1B Identificação de BG (Enterobacteriaceae)

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Identificação de BG (Enterobacteriaceae)
	Para ser enterobactérias são necessários primeiramente que as bacterias fermentem a glicose, então todas vezes que falarmos em enterobactérias, temos que lembrar que todas são fermentadoras de glicose.
	Agar Macconkey (agar seletivo para G-, então só crescem G- e diferencial, colônias de Lac+/- fermentadora de lactose e não fermentadora).
	O indicador de pH (vermelho neutro), em pH ácido fica vermelho, em pH alcalino fica amarelo.
AGAR TSI (TRÍPLICE AÇÚCAR FERRO):
Ele é um agar que enxergamos várias coisas nele. É um agar em tubo inclinado vermelho, e se nos dividirmos esse agar (de forma imaginaria), ele tem duas partes, ápice (contato com O2), e a base (não está em contato com O2). Portanto na base fala-se que é o ambiente de anaerobiose, e o ápice é o ambiente de aerobiose. Esse agar TSI, significa que ele possui 3 açucares, e todo agar que possui açúcar tem a função de identificar se a bactéria fermenta ou não os açucares. E a fermentação ela acontece em anaerobiose e ela produz durante a fermentação ácido ou ácido + gás. Então a fermentação acontece da base no meio (anaerobiose) e na fermentação ocorre formação de ácido, então imagine uma bactéria no meio fermentando açúcar onde vai acontecer a fermentação? Embaixo na base. Então a bactéria vai acidificar o meio de baixo para cima.
	Obviamente se acidificação acontece nesse sentido, a alcalinização do meio acontece no sentido contrário. 
Semeação: Com uma agulha pega-se uma colônia com a mesma, fura até em baixo (meio TSI), volta e estrias na superfície. Esse TSI vai para estufa 37ºC por 24 horas, e esse é um agar que temos que respeitar o tempo de incubação, não podemos ler o mesmo antes nem depois das 24 horas.
Composição: É composto por proteínas, 3 açucares (glicose 1g, lactose 10g e sacarose 10g), se tem açucares o que é necessário para ver se a bactéria fermentou ou não? Indicador de pH (para saber se está ácido alcalino), o indicador de pH do TSI é diferente do macconkey, aqui é o vermelho de fenol que quando o pH fica ácido (amarelo), se o pH fica alcalino (vermelho), ao contrário do macconkey; fonte de enxofre (tiossulfato de sódio), Fe.
3 MANEIRAS DE SOLTAR RESULTADO DO AGAR TSI:
Primeiro quando o agar fica K/K, o K significa alcalino, A significa ácido. Quando eu tenho um TSI ao final de 24 horas em que ele ficou com o ápice alcalino e a base alcalina nós chamamos isso de K/K, pergunta, isso aí é uma enterobactéria? Não, porque, para ser uma enterobactéria tem que fermentar pelo menos a glicose. E então como esse meio ficou todo vermelho (alcalino), não houver fermentação. Portanto não é enterobactéria, isso é um bacilo G- não fermentador.
	O que aconteceu com esse meio para ele ter ficado K/K (alcalino) nesse período de 24 horas? A bactéria ela sempre vai procurar usar uma fonte de energia que seja fácil para ela, nesse caso o açúcar, mais existem bacterias que não fermentam os carboidratos, então se a bactéria não fermentar carboidrato qual que é a próxima fonte que ela vai usar? Proteína, e então neste caso, a bactéria degradou proteínas, ela fez degradação oxidativa de aminoácidos (no ápice do TSI), degradando os aminoácidos ocorre liberação de aminas consequentemente o pH do meio fica alcalino (vermelho).
Segundo TSI K/A, o mesmo mostra que o ápice ficou alcalino e a base ficou ácida, então só o fato de eu ver que a base ficou ácida, eu já sei que isso aqui é uma enterobactéria, eu falo que essa bactéria fermentou somente glicose; durante a incubação a bactéria é fermentadora de glicose, então a primeira coisa que ela começa a fermentar no meio é a glicose; nas primeiras 10 horas de encubação, a bactéria fermentando a glicose, ela acidifica o meio inteiro (ou seja nas primeiras horas o meio será inteiramente amarelo), só que então a glicose depois de algumas horas ela acaba, e se a bactéria não conseguir degradar nenhum dos outros açucares (lactose e sacarose), ela começa a usar (degradar) proteína, então ela começa a degradar aminoácidos, alcalinizando o meio de cima para baixo; porque ela para na metade? Porque se esgotou o tempo de degradação, entendendo então o porquê de não poder fazer a leitura antes do período (porque se não o meio estaria todo amarelo), e muito depois (pois a leitura seria de um meio muito alcalino – vermelho K/K).
	Foi falado que quando uma bactéria fermenta ela pode produzir ácido ou ácido + gás, então além do citado acima esse TSI pode apresentar bolhas ou rachaduras então a leitura seria K/A com gás, porque tem bactéria que produzem gás e outras não.
	Algumas bacterias produzem sulfeto de hidrogênio que reagem com o Fe ficando com a coloração preta. Então as vezes pode podemos nos deparar com um TSI metade vermelho e metade preto; toda vez que a bactéria produzir sulfeto de hidrogênio reagindo com o Fe e ficando preto, essa reação ela acontece em pH ácido, então mesmo que eu não esteja enxergando o amarelo, toda vez que ficar preto eu considero ácido, então eu classifico esse TSI K/A com sulfeto de hidrogênio, com gás (e ainda se tiver bolha).
Terceiro TSI A/A, se tivermos um TSI ao final de 24 horas totalmente amarelo, nas primeiras horas a bactéria fermentou glicose acidificando o meio, quando a glicose se esgota, se a bactéria conseguir fermentar lactose e/ou sacarose até o final das 24 horas o pH vai permanecer ácido, então quando eu tenho um TSI inteiro amarelo, eu falo que a bactéria fermentou glicose mais alguma coisa pelo menos (+ lactose ou a bactéria fermentou + sacarose ou a bactéria fermentou os 3); pode apresentar bolhas (com gás); pode ficar com a base preta (sulfeto de hidrogênio).
		
