturas formadas por alguma bactérias G+, ocorre quando a bactéria é privada de água ou nutrientes essenciais. É um resposta a uma situação desagradável do meio ambiente. Resistente a agentes químicos e físicos. Forma vegetativa é morta com temperatura em torno de 70C. Espécies formadoras de esporos importantes na veterinária: Bacillus anthracis, Clostridium tetani e Clostridium perfrigens Colorações Esfregaço: filme delgado de material contendo o microorganismo, é espalhado na superfície da lâmina Fixação: mata os microorganismos e os fixa na lamina Coloração: cora os microorganismos com um corante que enfatiza certas estruturas Colorações simples: destaca todo o microorganismo, para que a forma celular e as estruturas básicas fiquem visíveis. Azul de metileno, Violeta de ganciana, Safranina, Casbolfuccina Colorações especiais: Coloração de Gram: Cristal violeta para corar as paredes celulares; Lugol forma um complexo com o Cristal e deixa a parede roxa; Éter/cetona é usado para retirar o corante; O corante saí apenas dos Gram –; Corado novamente com Fucsina Rosa; Ao fim as bactérias Gram – estão Rosa e as Gram + estão roxas. Coloração de Ziehl Neelsen Fuccina Fenicada a um esfregaço fixado Aquece a lamina levemente e a refria Descora com álcool-ácido, remove o corante fuccina das bactérias que não são álcool-ácidos resistentes (ficam transparentes), as álcool-ácidos resistentes ficam vermelhas (fuccina é mais solúvel nas ceras da parede celular) Cora-se com um contracorante azul de metileno ou verde malaquita. As células não álcoois-ácido ficam azul/verde Metabolismo Bacteriano Fonte de energia: luz solar e oxidação química (açucares, proteínas, peptídeos e gorduras) Metabolismo aeróbico: Oxidação de carboidratos: glicólise e ciclo de Krebs ATP Oxidação de proteínas, peptídeos e aminoácidos: proteínas e peptídeos são convertidos em aminoácidos, quando não existe mais carboidrato disponível no meio os aa serão utilizados como fonte de energia Oxidação de lipídeos: pouco utilizados pelo seu caráter hidrofóbico, restringe-se a determinados habitats Metabolismo anaeróbico: Fermentação: oxidante é um composto orgânico Reprodução bacteriana Reprodução assexuada: não envolve a união de núcleos, células sexuais (gametas) Fissão binária transversa ou divisão binária: As células dividem-se individualmente em duas células-filhas de tamanho aproximadamente iguais Envolve três processos: Alongamento da célula: aumento no tamanho da célula, crescimento da parede celular. Cocos = em um ponto específico da célula parental. Bacilos = ao redor da região cilíndrica Replicação do DNA: uma molécula de DNA mãe de fita dupla é convertida em duas moléculas “filhas” idênticas Divisão celular: Forma-se um septo onde o DNA e componentes citoplasmáticos são separados. O septo consiste da invaginação da membrana citoplasmática e peptídeoglicanos da PC Crescimento bacteriano Mede o número de células Curva de crescimento: Fase LAG: o número de células sofrem pequenas variações, pouca ou nenhuma divisão celular, células em fase de latência, intensa atividade metabólica principalmente síntese de DNA e enzimas Fase LOG: crescimento exponencial, aumento do logaritmo, reprodução extremamente ativa onde o tempo de geração atinge um valor constante, período de maior atividade metabólica, fase em que os microrganismos são sensíveis as mudanças ambientais Fase estacionária: período de equilíbrio, velocidade do crescimento diminui, população se torna estável (número de morte celular = número de células novas), decréscimo da atividade metabólica Fase de morte celular: fase de declínio, n de células mortas excede o de células novas. População desaparece totalmente Métodos para a medida docrescimento bacteriano Contagem em placa: Células viáveis são quantificadas, demora cerca de 24hrs para colônias visíveis em placa. Cada colônia é originada do crescimento e da multiplicação de uma bactéria, o inóculo original é sempre homogêneo e não existe agregação das células Diluição seriada: garantir que o número de colônias na placa permaneça na faixa desejada. O inóculo é diluído em uma série de tubos de diluição. Pour plate: adição do inoculo em placa sem meio. Adição de ágar nutriente fundido. Misturar com adição suave. Crescimento das colônias ocorre na superfície como também dentro do ágar após sua solidificação. Método espalhamento em placa: adição do inóculo em placa contendo meio sólido. Espalhamento do inóculo em toda a superfície. Crescimento das colônias somente na superfície do meio. Filtração: utilizado quando o número de bactérias é muito pequeno, permite que a bactéria seja concentrada sobre uma superfície de uma membrana de filtro de poros muito pequenos após a passagem de um volume de 100 mL de água. O filtro é transferido para uma placa de petri contendo um suporte embebido em meio liquido permitindo o desenvolvimento das colônias sobre a membrana do filtro. Método do número mais provável (NMP): técnica estatística, utilizado para certos microrganismos que não são capazes de crescer em meio sólido Contagem direta no microscópio: vantagem: não há necessidade de períodos de incubação da cultura.Desvantagem: necessário um grande número de células para permitir uma contagem satisfatória, são quantificadas células vivas e mortas Métodos indiretos: Escala de Mac Farland: série de tubos contendo sulfato de bário em concentrações crescentes para a determinação do número de bactérias em meio liquido. Comparação a olho nu, entre o tubo da cultura e o tubo da escala que mais se aproxima em turvação pode dar uma ideia aproximada do número de células bacterianas por ml
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