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ESCARRO Prof. Msc. Jessica Campestrini ESCARRO É a secreção produzida pela expectoração. O exame de escarro pode ser pedido quando existe suspeita de uma infecção pulmonar, como tuberculose ou pneumonia. É a primeira etapa diagnóstica da tuberculose. Para amostras de escarro é obrigatória a baciloscopia, pois identifica com rapidez a maioria dos casos bacilíferos. Para tal, alguns cuidados devem ser tomados com o preparo do esfregaço, coloração e leitura das lâminas para garantir a qualidade do exame. PREPARO DO ESFREGAÇO PARA BACILOSCOPIA DO ESCARRO: O esfregaço pode ser preparado por meio de: 1. Distensão do escarro diretamente sobre a lâmina (exame direto). 2. ou por digestão com agentes mucolíticos seguida por centrifugação. PROCEDIMENTO - DISTENSÃO DO ESCARRO DIRETAMENTE SOBRE A LÂMINA 1. Organizar as amostras em ordem crescente e as respectivas laminas em frente de cada pote. 2. Colocar a amostra a ser processada na bandeja de inox. 3. Quebrar no meio o palito e com as pontas farpadas retirar a partícula purulenta do escarro e distender na lamina ate obter um esfregaço homogêneo, ocupando 2/3 da lamina, sem deixar espaços vazios. 4. Deixar a lamina secar em temperatura ambiente, em superfície forrada com papel (área contaminada). 5. Descartar o material usado de acordo com as normas de biossegurança. 6. Guardar as amostras em geladeira ate a liberação dos resultados (caso seja necessário repetir a baciloscopia ou realizar a cultura). 7. Fixar os esfregaços, passando três vezes pela chama do bico de Bunsen. CUIDADOS - DISTENSÃO DO ESCARRO DIRETAMENTE SOBRE A LÂMINA Processar um numero máximo de 12 amostras de cada vez. Trabalhar em câmara de segurança biológica, ou com bico de Bunsen, mantendo a chama acesa ate o final do trabalho. Esfregaços muitos finos ou muito grossos dificultam a leitura e podem levar a resultados falso-negativos. Não aquecer a lâmina durante a preparação do esfregaço, para evitar a formação de aerossóis. Não usar alça metálica. Mesmo após a fixação podem existir bacilos viáveis no esfregaço. PROCEDIMENTO - DIGESTÃO COM AGENTES MUCOLÍTICOS SEGUIDA POR CENTRIFUGAÇÃO 1. Transferir a amostra para o tubo de centrifuga, adicionar igual volume de NaOH a 4%, fechar bem o tubo e agitar em “vortex”. 2. Deixar em temperatura ambiente por 15 min (fluidificação da amostra). 3. Adicionar agua estéril e purificada por sistema de filtração, ate completar 10 mL e agitar novamente. 4. Centrifugar a 3.000 x g por 15 min. 5. Desprezar o sobrenadante em recipiente a prova de respingos e agitar em “vortex” para 6. suspender o sedimento. 7. Colocar 2 gotas do sedimento no centro da lamina, preparar um esfregaço com a ponta da pipeta, com a forma de uma retângulo, com dimensões de 1x2 cm. CUIDADOS - DIGESTÃO COM AGENTES MUCOLÍTICOS SEGUIDA POR CENTRIFUGAÇÃO Realizar o procedimento respeitando as proporções. Utilizar agua ultrapura esterilizada, pois a agua destilada ou deionizada pode conter BAAR e levar a um resultado falso-positivo. COLORAÇÃO ZIEHL NEELSEN LEITURA DA LÂMINA Escala semi-quantitativa para informe do numero de BAAR observados em esfregaços de escarro corados pelo método de Ziehl-Neelsen. Pesquisa de Nocardia e Rodococos podem ser feita da mesma maneira. RESULTADO Positivo: bacilos corados em vermelho (BAAR), outras bacterias e células se coram em azul. Negativo: ausencia de BAAR em 100 campos observados. Leitura da baciloscopia de escarro deve obedecer a escala semi- quantitativa. Leitura de baciloscopia de outras amostras deve ser informada apenas como positiva ou negativa. BACILOSCOPIAS