Sequenciamento Automático - Nutrigenômica - Farmacogenômica

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Sequenciamento automático Método de Sanger
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Histórico
1975: primeira descrição do sequenciamento. 
Esse procedimento foi feito usando DNA polimerase, primer, dNTP e ddNTP marcadas por 32P.
Sanger, Coulson, 1975.
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dNTPs
Paulo José Pereira Lima Teixeira. 
Tecnologias de sequenciamento de DNA.
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ddNTPS
 SANGER, NICKLEN, COULSON. 1997
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ddNTPS
Atkinson mostrou a atividade inibitória do ddTTP (2´3´dideoxitimidina trifosfato).
Após a incorporação do ddTTP ocorre a inibição da síntese da cadeia.
ATKINSON, DEUTSCHER, KORNBERG, RUSSELL, MOFFATT. 1969
 SANGER, NICKLEN, COULSON. 1997
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Metodologia
Desnaturação do DNA de dupla fita. 
Primers: iniciam a reação feita pela DNA polimerase, nesse momento será definido qual a cadeia que será usada como molde. 
Sanger, Coulson, 1975.
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Metodologia
Usam-se baixas concentrações de ddNTPs e altas concentrações de dNTPs. 
Em cada reação, um ddNTP é incorporado aleatoriamente ao invés do dNTP correspondente, provocando a terminação da polimerização.
Sanger, Coulson, 1975.
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ddNTP marcada por 32P
Feitas 4 reações: uma para cada base ddNTP marcada por 32P.
Formados diversos fragmentos com tamanhos variados, de acordo com a posição e o ddNTP incorporado.
Sanger, Coulson, 1975.
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ddNTP marcada por 32P
Feito gel desnaturante de poliacrilamida.
A autoradiografia é feita após a corrida do gel.
Sanger, Coulson, 1975.
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Leitura 
Após autoradiografia a ordem dos nucleotídeos, pode ser visualizada. 
Porém, esta será complementar ao molde. 
Sanger, Coulson, 1975.
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Paulo José Pereira Lima Teixeira. 
Tecnologias de sequenciamento de DNA.
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Sanger, Coulson, 1975.
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Sequenciadores automáticos
Criado em 1986 pela Applied Biosystems.
O princípio é o mesmo do sequenciamento manual feito por Sanger.
ddNTPs são marcados por fluorescência característica, permitindo a distinção das cadeias truncada pela respectiva fluorescência.
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Sequenciadores automáticos
Feita a eletroinjeção onde as moléculas de DNA(-) em suspensão são introduzidas nos capilares.
Cada fragmento, recebe um feixe de laser de argônio, que será detectado por um sistema óptico e uma câmara de CCD.
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Sequenciadores automáticos
A ordem em que os diferentes fragmentos passam pelo detector de fluorescência indica a sequência da cadeia de DNA complementar à cadeia usada como molde. 
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Paulo José Pereira Lima Teixeira.
 Tecnologias de sequenciamento de DNA.
