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15/09/2019 1 Profa. MSc. Maria Bernadete Pedro Cel. (63) 98401 6115 Setor Hematologia Setor Hematologia - Principais Exames Realizados Hemograma; Coagulograma; Classificação Sanguínea e Rh; VHS; Coombs direto; Coombs indireto; D fraco; Teste de falcização; Gasometria; Reticulócitos; 15/09/2019 2 Ao ser reunido a dados clínicos permite: Conclusões diagnósticas Prognósticos de grande número de patologias É o exame mais solicitado por médicos de todas as especialidades. Avalia 3 pontos básicos para manutenção da vida: Oxigenação Defesa Imunológica Coagulação Por ser de grande importância não se admitindo erros ou conclusões duvidosas na conclusão do conjunto de dados HEMOGRAMA HEMOGRAMA COMPLETO Estudo das células que compõem o sangue. Analisa a quantidade, qualidade e alterações das células. Composto Por : Eritograma: (oxigenação) Estudo da série vermelha as hemácias. Leucograma: (defesa) Estudo dos leucócitos, Contagem global e Específica e Alterações dos Leucócitos Série Plaquetária.(coagulação) Contagem das plaquetas. Contagem das Hm Ht Hb Indices Hematimétricos INDICADO PARA AVALIAÇÃO Anemias classificação das anemias de acordo com: Alterações na forma, Tamanho, Cor e Estrutura das hemácias e Direcionamento diagnóstico e terapêutico Neoplasias hematológicas, Reações infecciosas e Inflamatórias, Acompanhamento de terapias medicamentosas e Avaliação de distúrbios plaquetários. 15/09/2019 3 DIFERENCIAÇÃO ENTRE: Infecções Viróticas Infecções Bacterianas, Parasitoses, Inflamações, Intoxicações e Neoplasias Através da: Contagem Global Contagem Diferencial Avaliação morfológica dos leucócitos Avaliação quantitativa e morfológica das plaquetas Diagnóstico de patologias congênitas e adquiridas. FLUXOGRAMA DO HEMOGRAMA SEMPRE homogeneizar amostra antes de começar qualquer etapa 1 HEMOGRAMA COMPLETOHEMOGRAMA COMPLETO AVALIAÇÃO QUANTITATIVA E QUALITATIVAMENTE DOS COMPONENTES CELULARES DO SANGUE. HEMOGRAMA HEMOGRAMA COMPLETOCOMPLETO PLAQUETASPLAQUETAS LEUCOGRAMALEUCOGRAMA LEUÓOCITOS LEUÓOCITOS ERITROGRAMAERITROGRAMA HEMÁCEASHEMÁCEAS HEMOGLOBINAHEMOGLOBINA HEMATÓCRITOHEMATÓCRITO ÍNDICES ÍNDICES HEMATIMÉTRICOSHEMATIMÉTRICOS VCMVCM HCMHCM CHCMCHCM RDWRDW CONTAGEM TOTAL CONTAGEM DIFERENCIAL 15/09/2019 4 AMOSTRA Tipo: Sangue total colhido com Anticoagulante EDTA Volume mínimo: 3,0 ml ou de acordo com especificação do tubo de coleta Coleta adequada; Preservação e Transporte: O exame deverá ser realizado imediatamente após a coleta . Se necessário, refrigerar entre 2 e 8 º C HOMOGENEIZAR IMEDIATAMENTE APÓS A COLETA E ANTES DE QUALQUER ETAPA DO HEMOGRAMA Hemograma - Erros Erros na realização do hemograma Homogeneização violenta ou ausência dela Agitador magnético com alta velocidade; Erro de identificação das amostras; Erro na identificação dos tubos contagem Hm e Leuc Erro na identificação do esfregaço Confundir células na contagem diferencial Cálculos errados no indice hematimétrico sem confirmação da anormalidade no esfregaço. ERITROGRAMAERITROGRAMA CONTAGEM DE HEMÁCIAS – VR varia, principalmente em função do sexo homens possuem valores maiores do que nas mulheres. DETERMINAÇÃO DO HEMATÓCRITO – VR também diferem no homem e na mulher. Valor é expresso em % ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS (VCM, HCM, CHCM e RDW) DOSAGEM DE HEMOGLOBINA – A hemoglobina varia na população geral, obedecendo a uma curva de Gauss. Considera-se o valor médio de 15g. 15/09/2019 5 ERITRÓCITO Glóbulos vermelhos: •Células anucleadas Sem nem organelas, Forma de discos bicôncavos São constituídas basicamente por globulina e hemoglobina., Também designadas por: Eritrócitos, hemácias ou células vermelhas. FUNÇÃO: Transportar oxigénio para tecidos e o dióxido de carbono (em menor quantidade) dos tecidos p/ os pulmões CONTAGEM MANUAL Hemacias e Leucócitos CÂMARA DE NEUBAUER é uma câmara grossa de vidro composta por