relatorio aula pratica saponificação extração de proteinas

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INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE SÃO PAULO
 Campus Barretos
Relatório de aula prática
Extração e caracterização de lipídios
Docente:Prof. Dr. RodrigoYamakami Camilo.
Discentes:Clara Fernanda; Karina Santos;
Marcelo Zion; Tainá Fernandes; SamiaRoberti
Curso: Licenciatura em Ciências Biológicas
Barretos 2019.
INTRODUÇÃO
	Os lipídeos são definidos como substâncias de origem biológica, conhecidos popularmente como gorduras, óleos e ceras, cuja característica essencial diz respeito à solubilidade apenas em solventes orgânicos (como clorofórmio, diclorometano, éter e benzeno), e a insolubilidade em água, fator crucial para que se tornem fundamentais a fim estabelecer uma interface entre o meio intracelular e extracelular. Além disso, alguns lipídeos são responsáveis pela proteção dos órgãos, possuem capacidade isolante, e ainda servem como fonte de energia para os animais de uma forma geral. Em relação aos ácidos graxos, segundo Voet (2013), é correto afirmar que são ácidos carboxílicos com grupos laterais de hidrocarbonetos de cadeias longas, raramente encontrados disponíveis na natureza, cujas propriedades físicas variam com o grau de instauração.
	Quanto à classificação dos ácidos graxos, esses podem ser divididos em triacilgliceróis, glicerofosfolipídeos, esfingolipídios ceramidas e ceras. Estes compostos quando aquecidos em presença de base forte (NaOH ou KOH) sofrem hidrólise produzindo sais de sódio ou potássio de ácidos graxos (sabões), e esses, por sua vez possuem propriedades emulsificantes, uma vez que suas caudas apolares dissolvem a gordura e suas cabeças polares se dissolvem na água, produzindo gotículas carregadas que se dissolvem em água. Em outras palavras, em soluções aquosas formam micelas, que é composto por caudas apolares voltadas para dentro e as cabeças polares em contato com a água, que diminui a tensão superficial da água. 
	Com relação à precipitação dos sabões, essa ocorre pela adição de ácidos fracos como o ácido acético, sendo que o ácido graxo é insolúvel em água. Outra adição é de sais de cálcio ou magnésio, pois estes formam sais insolúveis junto aos ácidos graxos. Para realizar a separações dos lipídios saponificáveis dos insaponificáveis a partir da identificação dos ácidos livres, reação de saponificação, óleo, hidrólise e sabão mais insaponificação. A estrutura que representa dois lipídios saponificáveis é:
 
OBJETIVOS
2.1 Objetivo geral
Compreender como se dá a reação de saponificação e avaliar suas propriedades, bem como promover a extração de lipídios a fim de observar a presença de colesterol em cada amostra através da mudança na coloração. 
2.2. Objetivos específicos- Experimento 1- Saponificação de triglicerídeos
Realizar a reação de saponificação de triglicerídeos;
Avaliar as propriedades dos sabões produzidos;
Testar a redução da tensão superficial na primeira amostra de sabão;
Testar a precipitação de ácidos graxos na segunda amostra;
Testar precipitação de sabões de cálcio na terceira amostra;
Testar a precipitação de sabão por excesso de eletrólitos na quarta amostra. 
2.3. Objetivos específicos- Experimento 2-Extração do colesterol de gema de ovo
Extrair o colesterol da gema do ovo.
Realizar a reação de salkowski em 3 amostras;
Realizar a reação de liebermann-burchard em 3 amostras;
Analisar os resultados obtidos.
METODOLOGIA
As atividades foram realizadas no laboratório do Instituto Federal São Paulo campus Barretos, com os alunos do 3º ano de Licenciatura em Ciências Biológicassob orientação do Professor “Rodrigo Camilo Yamakami” responsável pela disciplina de Bioquímica. As atividades foram divididas em duas etapas dadas em experimento 1- Saponificação de Triglicerídeos e experimento 2- Extração de colesterol da gema do ovo, para os experimentos recebemos roteiros com os procedimentos a serem realizados.
EXPERIMENTO 1- Saponificação de triglicerídeos
3.1.1. Materiais
•	1 béquer de 100 ml 
•	1 béquer de 250 ml 
•	tubos de ensaio grandes
•	agitador
•	pipetas graduadas (1, 2, 5 e 10 ml) 
•	banho maria 
•	termômetro 
•	balança analítica 
 •	Óleo de soja
 •	Solução de potassa alcoólica: - 1 volume de KOH a 40% + 1 volume etanol a 95%. 
 •	óleo vegetal (ou gordura) 
 •	ácido acético concentrado 
 •	Solução de Cloreto de cálcio a 10% 
 •	Solução saturada de cloreto de sódio 
Procedimentos
Em um tubo de ensaio grande foi adicionado 2ml de óleo de soja e 5ml de solução de potassa alcóolica, o tubo foi para o banho maria e aquecido por 30 minutos, após o aquecimento o tubo foi resfriado e o volume foi diluído em 4 ml de água, todo o volume foi dividido em 4 novos tubos para as análises das propriedades dos sabões.
Tubo 1- Teste de abaixamento da tensão superficial.
Nesse tubo foi adicionado 2ml de água, e agitou-se bem a solução para análise do que ocorreu.
Tubo 2- Precipitação de ácidos graxos.
