Radioimunoensaio e Imunorradiométrico

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RADIOIMUNOENSAIO (RIA)
Método de dosagem das substâncias existentes nos fluídos do corpo humano. 
Origem: 1934, Collip e Anderson
União Ac+Ag = Complexo
Berson e Yallow: Método de dosagem de insulina
Radioimunoensaio
Obtenção de Ac específico 
 
Marcação com I131
Medição da concentração no soro
Técnica de Dosagem de Insulina
DEFINIÇÃO 
O termo radioimunoensaio (RIA) é mais empregado em ensaios com Ag marcados.
O termo imunorradiométrico (IRMA) é utilizado em ensaios com Ac marcados.
CARACTERÍSTICAS GERAIS
Vantagens
Desvantagens
Alta sensibilidade → permite dosagem de substâncias não encontradas em concentrações suficientes para serem percebidas por outras técnicas.
polipeptídios, catecolaminas, esteróides, antibióticos, hormônios tireoidianos, proteínas, vitaminas, drogas e outras.
vírus da hepatite B.
marcador tumoral.
APLICAÇÕES 
 Reação de competição por um receptor comum entre uma substância a ser determinada e a mesma substância marcada radioisotopicamente.
PRINCÍPIO GERAL
 Componentes
Anticorpo radioativo
Antígeno radioativo
Amostra a ser testada
Leitor radiométrico
 Leitor radiométrico
CARACTERÍSTICAS DOS MARCADORES
 De competição com Ag marcado.
 De competição com Ac marcado.
 Sanduíche ou captura de Ag.
 Para detecção de IgE:
 Paper Radioimmunosorbent Test (PRIST).
 
TIPOS DE RIA
Inicialmente, uma quantidade conhecida de anticorpos específicos é adicionado
Y
Em seguida, adiciona-se o antígeno marcado com 125 I. 
Uma amostra de soro de um paciente suspeito é então acrescentada.
O antígeno, se presente no soro, compete com o antígeno radioativo pelos sítios de ligação nos anticorpos. 
A quantificação é feita em aparelho específico para a leitura de radioatividade. A concentração das moléculas antigênicas presentes na amostra é inversamente proporcional à leitura de radioatividade. 
DE COMPETIÇÃO COM Ag MARCADO
Y
Y
 Antígeno marcado
 Antígeno do soro
 Y Anticorpo específico
11
Inicialmente, antígenos adicionados
A seguir, acrescenta-se a amostra do paciente.
Os anticorpos específicos e marcados com o radioisótopo são acrescentados.
Se a amostra for positiva, haverá a formação do complexo Ag/Ac com o Ag do soro.
Quanto maior a quantidade de antígeno na amostra, maior será a ligação destes aos anticorpos, formando imunocomplexos, que serão retirados por lavagem e assim reduzindo a leitura da radioatividade.
DE COMPETIÇÃO COM Ac MARCADO
 Antígeno marcado
 Antígeno do soro
 Y Anticorpo marcado
Y
Y
Y
Teste realizado em duas etapas:
Primeira etapa:
	1) Fixação de Acs não marcados na fase sólida.
	 
	4) Deverá ocorrer uma primeira lavagem para eliminação de componentes não específicos.
Segunda etapa:
	1) Acrescenta-se um segundo anticorpo específico e marcado, que formará o “sanduíche”.
	2) A formação do imunocomplexo será revelada por este segundo anticorpo. 
SANDUÍCHE OU CAPTURA DE Ag
	2) Adição da amostra (que contém Ag específicos contra o Ac fixado e outros componentes não específicos).
	3) Os Ac capturam os Ag específicos da amostra.
 Antígeno do soro Y Ac marcado
 Y Ac não marcado Componentes não
 específicos 
Y
Y
Y
Y
TIPOS DE RIA PARA DETECÇÃO DE IgE
Anticorpos anti-IgE e não marcados são fixados na fase sólida.
Acrescenta-se o soro a ser pesquisado para a presença de IgE. Em caso positivo, haverá a união do anticorpo IgE + anticorpo anti-IgE.
Após lavagem para retirada do excesso de Ac não ligado, acrescenta-se anticorpos anti-IgE marcados com isótopo para que haja a revelação da amostra.
Após lavagem, procede-se com a leitura. A determinação da concentração de IgE total presente na amostra ocorrerá através de cálculo que relacionará os valores obtidos com uma determinada curva padrão.
PAPER RADIOIMMUNOSORBENT TEST (PRIST)
 Y Ag IgE da amostra 
 Y Ac anti-IgE marcado
 Y Ac anti-IgE não marcado
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
15
Fim