IMUNOFLUORESCÊNCIA FINAL

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IMUNOFLUORESCÊNCIA
INTEGRANTES
Eduardo Vertuani;
Gil Mello Evaristo;
Marcelo Vieira;
Jhonny;
Iara Silveira Mazega;
DEFINIÇÃO
O exame da Imunofluorescência é uma técnica que permite a localização de antígenos em tecidos ou células a partir de uma marcação com anticorpos conjugados a uma molécula fluorescente.
PRINCÍPIO DA TÉCNICA
Anticorpos ou antígenos são conjugados (ligados de modo covalente) a uma substância (fluorocromo), que, quando expostas a radiações UV, emite luz no espectro visível.
Assim, como a ligação Ag-Ac é específica, um anticorpo conjugado pode ser usado para detectar um determinado antígeno e vice-versa.
A reação é feita em lâminas de microscopia (um pouco mais finas que as comuns) e a observação tem lugar num microcópio com luz UV (microscópio de fluorescência).
PRINCIPIO DA TÉCNICA
FLUOROCROMO
São corantes que absorvem a luz UV e emitem luz visível.
Fazem ligações covalentes emitindo coloração diferente da de tecidos, funcionando como marcadores.
São utilizados vários fluorocromos diferentes nos laboratórios, sendo os mais comuns:
Fluresceína (FITC)
Rodamina (TRICT)
TIPOS DE REAÇÃO
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)
Conhecida também como técnica de camada simples
Utilizada para detecção de Antígenos em amostras clínicas, com Anticorpos marcados com fluorocromos. 
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)
As etapas compreendem:
Fixação do esfregaço da lâmina;
Tratamento com anticorpo marcado;
Incubação;
Lavagem para remover excesso de anticorpos marcados não ligados;
Visualização no microscópio fluorescente
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)
Vantagens:
Alta especificidade e sensibilidade.
Possibilidade de detecção de proteínas intracelulares e de sua localização. 
Desvantagens:
Alto custo do microscópio de fluorescência. 
Necessidade de um conjugado para cada antígeno que se deseja identificar ou localizar.
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD)
Também conhecida como técnica de dupla camada
PARA PESQUISA DE ANTÍGENOS
Incuba-se a célula ou o tecido com o anticorpo específico, formando um imunocomplexo.
Realiza-se lavagem para retirar os anticorpos não ligados.
A preparação é incubada com conjugado, marcado com fluorocromo.
O preparado é observado em microscópio de fluorescência.
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)
PARA PESQUISA DE ANTICORPOS
Antígenos padronizados são fixados à lâmina
O soro do paciente é diluído, colocado sobre o antígeno e incubado para a formação do complexo Ag-Ac.
Realiza-se a lavagem para retirada de anticorpos não ligados.
A preparação é incubada com o conjugado fluorescente, se houver anticorpo no soro, o conjugado reage com o anticorpo específico para o antígeno.
O preparado é observado em microscópio de fluorescência
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)
VANTAGENS:
Sensibilidade, Especificidade, Reprodutibilidade, Simples padronização e execução,o mesmo conjugado pode ser usado em sistemas diferentes, Para determinar as classes e subclasses de anticorpos são utilizados conjugados específicos 
DESVANTAGENS:
Necessidade de microscópio de fluorescência.
Subjetividade na leitura.
Não-automação.
APLICAÇÕES
Imunofluorescência Direta
Detecção direta de microrganismos em secreções, urina, fezes, em corte de tecidos etc.Também é utilizada na fenotipagem de células tumorais.
Imunofluorescência Indireta
Medicina humana
Diagnóstico sorológico de várias doenças infecciosas como a Doença de Chagas, a SIDA/AIDS, as hepatites e complexos em doenças auto-imunes. 
Medicina Veterinária 
Toxoplasmose, Neosporose, Raiva, Campilobacteriose Genital Bovina.
reação positiva de imunofluorescência indireta para a detecção de anticorpos contra promastigotas de Leishmania. 
IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA
Giadia lamblia
IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA
Detecção de Clostridium septicum pela técnica de imunofluorescência direta
IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA
Reação de imunofluorescência indireta positiva mostrando formaspromastigotas de  Leishmania marcadas pela fluoresceína
IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA
Reação de Imunofluorescência Indireta positiva, com antígeno de Trypanosoma cruzi.
IMAGENS DE TESTE DE IMUNOFLUORESCÊNCIA
Considerações Finais
As técnicas de Imunofluorescência ainda são utilizadas na rotina laboratorial, mas estão sendo substituídas por testes imunoenzimáticos devido à necessidade de microscopia, subjetividade de leitura e impossibilidade de automação