TRABALHO FUNDAMENTOS DE BIOLOGIA

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TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR (PROTEÍNA) 
WESTERN BLOT
CLONAGEM GÊNICA
SEQUENCIAMENTO DE DNA
WESTERN BLOT
É um método na biologia molecular que detecta proteínas de uma determinada amostra de células fragmentadas, de tecidos biológicos extratos.
Essa técnica serve como teste para confirmar resultados obtidos em provas imunoenzimáticas.
Surgiu na década de 70 e possibilitou que proteínas fossem detectadas, caracterizadas e quantificadas.
Trata-se de um exame de alta sensibilidade e especificidade.
Útil para detectar proteínas defeituosas. Por exemplo, doenças de Príons.
Usada para detectar proteínas dos anticorpos do vírus do HIV, doença da vaca louca, doença de LYME, Hepatite B, herpes, etc.
Detecta anticorpos contra vírus ou bactérias no soro.
5 Etapas para elaboração dessa técnica:
1. Extração e quantificação das proteínas
2. Eletroforese (é uma técnica de separação de moléculas) em gel de poliacrilamida 
Poliacrilamida (É um dos produtos utilizados para fabricação de géis para eletroforese.)
3. Transferência das proteínas para uma membrana
4. Incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína específica a ser analisada.
5. Revelação dessa membrana para análise dos dados.
Teste de detecção de anticorpos para o vírus do HIV(Western-blot)
Exame revela anticorpos contra as diferentes partes do vírus.
Usada para confirmação de um diagnóstico (positivo) após um exame Elisa.
Detectam o HIV cerca de 30 dias após a contaminação.
Para esse teste as proteínas individuais são reconhecidas e interpretadas visualmente.
Determina o tamanho dos antígenos que se ligam aos anticorpos no kit de teste. Este teste tem precisão de 99,5%.
CLONAGEM GÊNICA
Define-se a clonagem como o processo de se produzir cópias idênticas de seres vivos através de um fragmento específico do DNA.
 Clonagem de genes é um conjunto de métodos experimentais de biologia molecular que são usados para montar moléculas de ADN recombinante e para direcionar a sua replicação dentro de um organismo hospedeiro.
Clonagem gênica (técnica do DNA recombinante ou engenharia genética) consiste na inserção de um segmento selecionado de DNA (DNA doador ou inserto) em um plasmídio ou no cromossomo de um bacteriófago
Estratégia geral de clonagem gênica
Isolamento de um fragmento de DNA
Inserção em um vetor de escolha (DNA recombinante ou quimera)
Transporte para o interior de uma célula hospedeira (transformação)
Seleção de células transformantes (OGM)
Replicação da molécula de DNA recombinante
Multiplicação de células, cada uma contendo cópias do mesmo plasmídio recombinante (clones)
PRÁTICAS DE CLONAGEM 
Clonagem DNA, Clonagem Terapêutica, Clonagem Reprodutiva
Clonagem DNA
Transferência de um fragmento de DNA de um organismo para um vetor (Ex. Plasmídeo – DNA circular pequeno, extracromossômico e de replicação autônoma, encontrada em algumas células bacterianas.
É utilizada por cientistas para gerar um determinado gene
Clonagem Terapêutica
Também chamada de clonagem do embrião.
É a produção de embriões humanos para utilização em pesquisas.
Tem como objetivo obter células-troco, pode ser utilizada em estudos de desenvolvimento humano ou no tratamento de doenças.
Este processo de extração das células-tronco destrói o embrião, o que ocasiona diversas discussões
 
Clonagem Reprodutiva
É uma tecnologia para gerar um animal que tenha o mesmo DNA nuclear de um animal previamente resistente (criação ovelha Dolly)
Transferência de material genético do núcleo das célula somática de um doador adulto para um óvulo reconstruído.
SEQUÊNCIAMENTO DE DNA
 É a determinação da sequência de nucleotídeos (as, ts, cs, e gs) em um pedaço de DNA. 
 É uma série de métodos bioquímicos que têm como finalidade determinar a ordem das bases nitrogenadas adenina, guanina, citosina e timina da molécula de DNA.
É o processo realizado para se determinar a sequência exata de nucleotídeos em uma molécula de DNA (ácido desoxirribonucleico). A sequência nucleotídica é a base para o conhecimento de um gene ou genoma.
As técnicas de Sequenciamento de Última Geração são novas abordagens feitas em grande escala que aumentam a velocidade e diminuem os custos do sequenciamento.
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SEQUÊNCIAMENTO DE DNA
Desde a descoberta da dupla fita de DNA surgiram várias ciências entre elas a genética e a biologia molecular.
O primeiro método de sequenciamento de DNA surgiu nos anos 70, ficou conhecido como método químico ou Maxam-Gilbert.
APLICAÇÕES DE SEQUENCIAMENTOS 
Biologia molecular
 Sequenciamento é utilizado no estudo de genes e quais proteínas codificam
Assim, o que levam trocas nos genes?
Biologia evolutiva
O sequenciamento do DNA é útil para
entender como diferentes organismos estão
relacionados;
Medicina
Paciente podem saber se apresentam doenças genéticas
Ciência Forense
Identificação;
Teste de paternidade