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Formato de saída – AB1
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Formato de saída- AB1
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Formato de saída – AB1
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Formato de saída – PHD
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NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTCTCTTATATANNATTCCCGCCTTCNNTAAAGTATGCAAATAATGTCTGGTTTTAAAGTAATGATTAACTGCATGCTCAGGATAATAGGGTTTGATGCCTTTATCCATGGGAAAATATTTGGTAACCTTAGGATAAAATCTAGCTGGCATAACCAATTTTAATCTTCGTAATTCATTTTTAGTAAGTGGGCCTACAAATTGTTCACATTTAGAAATCAGGTCTTGATGCAAATGAATATTAGGAAAAGAAGNANTGNACCAGTTAGGATTAAAAGCAGGCACAGTAGAAGAGTAAAGCCCCGTAAAGTTTCCCACCTTATGAGTCCAAGGAATACTAACATTGGNAAGCTGGAGATTGAGATCTGCGGCGACGCGGTGATTGAGATCTTCGTCTGCGAGGNGAGNNAGTTCTTCTNCTAGGGGACCTGCCTCGTCGNCTAACAACAGTAGTTTCCGGAAGTGTGNATAGGATAGGGGCNTTTGGTGGTCTGTANGCAGGANGAGTGCGAATCNNCACTCNNAAGGACACCAAATACTCTAGNACTGTNCTCTTCCAAAAGTAAGGCAGGAAATGTGANNNNACANCAGNNGTCTANNTTNNNNNNNNNNNNNNNNAACNTAGNNAACTACTAAANCCCTANCTNNNNCNNNNCANNNNNNNNNNCNCCCNAGNNNGCNANNNNCATNNCCTNNNNCNNNANANNNNNNANNNTNNCTNNNNNCCNTNNNGNNNNNAANNNNNNANNNNCAGNNNANNNNNNNNNNNNNNNNNAANNNNNNNNNNNNNNNTNNNNNANNNNNNNNNNNNGGNNNANNCANNNNNN
Formato de saída – SEQ
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Resumo do método Sanger
Paulo José Pereira Lima Teixeira.
 Tecnologias de sequenciamento de DNA.
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Principal aspecto positivo
Leitura de fragmentos longos.
Principal aspecto negativo
Valor elevado por base sequenciada.
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Paulo José Pereira Lima Teixeira.
 Tecnologias de sequenciamento de DNA.
RESUMO DAS PLATAFORMAS
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RESUMO DAS PLATAFORMAS
Björn Nystedt, 2011
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RESUMO DAS PLATAFORMAS
Björn Nystedt, 2011
Glenn, 2011
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 O que é 
 FARMACOGENÉTICA?
Ela pode antecipar os danos provocados pelo uso de medicações? 
Em que ponto estão as pesquisas nesta área e quais serão os efeitos econômicos e éticos destes avanços?
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FARMACOGENÔMICA e 
 FARMACOGENÉTICA
QUAL A DIFERENÇA? 
FARMACOGENÔMICA
FARMACOGENÉTICA
PROCURA A DOSE CERTA DA DROGA PARA CADA INDIVÍDUO
PROCURA A DROGA CERTA PARA CADA DOENÇA NO CONTEXTO GENÔMICO
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HISTÓRICO:
ARNO MOTULSKY 1957:
 Primaquina e a Succinilcolina – insights de uma variação genética envolvida na sensibilidade a drogas.
ROBERT SMITH e a Debrisoquina 1977:
 A identificação de um polimorfismo relacionado ao metabolismo de uma droga.
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A VIA DA FENITOINA E IMIDAPRIL APÓS A INJESTÃO
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RESPOSTA A UMA DROGA
DROGA
DME 
(drug-metabolizing enzimes)
Citocromo P450
NAT
Transportadores
ABCB1
Alvos ou elementos da via de resposta
ACE
Receptores
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AS ENZIMAS METABOLIZADORAS DE DROGAS- DME 
POLIMORFISMOS
 VARIAÇÕES FARMACOGENÉTICAS:
FORMAS NORMAIS OU METABOLIZADORES NORMAIS;
FORMAS DE BAIXA ATIVIDADE OU METABOLIZADORES FRACOS; e
FORMAS DE ALTA ATIVIDADE OU METABOLIZADORES ULTRA RÁPIDOS. 
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EXEMPLOS DE GENES ALVOS DA FARMACOGENÉTICA:
Transportador:
ABCB1 ( ATP-binding cassete sub family B member 1)
Distribuição da Fenitoina.
Receptor:
ADRB2 (receptro beta-adrenérgico)
Agonistas beta-adrenérgicos e beta-bloqueadores.
Alvos metabólicos:
ACE (Angiotensin I converting enzyme)
Diminuição da excreção de proteínas através da urina quando em tratamento com inibidor da ECA.
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DME
 Citocromo P450:
Várias isoformas CYP
Alguns testes já disponíveis comercialmente. 
