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UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular Práticas de BQI 345 Bromatologia DETERMINAÇÃO DE FÓSFORO Professor: José Humberto Alunos: Camila Stefany C. Ribeiro 94353 Clarissa de Souza Nunes - 94375 Dandara Baia Bonifácio - 94371 Danielly Nogueira Santos - 94376 João Pedro Miranda – 84945 VIÇOSA/MG 2018/2 Introdução O fósforo é um mineral encontrado na natureza sob diversas formas de oxidação, desde P-3 a P+5. No organismo, 70% dele é encontrado constituindo fosfolipídios orgânicos, 10% está ligado de forma inorgânica a proteínas e outros 5 % formam complexos com Cálcio (como H2PO4- e H2PO4-2) e Magnésio. Suas principais funções são em relação ao DNA e RNA (cuja base é constituída de monômeros ésteres de fosfato); à principal forma de energia dos seres vivos (o ATP); à constituição de membranas celulares (fosfolipídios); e à constituição inorgânica dos ossos (juntamente com o cálcio). Além disso, o metabolismo da maioria dos substratos metabólicos depende do fósforo como cofator. (NUTRIÇÃO E MET, 2008). A partir da espectrofotometria é possível identificar moléculas e substâncias a partir da luz que elas absorvem em uma solução. Uma das leis que rege o método é a de Lambert-Beer, que afirma que a concentração de uma substância é maior quando maior quantidade de luz é absorvida, formando uma distribuição linear. O espectrofotômetro é o equipamento capaz de medir a transmitância, absorbância e leitura direta de um material. Os valores obtidos por ele podem servir para construir a Curva de Calibração (ou Curva Padrão) da substância, que diminui a possibilidade de erro de determinação da concentração da substância, sendo ainda mais fácil caso ela siga a Lei de Lambert-Beer (OLIVEIRA, 2012). A quantificação de fósforo por espectrofotometria é uma metodologia bastante utilizada em estudos com alimentos. Metodologia No dia 03 de outubro de 2018 foi realizada a aula prática de Quantificação de Fósforo por Espectrofotometria sob supervisão da professora Virgínia. A professora então instruiu de como a aula se procederia e também explicou sobre as bases teóricas do procedimento. Primeiramente, como as soluções de vanadato de amônia, molibdato de amônia e solução mineral da farinha de linhaça já estavam prontas, o primeiro passo foi diluir a solução mineral na proporção 1:10. Em seguida uma nova solução mista de vanadato-molibdato de amônia foi feita. Para isso, os alunos prepararam soluções de 2; 5; 10; 15; 20 ppm de fosfato. Em um tubo de ensaio foi pipetado 5 ml da solução padrão e 2 ml do reagente misto vanadato-molibdato. Depois de ter deixado reagir por 10 minutos foi feita a leitura da absorvância a 420 nm. Com as observações das absorvâncias, se construiu um gráfico e uma equação de regressão linear foi definida. Por fim, para a determinação do teor de fosfato da amostra foram misturados em tubo de ensaio, 5 ml de amostra e 2 ml da solução vanadato-molibdato. Após deixar reagir por 10 min se observou a leitura da absorvância a 420 nm. E para finalizar, os cálculos do teor de fósforo com base na curva de calibração levando em conta as diluições feitas durante o preparo da solução mineral foram feitos. Resultados/Discussão Os resultados obtidos foram: Y=0,0388x – 0,0045 0,473 = 0,0388 x – 0,0045 X= 12,30 mg/litro de fósforo (* multiplicar pelo fato de diluição) 12,30 x 10 = 123,0 mg de fósforo / litro de solução de fósforo 123 ----------------- 1000 ml X -------------------- 100 ml X= 12,3 mg de fósforo / 100 ml 2,4677 g ------ 12,3 mg de fósforo 100 g --------x X= 498,43 mg de fósforo em 100 g de linhaça Em 100 g de linhaça foi encontrado 498,43 mg de fósforo. Ao comparar o resultado com a literatura- tabela brasileira de composição de alimentos (TACO) nota-se que o valor encontrado é de 615,2 mg de fósforo. Assim, o resultado da aula prática feita com a farinha de linhaça encontrou-se o percentual de 81,02% de aproximação com a literatura, obtendo um bom resultado para o teste. Conclusão Os valores obtidos pelo espectrofotômetro serviram para realizar a Curva Padrão (curva de calibração) da substância. Após a realização dos cálculos, concluímos que a quantificação de fósforo por espectrofotometria é uma metodologia bastante eficaz. Visto que, os resultados obtidos (498,43 mg/100g) foram muito próximos dos disponíveis na literatura atual (615,2 mg/100g), com uma aproximação de mais de 80%. Referências Bibliográficas COSTA, N. M. B.; PELUZIO, M. C. G. Nutrição básica e metabolismo. Editora UFV, 1 ed, 2008. OLIVEIRA, M. P. Aplicações de estudos bioquímicos quantitativos em Ciências Biológicas e da Saúde. RENEFARA, v. 2, n. 2, p. 99-127, 2012. LIMA, Dag M. Tabela brasileira de composição de alimentos-TACO. Nepa-Unicamp, 2006.
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