	
MEIO SIM (SULFETO INDOL MOTILIDADE):
É aquele agar reto (não é inclinado); semissólido (porque quando a gente vai ver motilidade o meio não pode ser duro, porque se não a gente não consegue ver se a bactéria se locomóvel lá dentro); ele tem um aminoácido (triptofano), fonte de enxofre (tiossulfato de sódio) e Fe. Para semearmos a bactéria no meio SIM, também usamos a agulha bacteriológica, pegamos um pouco a bactéria e furamos o meio até a metade ou 2/3, então esse meio vai para estufa 24 horas em 37ºC. A primeira coisa que se observa nesse meio é a motilidade, se turvou só na picada (negativo), se turvou tudo (positivo – flagelos). Avalia-se também se a bactéria produziu sulfeto de hidrogênio (reage com Fe ficando preto), deixando o SIM todo preto (positivo), toda vez que eu tiver o SIM todo preto, é positivo pois a bactéria se locomóvel; Prova do indol: algumas bactéria produzem uma enzima chamada triptofanase (essa enzima quebra o aminoácido triptofano) e um dos produtos dessa quebra é o indol, então algumas bacterias produzem indol outras não, mais pra eu enxergar o indol, no momento da leitura eu tenho que acrescentar umas 5,6 gotas de reativo de ehrlich (cor amarelo), se a bactéria produz triptofanase que quebra triptofano formando indol vai formar um sobrenadante rosa, se eu pingar o reativo e a cor do sobrenadante ficar amarelo (negativo). Existe SIM + e SIM -? Não porque no SIM a gente vê 3 provas diferentes, sempre tem que ler as três provas.
AGAR FENILALANINA:
É um agar branco inclinado; e em sua composição contem fenilalanina (aminoácido), para semear esse agar, pega-se a agulha pega a bactéria, semear a superfície em zig-zag, coloca na estufa 37ºC, por 24 horas. Essa prova é para avaliar se a bactéria produz uma enzima chamada fenilalanina-desaminase; essa enzima desanima o aminoácido produzindo ácido fenilpiruvico; esse ácido a gente não consegue encher se foi formado ou não, para enxergarmos é necessário acrescentar algumas gotas de cloreto férrico no momento da leitura, o mesmo reage com ácido fenilpiruvico ficando na cor verde escuro (positivo), então se pingar o ácido fenilpiruvico e ficar verde na hora é prova de fenilalanina positivo. E se a bactéria não produzi fenilalanina e não quebrou o aminoácido o meio fica da mesma cor e com reativo amarelo (cor do reagente).
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AGAR CITRATO:Ele possui citrato, e nós usamos esse agar, para ver se a bactéria usa citrato como sua única fonte de carbono, por isso que nesse meio de cultura não terá açúcar, proteína, entre outras coisas, porque se não a bactéria iria usar o que é mais fácil, ou seja se a bactéria conseguir usar citrato ela vai crescer, se não conseguir ela não cresce. Se a bactéria utilizar citrato vai ocorrer a formação de um produto alcalino, alcalino nesse indicador de pH (azul de bromotimol) fica azul, então se a prova do citrato for positiva, o meio vai ficar alcalino (azul), se o citrato for negativo não terá mudança em sua coloração (bactéria não cresce).
	
EXERCÍCIOS:
	Imagina-se que exista uma colônia LAC+ (rosa) no macconkey, se eu semear essa colônia no agar TSI, como que esse TSI tem que ficar no dia seguinte? Amarelo.
	Se for semeado uma colônia LAC- no macconkey, e logo em seguida semear essa colônia no TSI, como que o mesmo ira ficar no dia seguinte? Porque? Primeiro o macconkey está indicando a não fermentação de lactose, e se não a fermentação da lactose, sacarose e glicose o TSI pode ficar K/K, segunda opção, a bactéria não fermentou lactose, mais se ela fermentar só a glicose, vai ficar K/A.
O macconkey só oferece uma informação (fermentação de lactose).
Microbiologia Clínica