 Ex: Warfarina
NAT (N-acetitransferase)
Pacientes com polimorfismos no gene podem reter drogas e sofrer seus efeitos tóxicos.
TPMT ( thiopurine methyltransferase)
Fenótipos de atividade intermediária de TPMT foram encontrados em 10% de Americanos. 
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ATIVIDADE DO CYP2D6
Metab fraco
Fenot interm
Metab normal
Metab ultra rap
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FUTURO DA FARMACOGENÉTICA:
PROBLEMAS E DESAFIOS:
Tamanho das amostras: qualidade e avaliação;
Elaboração de um estudo genético em uma população MAP BASED e SEQUENCE BASED ( tagging –SNP) 
Aplicação clínica;
Interesse comercial.
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FARMACOGENÉTICA NA SOCIEDADE:
CONSIDERAÇÕES ECONÔMICAS:
Custo devido a reações adversas a drogas;
Custo de pesquisa e comercialização;
Planos de saúde.
CONSIDERAÇÕES ÉTICAS:
Tratamento diferenciado;
O “mais fácil de tratar”;
Grupos éticos;
Privacidade.
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CONCLUSÕES:
Avanços na GENÔMICA;
Desenvolvimento de drogas;
Colaboração entre a FARMACOGENÉTICA básica e clínica; e
A possibilidade futura de avaliar, a partir da GENÔMICA, a susceptibilidade e as bases moleculares de muitas doenças assim como planejar melhor o tratamento farmacológico de acordo com o perfil genético dos pacientes.
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 BIOLOGIA MOLECULAR
Nutrigenômica
Refere-se às influências de fatores dietéticos sobre o genoma humano. Assim, o foco principal é a investigação de como os nutrientes modificam a expressão gênica nas células e nos tecidos de interesse
(Schuch, Voigt et al., 2010)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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Gene
Nutriente
Nutrigenética
Polimorfismo
Nutrigenômica
Expressão de Genes
Adaptado de: (Steemburgo, Azevedo et al., 2009)
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Em resumo, a nutrigenética aborda estudos das diferenças entre indivíduos em relação à resposta a um nutrienteou uma dieta em particular, enquanto a nutrigenômica estuda as diferenças entre os nutrientes com relação à expressão gênica. 
(Schuch, Voigt et al., 2010)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ENTENDENDO A NUTRIGENÔMICA
Sabemos que as diferenças na ação de uma mesma vitamina, por exemplo, dependem da herança genética. 
E que essa mesma herança pode influenciar o curso de certas doenças. 
Hoje não podemos mais prescindir desses conhecimentos para o pleno exercício da medicina e, particularmente, da nutrição.
Tudo isso se relaciona com a expressão gênica
(Vannucchi, 2008)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ALTERAÇÃO A EXPRESSÃO GÊNICA
Enzimas, peptídeos, receptores, neurotrofinas, canais iônicos e moléculas de adesão, entre outros, são regulados pela expressão gênica. Modificações no padrão dessa expressão acarretam alterações de respostas celulares a estímulos de neurotransmissores, peptídeos e de outras moléculas sinalizadoras.
 
(Vannucchi, 2008)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ALTERAÇÃO A EXPRESSÃO GÊNICA
Diversos são os fatores que alteram a expressão gênica:
 Consumo de medicamentos;
 Exposição a poluentes;
 Práticas de exercício físico;
 Estresse 
 Alimentação. 
Considerando que os alimentos representam o fator ambiental ao qual estamos constantemente expostos, destaca-se que são hábitos alimentares os principais responsáveis pelas alterações na expressão gênica.
 (Ong e Moreno, 2009)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ALTERAÇÃO A EXPRESSÃO GÊNICA
Nutrientes e compostos bioativos podem influenciar a expressão genética de forma direta ou indireta.
 Na forma direta: no interior do núcleo da célula. Se ligam a fatores de transcrição e induzem ou inibem a transcrição do gene. 