Nesse tubo foi adicionado gota a gota de ácido acético glacial até o momento em que pôde-se ser visto um precipitado branco indicando a presença dos ácidos graxos.
Tubo 3- Precipitação de sabões de cálcio.
Neste tubo foi adicionado gota a gota de cloreto de cálcio 10% até que pode-se notar o aparecimento de um precipitado branco indicando o sabão de cálcio.
Tubo 4- Precipitação de sabão por excesso de eletrólitos.
Nesse tubo foi adicionado o volume igual saturado de cloreto de sódio, para que pudesse ser notado a precipitação do sabão.
3.2. EXPERIMENTOS 2- Extração do colesterol de gema de ovo
3.2.1. Materiais
•	Ovo. 
•	Béqueres com capacidade volumétrica de 100mL. 
•	Funil e bastão de vidro. 
•	Proveta com capacidade volumétrica de 100mL. 
•	Éter etílico 100 mL. 
•	Erlenmeyer com capacidade volumétrica de 100mL 
•	Estante para tubos de ensaio e 03 tubos de ensaio. 
•	Solução concentrada de ácido sulfúrico (H2SO4).
•	Acetona,
•	Clorofórmio 
•	Ácido anidrido acético.
•	Pipetas volumétricas ou pipetadores automáticos 
•	Peseta com água destilada. 
•	Óleo de soja e 
•	Óleo mineral.
3.2.2. Procedimentos
Em um béquer foi colocado apenas a gema do ovo, adicionou-se o volume de 10ml de acetona com o bastão de vidro a mistura foi homogeneizada e levada para uma chapa de aquecimento para que a acetona evaporasse com o calor, durante esse processo de aquecimento houve momentos em que foi observado estouros de gema para fora do béquer, o procedimento foi repetido por mais duas vezes ao final da evaporação da acetona adicionou-se 20ml de clorofórmio em seguida essa mistura foi filtrada em papel filtro (ANEXO I e II) e o volume obtido foi utilizado para as seguintes reações: Reação de Salkowski e reação de Liebermann-Burchard
Reação de Salkowski: Para esse experimento foram identificados 3 tubos de ensaio e em cada um deles pipetado o volume de 2ml das seguintes amostras:
 Tubo 1-Extrato etéreo de gema (Obtido através da extração de colesterol no procedimento anterior).
Tubo 2- Óleo de soja.
Tubo 3- Óleo mineral.
Em cada tubo individualmente foi adicionado cuidadosamente na parede interna do tubo 1ml de ácido sulfúrico concentrado, essa etapa do procedimento obtivemos auxilio do técnico de laboratório “Adriano Gonçalves Martins” devido à volatilidade da substância. Após inclusão da solução observou-se as reações em cada amostra, pode-se observar um disco avermelhado e variação de cor indicando colesterol e outros esteroides.
Reação de Liebermann-Burchard: Para realização desse experimento foram identificados 3 tubos de ensaio e em cada tubo inserido o volume de 2ml das amostras:
Tubo 1-Extrato etéreo de gema (Obtido através da extração de colesterol no procedimento anterior).
Tubo 2- Óleo de soja.
Tubo 3- Óleo mineral.
Em cada um dos tubos foi adicionado 2ml de anidrido acético e individualmente pipetado 0,5ml de ácido sulfúrico com auxílio do técnico de laboratório, após inserção da solução de ácido sulfúrico pode-se observar reações nas amostrasindicando um disco esverdeado na amostra da gema e variação de cor indicando nos óleos colesterol e outros esteroides.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
EXPERIMENTO 1- Saponificação de triglicerídeos
No experimento 1 notamos a possibilidade de diferenciar lipídios saponificáveis e insaponificáveis, os saponificáveis e apresentam ácidos graxos em sua composição enquanto os insaponificáveis não. A confirmação de presença dos ácidos graxos é feita por reações de precipitação, adição de ácidos fracos como ácido acético, já outros componentes dos lipídios são detectados com reações em outras especificidades. 
4.2. EXPERIMENTO 2- Extração do colesterol de gema de ovo
	No experimento 2 observou-se a separação dos lipídios no processo de filtração (Anexo II). Em seguida, notamos os resultados da reação de Solkowski, onde apareceu um disco avermelhado variando de cor, que indica a presença de colesterol e outros esteroides (Anexo III). A variação de cor não ocorreu na amostra de óleo mineral porque este não possui colesterol. Em relação a reação de Liebermann-Burchard observou-se que houve a presença de disco avermelhado e variação de cor na amostra da gema, indicando colesterol e outros esteroides. 
CONCLUSÃO
	Ao final do experimento 1, pode-se observar a reação entre uma base forte com um triacilglicerol, sendo que houve a formação de um composto orgânico de característica anfifílica (parte da estrutura possui característica hifofóbica e outra hidrofílica), comprovado pela formação de sabão. Já no experimento 2, pode-se observar que houve mudança em relação à coloração dos compostos, indicando a presença de colesteróis e esteroides.
6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
VOET, Donald. Lipídeos e Membranas. In: VOET, Donald. Bioquímica. 4. ed. Porto Alegre: Artmed, 2013. p. 386-466.
7. ANEXOS
 Anexo I- Processo de filtração
Anexo II- Separação de fases resultante do processo de filtração
Anexo III- Comparação dos resultados