TECNICAS SOROLOGICAS ( não marcadas)

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TÉCNICAS SOROLÓGICAS:
TÉCNICAS SOROLÓGICAS NÃO MARCADAS
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 Os testes sorológicos ou imunoensaios são técnicas para a detecção de antígenos, anticorpos ou substâncias que desempenhem papel de antígenos - drogas, hormônios, ácidos nucléicos.
 Utilizam reagentes não marcados, tais como:
Precipitação; Aglutinação; 
Imunodifusão; Hemaglutinação;
Nefelometria; Inibição da hemaglutinação;
Imunoturbidimetria; Floculação.
 
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Cada técnica apresentam vantagens, desvantagens, aplicação específica;
Podem ser manuais, semi ou automatizadas;
Técnicas rápidas, Sistema homogêneo, boa especificidade; 
Sensibilidade reduzida;
Direta – detecção de Ag;
Indireta – detecção de Ac;
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 Baixo custo;
 Dificultam automação;
 Problemas com reprodutibilidade;
 
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PRECIPITAÇÃO
Quantificação de complexo Ac-Ag;
Ag multivalentes e Ac bivalentes;
Excesso: Dissolução do precipitado;
Zona de equilíbrio: precipitação máxima;
As reações são realizadas em tubos.
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Imunodifusão
 A técnica de imunodifusão radial simples , também cohecida como teste de Mancine, utiliza placa de vidro - mistura de ágar com solução de Ac ou Ag específicos;
 Técnica indireta : Ac;
Técnica direta: Ag;
Onde usar?
 Ig séricas, proteína C reativa e proteínas do sistema complemento (C3, C4)‏.
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Como funciona a técnica?
Deve-se fazer orifícios no gel, onde serão adicionadas as amostras do paciente;
 Amostras: Soro ou Líquor;
Sensibilidade: 1 a 3ug/ml.
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Avaliação da técnica
Avaliação do halo em diâmetro de precipitação formado, está relacionado com a [ ] do Ag ou Ac;
 construção de curva padrão permite determinar a [ ]
de Ag.
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Imunodifusão dupla ( Ouchterlony)
 Precipitação Ag-Ac;
 Teste + : Formação de linhas ou arcos;
 Teste - : Ausência de linhas ou arcos;
 O preparado da técnica é igual ao imunodifusão simples. Nos orifícios são adicionadas as soluções teste de Ag e Ac;
 Avaliação da técnica: Após a lavagem do gel e coloração específica;
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 Desvantagens: difícil reprodutibilidade ( lenta e baixa sensibilidade);
Técnica muito importante no diagnóstico de vários sistemas antigênicos: 
 Artrite reumatóide;
 Lúpus;
 Esclerose sistêmica;
 Caxumba;
 Cisticercose.
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NEFELOMETRIA
 Avaliar [ ] de IgA, IgM e IgG, dentre outras proteínas;
 Aparelho específico que me a turvação e difração;
 Vantagens:
 Automatizada;
 Fácil, rápida, precisa, alta sensibilidade (1 ug/ml);
 Desvantagens:
 Custo elevado dos antissoros;
 Reações inespecíficas necessitam de múltiplas diluições.
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 Quando usar?
 Avalição de Ig;
 Componentes do complemento;
 Fator reumático;
 Proteína c-reativa;
 Fatores de coagulação;
 Imunocomplexos ;
 Hormônios.
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 Mede-se a luz que atravessa a solução.
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Princípio
 partículas em suspensão – desvio de luz incidida
 dispersão de luz incidente quantificada por um detector
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Fonte de luz – lâmpadas de tungstênio, mercúrio, xenônio, hélio-neônio ou laser
 concentração - curva padrão
Nefelômetro acoplado a computador
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IMUNOTUBIDIMENTRIA
 Espectrofotômetro (detector);
Mede a da luz ao passar pelo imunocomplexo Ac-Ag;
 Vantagens:
 Não necessita separação de fases;
 Técnica rápida, precisa, econômica e automatizada;
 Desvantagens:
 Não pode ser usada em amostras muito turvas;
 
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Quando usar?
 Para ensaios que visam detectar:
 Ag, Ac;
 Lipoproteína;
 Proteína c-reativa;
 Albumina.
 
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Ambas são usadas para medir a [ ] plasmática de diversas proteínas;
 Nefelometria : A luz que atravessa a solução é medida;
 Turbidimetria: A luz não difundida ( a absorvida) é medida.