Na forma indireta: sua ação ocorre a partir da interação de nutrientes e compostos bioativos com receptores de membrana ou quinases com a ativação e/ou inativação de diferentes proteínas citoplasmáticas, que resultará na ativação ou inativação de um fator de trasncrição.
(Ong e Moreno, 2009)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ENTENDENDO A NUTRIGENÔMICA
1 - Nutrientes e compostos bioativos de alimentos podem atuar no genoma, direta ou indiretamente, para alterar a expressão e estrutura do gene;
2 - Em determinadas circunstâncias e em certos indivíduos, a alimentação pode ser um importante fator de risco para certas doenças;
3 - O grau com que a alimentação influencia o balanço entre saúde e doença depende da estrutura genética do indivíduo;
 (Ong e Moreno, 2009)
(Kaput e Rodriguez, 2004)
(Ridner, Gamberale et al., 2009)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ENTENDENDO A NUTRIGENÔMICA
4 - Genes modulados pela alimentação parecem ter papel importante na incidência, progressão e/ou gravidade de doenças crônicas não-transmissíveis;
5 – Intervenções dietéticas baseadas na necessidade e no estado nutricional, bem como no genótipo, podem ser utilizadas para desenvolver uma nutrição personalizada que otimize a saúde e previna ou atenue as DCNT.
 (Ong e Moreno, 2009)
(Kaput e Rodriguez, 2004)
(Ridner, Gamberale et al., 2009)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ENTENDENDO A NUTRIGENÔMICA
Estas interações entre o alimento e a expressão gênica é diretamente influenciada por mecanismos que podem mediar a regulação da expressão gênica:
1 – Ativação de fatores de transcrição atuando como ligantes;
2 – Alteração das concentrações de substratos intermediários das rotas metabólicas;
3 – Influência (positiva ou negativa) sobre as rotas de sinalização 
(Ridner, Gamberale et al., 2009)
(Kaput e Rodriguez, 2004)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ALTERAÇÃO A EXPRESSÃO GÊNICA
Como ficam as recomendações nutricionais para a população a partir de agora?
 (Ong e Moreno, 2009)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ALTERAÇÃO A EXPRESSÃO GÊNICA
O estatus nutricional durante a fase de desenvolvimento fetal pode alterar o estado epigenético do genoma, afetando os níveis da expressão gênica durante toda a vida pós-natal.
(Stover, 2004)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ALTERAÇÃO A EXPRESSÃO GÊNICA
Ações diretas: ácidos graxos e vitaminas A e D
Ações indiretas: resveratrol (vinho tinto), catequinas (chá verde), genisteína (soja), fitoalexina (proteína enzimática (endoglicanase) da parede celular vegetal); pisatina (ervilha)), o curcumin (açafrão da Índia), a capsaicina (pimenta), partenolide + Vitamina D3 (Crisântemo), própolis, selênio e zinco, que são capazes de inibir a ativação do fator nuclear de transcrição kappa B (NFkB), associado à oncogênese. 
(Ong e Moreno, 2009)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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ALTERAÇÃO A EXPRESSÃO GÊNICA
Mecanismos que controlam a expressão gênica, como é o caso da metilação dos resíduos de citosina, podem ser influenciados pela alimentação;
O estabelecimento dos padrões de metilação ocorre na fase inicial do desenvolvimento e pode se propagar pela vida toda. 
Um dos fatores que exerce grande influência no padrão de metilação é a disponibilidade celular das vitaminas que participam do metabolismo do carbono (B6, B12 e ácido fólico). 
(Furlan, Ferraz et al., 2007)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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Histonas
Metilação
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DOENÇAS
Numa pesquisa comandada pelo geneticista Michael Skinner, da Universidade de Washington, ratos foram expostos a um tipo de inseticida. 
A substância causou a metilação de dois genes relacionados à produção de esperma e os animais passaram a produzi-lo em menor quantidade.
