RELATÓRIO DE EXTRAÇÕDE DNA E PCR

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RELATÓRIO DE EXTRAÇÕ DE DNA E PCR
A extração de DNA em sua maioria é o passo inicial para muitos processos de biologia molecular,e com experimento o detergente dissolve as membranas lipídicas além de desintegrar os núcleos e os cromossomos das células da banana, liberando o DNA. Com a quebra das menbranas, o contéudo celular, incluindo DNA e proteínas, se soltam e se dispersam na solução. E a técnica de PCR (Polymerase chain reaction), baseia-se na criação de cópias, in vitro, de uma parte específica do DNA, amplamente utilizada em laboratórios de pesquisa e clínicos, consiste em produzir automaticamente milhões de cópias de um único segmento de DNA em questão de horas. Diferenciando de acordo com a finalidade de cada pesquisador e assim ocorre no processo variação de temperaturas envolvendo nucleotídeos, sequenciais iniciadoras e uma enzima polimerase.A PCR demanda de uma enzima polimerase para sintetizar novas fitas de DNA, comumente suportando as altas temperaturas que são envolvidas nesse processo. Para a fabricação de novas fitas é necessário fornecer à Taq polimerase o ponto de partida da replicação, função cumprida pelos primers, que nada mais são do que sequencias curtas de nucleotídeos. Cada reação de PCR necessita de dois primers projetados para abranger a região que deve ser copiada e se ligarão ao DNA molde por pareamento de bases complementares. E assim a taq polimerase e os primers são adicionados ao tubo com uma solução tampão que posteriormente vai passar por repetidos ciclos de aquecimento e resfriamento em altas temperaturas.
OBJETIVOS
Propiciar um conhecimento sobre as técnicas de PCR para posteriormente está apto a realizar a prática da extração do DNA, PCR, as quais são muito utilizadas em laboratório.
MATERIAIS
Luvas; Álcool Etílico gelado; 
Banana; Aparato filtrante;
Tubos de ensaio; Funil;
Placa de petri; Aproximadamente 20 ml de solução extratora de DNA;
Pipeta pasteur;
MÉTODOS
A fruta utilizada para fazer o experimento, a banana. E um rodela pequena foi introduzida na placa de petri, que consequentemente a esmaguei com os dedos até ficar homogêneo. Adcionei a solução extratora ao contéudo, misturando tudo para homogeneizar. E assim, o extrato foi derramado no funil com o aparato filtrante e deixei filtrar no recipiente. Posteriormente, o álcool gelado é adicionado com aproximadamente o mesmo volume do filtrado no tubo de ensaio ( deixando-o escorrer vagarosamente pela borda) afim de se formar duas fases, a superior, alcoólica e ainferior, a aquosa.
FASES DA PCR
Desnaturação: irá aquecer fortemente a reação para separar as fitas de DNA, formando 2 novas fitas simples na próxima fase.
Anelamento: resfria a reação para que os primers possam se ligar as fits simples do DNA molde.
Extensão: eleva novamente a temperatura para que a Taq polimerase possa estender os primers e formar novas fitas de DNA.
MÉTODOS DA PCR 
Na aula prática, para realizar a PCR, inicialmente foi pipetado nos tubos de eppendorf, 2,5 µL do reagente Buffer de amplificação 10X; 0,5 µL (200-250 µM) de dNTPs 20 mM; 1,5 µL de Primer foward 20 Mm – sense; 1,5 µL de Primer reverse 20 mM – antisense; 1 µL de DNA templado 10ng/µL (1-100 ng/µL); 17,5 µL de Agua (Completar o volume);e por último 0,5 µL (0,5-1U/25 µL) de DNA polimerase (1-5 U).
CONCLUSÃO
Compreendi que a técnica de PCR é bastante eficaz no quesito de ser precisa e confiável, sendo que pode-se aprender a extraçõ de DNA. E assim, obtive conhecimento da aula prática de como proceder em cada etapa do experimento, portanto, tendo o máximo de aproveitamento do conteúdo.