Eletroforese

Esta é uma pré-visualização de arquivo. Entre para ver o arquivo original

*
*
Eletroforese
Acadêmicas: André Luis
Cristiane
Elba
Edivânia Moreno
Kátia Sampaio
Hildener Caroline
Gleyce Kelly
Maria Eliane
Maria Avany
Viviane Laranjeira
*
Histórico
1939, A eletroforese é uma técnica bioquímica versátil relativamente simples, rápida e de grande poder informativo. Foi introduzida cientificamente por A. Tiselies e A E. Kabat com o objetivo de separar partículas orgânicas. 
Na década de 1950, a técnica recebem impulso e aperfeiçoamento, a partir dos experimentos de Smithies (1955) e de Huintes e Morket(1957), havendo forte aceitação nas décadas posteriores, tornando-se indispensável nas mais diversas áreas da biologia molecular.
1955, Smithies
Géis de amido funcionam bem para separar proteínas do soro humano
1967, Loening 
Géis de acrilamida com maior resolução e permitem separar ainda moléculas grandes de DNA
1980, Schwartz and Cantor 
Eletroforese em campo pulsado separa fragmentos enormes
É hoje impossível imaginar um laboratório de biomol sem eletroforese acontecendo a todo instante...
*
Conceito
A eletroforese é uma técnica analítica utilizada na análise de  macromoléculas como proteínas e ácidos nucléicos.
Este método, denominado solução livre, era bastante limitado devido à instabilidade do aparelho, e mais significativamente, pelos efeitos de difusão e aquecimento gerados pelocampo elétrico, os quais comprometiam a resolução (a separação) dos compostos. Estes efeitos foram minimizados com a introdução de suporte (gel ou papel) que ajudou a conter o movimento livre dos analitos, de forma que o efeito da difusão fosse diminuído. Entretanto este sistema oferecia um baixo nível de automação, tempos de análise longos e após a separação a detecção era feita visualmente.
*
Eletroforese, etapas
Preparação do gel
Aplicação das amostras
Eletroforese
Coloração
 Análise dos resultados
*
*
Eletroforese em Gel
A eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior massa. Em alguns casos, o formato da moléculas também influi, pois algumas terão maior facilidade para migrar pelo gel.
A eletroforese normalmente é utilizada para separar proteínas e moléculas de DNA e RNA.
*
*
Eletroforese em gel de agarose
Separação de diferentes fragmentos de DNA em função a sua mobilidade num campo elétrico
Fatores que influencia a migração do DNA em gel:
Peso Molecular
Conformação do DNA
Concentração da Agarose
Voltagem da aplicação
Composição do tampão e da eletroforese
*
*
Engravidei, ele diz que não é dele ! 
*
Calma, a eletroforese te ajuda
Depois de extraído o DNA é a analisado através de eletroforese em gel de poliacrilamida posteriormente corado pela prata ou em gel de agarose, corado por brometo de etídio. Em qualquer uma delas, o material amplificado é visualizado como uma banda, a ser analisada de acordo com o seu peso molecular.
A eletroforese vai separar as moléculas ionizadas, de acordo com suas cargas elétricas e pesos moleculares em campo elétrico. O princípio da eletroforese utilizada para separação de DNA, por exemplo, baseia-se na carga total negativa do DNA (conferida pelos grupamentos fosfatos). Sendo assim, as moléculas de DNA tendem a migrar em direção ao pólo positivo (cátodo).
*
*
Aplicação das amostras
Definição do mapa das amostras por canaleta
*
Corrida do gel
Aplicação do campo elétrico
Fonte elétrica gera fluxo de íons através da solução tampão
Terminais positivo e negativo
Tempo adequado, senão o DNA sai do gel
*
Coloração das moléculas
Brometo de etídio
Agente intercalante do DNA
Cancerígeno!
Composto fluorescente à luz UV
Gel de agarose
Prata
Gel SDS-PAGE
PoliAcrilamide Gel Electrophoresis
Melhor resolução
Coomassie blue, etc
*
*
*
*
*
*
Vídeo
*
*
Obrigado!