 A deficiência se perpetuou por quatro gerações. Mais de 90% dos machos descendentes das cobaias apresentavam os mesmos problemas, sem nunca terem sido expostos ao inseticida.
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ALTERAÇÃO A EXPRESSÃO GÊNICA
A S-adenosilmetionina metaboliza nutrientes provenientes da dieta, como a colina, metionina, ácido fólico, vitamina B6 (piridoxina), B12 (cobalamina) e B2 (riboflavina) .
Portanto, a deficiência desses nutrientes leva à alterações no metabolismo do carbono, prejudicando a metilação do DNA e aumentando o risco de doenças crônicas, como o câncer e doenças cardiovasculares.
No entanto a expressão dos gentes possui um padrão individual (polimorfismo) 
(Fujii, Medeiros et al., 2010)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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POLIMORFISMO
As diferenças no genoma são de aproximadamente 0,1%.
Isto se deve à presença de polimorfismos, que são variações comuns de pelo menos 1% no DNA. 
Menos do que 1% = mutações. O Polimorfismo pode ocorrer por deleção ou por polimorfismo de nucleotídeo único (SNP).
Pode ocorrer no promotor, no intron e no exon.
(Ong e Moreno, 2009)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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POLIMORFISMO
Doenças associadas a polimorfismos são consideradas multifatoriais, pois são causadas por um conjunto de fatores ambientais e pelo somatório de vários alelos de diferentes genes relacionados, aumentando a suscetibilidade para a patologia. 
(Schuch, Voigt et al., 2010)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
475AG LEU47PRO
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POLIMORFISMO
Importância prática de um SNP (“snips”) no contexto da nutrigenética:
 Genes querespondem a alimentação e que se encontrem cronicamente ativados nas doenças;
 Genes que codificam proteínas envolvidas no metabolismo em pontos chaves;
 Conseqüência funcional importante;
 Alta prevalência na população de interesse;
 Presente em genes com biomarcadores associados.
(Schuch, Voigt et al., 2010)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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Posso ir embora? 
Eu não quero mais brincar disso!!!!
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COLOCANDO EM PRÁTICA A NUTRIGENÔMICA
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DOENÇAS
Câncer, a obesidade, a diabetes e doenças cardiovasculares, são multifatoriais , sua etiologia está relacionada tanto a fatores ambientais quanto genéticos (grande número).
Primeiro nível de interação: fase fetal, primeira interação gene-nutriente;
Segunda: erro congênito no metabolismo, 
Terceiro nível: doenças multifatoriais, longa exposição ao mesmo tipo de dieta
(Schuch, Voigt et al., 2010)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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DOENÇAS
CÃNCER
O fator de transcrição nuclear NF-kappaB
	Ativo em 85% dos tumores malignos humanos;
	A sua ativação promove a progressão do ciclo celular, a angiogênese , a migração celular (metastase) e a supressão da apoptose;
 	Ativado por: Infecção, Lesões ambientais (hipoxia ,pH ácido, isquemia, metais tóxicos, radiação, cigarro), Drogas, Estresse oxidativo, Indutores de apoptose, Carcinógenos, Citocinas.
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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DOENÇAS
CÃNCER
O ácido fólico e a vitamina B12 estão entre as substâncias originárias da dieta que já foram determinadas como possuindo ação protetora para o dano de DNA.
Diminuição dos níveis de homocisteína, que além de estar relacionada com aumento do risco cardiovascular, parece possuir também um papel deletério sobre o DNA 
(Fenech et al. 1997, Fenech et al. 1998).
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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DOENÇAS
CÃNCER
O papel protetor da dieta parece ser mais efetivo com relação ao risco de câncer em indivíduos que não possuem a deleção do gene GSTT1, assim como indivíduos classificados como acetiladores rápidos para o gene NAT2 tendem a um risco aumentado de câncer, na presença de uma dieta rica em carne vermelha .
(Schuch, Voigt et al., 2010)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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DOENÇAS
CÃNCER
Atualmente, pode-se afirmar que compostos bioativos da dieta como a curcumina, a genisteína, o resveratrol, o ácido ursólico, o licopeno, a capsaisina, a silimarina, as catequinas, as isoflavonas, o indol-3-carbinol, as saponinas, os fitoesteróis, a luteína, a vitamina C, o folato, o beta caroteno, a vitamina E, os flavonoides, o selênio e as fibras dietéticas atuam como agentes protetores contra o câncer.
(Fujii, Medeiros et al., 2010)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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DOENÇAS
CÃNCER
Em estudo de Davis e Uthus (2004), os autores listam componentes da dieta envolvidos com maior susceptibilidade do desenvolvimento de câncer, dentre eles se destacam:
	A deficiência de zinco, de selênio e de vitamina C; 
	O excesso do consumo de álcool e de vitamina A;
 A exposição aos metais pesados como o níquel 
(Fujii, Medeiros et al., 2010)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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DOENÇAS
DIABETES 2
Os genes regulados pela dieta tem um papel central no seu desenvolvimento.
Indivíduos respondentes e refratários.
Identificação de alelos que contribuem para o desenvolvimento das doenças crônicas, de caráter poligênico.
(Marti, Moreno-Aliaga et al., 2005) 
(Furlan, Ferraz et al., 2007)
(Stover, 2004)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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DOENÇAS
DIABETES 2
Vários genes estão envolvidos na regulação do metabolismo lipídico e na sensibilidade à insulina. Proteínas produzidas por estes genes possuem funções relacionadas com a síntese e catabolimo de ácidos graxos e resistência e resposta à insulina, e genes relacionados ao metabolismo lipídico, como das apolipoproteínas B e E.
SREBP´s; PPAR´s; IFABP; PPARG.
(Shimano et al. 1997, Laudes et al,2004)
(Mutch et al. 2005)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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Outros Genes
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Gene	 Polimorfismo Localização Ação	 Associação
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Gene	 Polimorfismo Localização Ação	 Associação
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Gene	 Polimorfismo Localização Ação	 Associação
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Gene	 Polimorfismo Ação	 Associação
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Fonte: (Fujii, Medeiros et al., 2010)
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ÉTICA
Aspectos Bioéticos da Nutrigenômica
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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PREPARAÇÃO DOS CURSOS DE NUTRIÇÃO
Estamos preparados?
A regulação da expressão gênica por nutrientes representa uma das principais fronteiras de estudo na área de nutrição. 
Apesar disso, durante a década de 90, a nutrição foi bastante lenta na aplicação das oportunidades oferecidas pela biologia molecular 
(Ong e Moreno, 2009)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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O FUTURO
Aplicações da proteômica na área de nutrição, incluindo as intervenções nutricionais, distúrbios intestinais elucidação imunorelacionados, caracterização de ingredientes funcionais (tais como probióticos em leite ou soja.
A intervenção nutricional baseada no conhecimento das exigências nutricionais, estado nutricional e do genótipo pode ser usado para prevenir, atenuar ou curar doenças crônicas.
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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O FUTURO
No futuro, o estudo das respostas do organimo em particular de componentes da dieta em níveis de metaboloma, proteoma e transcriptoma podem mostrar padrões onganoespecíficos de grande valor.
O desafio para os próximos anos é o de traduzir a nutrigenômica em dados e predizer com precisão o efeito benéfico ou prejudicial para a saúde dos componentes da dieta.
Por último, a indústria de alimentos pode usar o conhecimento derivado de nutrigenômica para desenvolver produtos com base em provas.
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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O FUTURO
Nutricionista como conselheiro genético
Bioeficácia nutricional 
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
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*
Bakker, G.C.Erk, M.J.v., et al. "An antiinflammatory dietary mix modulates inflammation and oxidative and metabolic stress in overweight men: a nutrigenomics approach." Americam Journal of Clinical Nutrition 91: 1044-1059.(2010)
Bergmann, M.M.Bodzioch, M., et al. "Bioethics in humam nutrigenomics reserch: European Nutrigenomics Organisation Workshop report." British Journal of Nutrition 95: 1024–1027.(2006)
Fujii, T.M.d.M., Medeiros, R.d., et al. "Nutrigenomics and nutrigenetics: important concepts for the nutrition science." Nutrire: rev. Soc. Bras. Alim. Nutr. = J. Brazilian Soc. Food Nutr. 35(1): 149-166.(2010)
Furlan, L.R., Ferraz, A.L.J., et al. "A genômica funcional no âmbito da produção animal: estado da arte e perspectivas." Revista Brasileira de Zootecnia 36(Suplemento Especial): 331-341.(2007)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
*
*
Guttmacher, A.E. eCollins, F.S. "Genomic Medicine - A Primer." The New England Journal of Medicine 347(19): 1512-1520.(2002)
Kaput, J. eRodriguez, R.L. "Nutritional genomics: the next frontier in the postgenomic era." Physiol. Genomics 16: 166-177.(2004)
Marti, A.Moreno-Aliaga, M.A.J., et al. "Avances en nutrición molecular: nutrigenómica y/o nutrigenética." Nutricion Hospitalaria XX(3): 157-164.(2005)
Muller, M. eKersten, S. "Nutrigenomics: goalsand strategies." Nat. Rev. Genet. 4: 315-322.(2003)
Ong, T.P. eMoreno, F.S. Perspectivas de aplicação da biologia molecular na área de nutrição: nutrigenômica. Nutrição nas doenças Crônicas não-transmissiveis. L. Cuppari. São Paulo, Manole: 473-503.(2009)
Ridner, E.Gamberale, M.C., et al. "Nutrigenómica: revisión del estado actual y aplicaciones." Actualización en Nutrición 10(2): 114-123.(2009)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
*
*
Schuch, a.B.Voigt, F., et al. "Nutrigenética: a interação entre hábitos alimentares e o perfil genético individual." Revista Brasileira de Biociência 8(1): 73-84.(2010)
Steemburgo, T., Azevedo, M.J.d., et al. "Interação entre gene e nutriente e sua associação à obesidade e ao diabetes melito." Arq Bras Endocrinol Metab 53(5): 497-508.(2009)
Stover, P.J. "Nutritional genomics." Physiologie Genomics 16: 161-165.(2004)
Swanson, K.S., Schook, L.B., et al. "Nutritional Genomics: implications for: implications for companion animals." Journal of Nutrition 133: 3033-3040.(2003)
Vannucchi, H. Avanços em nutrigenômica: A interação entre nutrientes e genes influenciando a saúde humana. Nestê Bio - Nutrição e Saúde. São Paulo: 04-11.(2008)
Bio Mol
Conceitos
Considerações
Objetivos
Polimorfismo
Doenças
Referências
Primer: se anela na região complementar do DNA simples-fita do bacteriófago
dNTPs: adicionados pela DNA polimerase na região 3´após o primer.
ddNTP: terminador de cadeia marcada por 32P. Era feita uma reação por base. Que depois era feito um gel de poliacrilamida e a autoradiografia pra ver as bandas e definir a sequencia de nt.
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Os ddNTPs marcados foi relatado por Atkinson que demonstrou que eles são terminadores de cadeia.
Após a incorporação do dTTP ocorre a inibição da síntese da cadeia recém sintetizada, pois não possuem a hidroxila no carbono 3´, que permite a ligação fosfodiéster com o próximo nt.
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Denaturação do DNA de dupla fita., para que a enzima polimerase seja capaz de fazer a polimerização da fita-filha
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A mobilidade do fragmento do gel é diretamente proporcional ao seu tamanho, portanto os fragmentos serão separados de acordo com o número de nt presentes.
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Cada ddNTP utiliza um fluorocromo diferente, portanto as reações podem ser feitas em um mesmo tubo.
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DNA tem carga negativa, portanto é atraído para o cátodo do sequenciador
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