duas câmaras que possuem, cada uma, uma grade de contagem no centro. Conta-se : Hemácias e Leucócitos Totais Coloca-se lamínula sobre a câmara para contagem das células no microscópio. Lec hem 15/09/2019 6 CONTAGEM DE ERITRÓCITOS Câmara de Neubauer A câmara está dividida em 9 quadrados (grandes) Cada um destes está dividido em 25 quadrados mais pequenos A contagem das hemácias pode ser feita por métodos manuais ou automáticos. A contagem manual é feita na câmara de Neubauer CONTAGEM DE ERITRÓCITOS CALCULANDO AS HEMACIAS Soma-se todas as hemácias contadas nos 5 quadrantes da Camara e multiplica o total por 10000 HEMÁCEASHEMÁCEAS (Glóbulos(Glóbulos vermelhosvermelhos ouou Eritrócitos)Eritrócitos) Valores normais: Homens: 4.500.000 a 6.000.000 He/mm3 sangue Mulheres: 4.000.000 a 5.500.000 He/mm3 sangue Recém-nascidos: 5.500.000 a 7.000.000 He/mm3 sangue HEMOGLOBINAHEMOGLOBINA -- é uma molécula responsável pelo transporte de oxigênio.é uma molécula responsável pelo transporte de oxigênio. Valores normais: Homens: 90 a 100% ou 15,5 a 17,3g% Mulheres: 80 a 90 % ou 13,8 a 15,5g% Média normal: cerca de 90% ou 15,5g% de hemoglobina HEMATÓCRITO HEMATÓCRITO -- é o percentual do sangue que é ocupado pelas hemácias.é o percentual do sangue que é ocupado pelas hemácias. Valores normais: Homens ...................................... 40 a 54% Mulheres ................................... 37 a 45% Crianças ..................................... 35 a 37,5% ERITROGRAMAERITROGRAMA 15/09/2019 7 HEMATOCRITO É o volume ocupado pelos eritrócitos num volume de 1000 ml de sangue total. Macro-método (técnica de Wintrobe) Na camada mais superficial é o plasma, que tem uma cor amarelada Na camada do meio estão localizadas as plaquetas e leucócitos Na última camada estão localizados os eritrócitos, a leitura desta camada dá-nos o valor do hematocrito ERITROGRAMAERITROGRAMA ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS Volume corpuscular médio (VCM): Determina o tamanho das hemácias. <80fL = microcitose >100fL = microcitose Hemoglobina corpuscular média (HCM): Expressa a quantidade média de hemoglobina que existe dentro de uma hemácia, variação: entre 27 e 34 pg. Determina se a hemácia está hipocrômica ou hipercrômica. Concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM):É a relação entre o valor da hemoglobina contida num determinado volume de sangue e o hematócrito, sendo expressa em porcentagem. O valor varia de 32 a 35%. RDW (Red Cell Distribution Width): Avalia o grau de variação no tamanho das hemácias (Anisocitose). Útil para diferenciar as anemias com deficiência de ferro das talassemias. Valores Normais: 11,5 a 15% ERITROGRAMAERITROGRAMA ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS Através do VCM classifica as anemias como: NORMOCÍTICAS MACROCÍTICAS MICROCÍTICAS HCM e CHCM classificam as anemias quanto à concentração de hemoglobina ( que corresponde a coloração da célula) NORMOCRÔMICAS HIPERCRÔMICAS HIPOCRÔMICAS RDW – Avalia a homogeneidade do tamanho da hemácias (anisocitose - quando não há homogeneidade no tamanho eritrocitário). 15/09/2019 8 ERITROGRAMAERITROGRAMA Variações da Série Vermelha Microcitose - Hemácias abaixo de 80 (adulto) Associada à Deficiência de Ferro, Talassemias e Anemias Sideroblásticas. Macrocitose - Hemácias acima de 100 . Associada à Deficiência de Vitamina B12, Quimioterapia, Doença Hepática, Hipotireoidismo e Mieloma. Hipocromia - Hemáciasmenos coradas do que o normal. Observa-se aumento do halo central da hemácia. Poiquilocitose - Variação na forma das hemácias. Anisocitose - Variação no tamanho das hemácias. ERITROGRAMAERITROGRAMA CAUSAS DE MACROCITOSE: Alcoolismo Uso de fármacos como: AZT, anticonvulsivantes, quimioterápicos Hepatopatias Esplenectomia Hiper-regeneração eritróide Anemias megaloblásticas (def. vit B12 e /ou ac. Fólico) Anemia aplástica SMD CAUSAS DE MICROCITOSE: Deficiência síntese de Hb : Anemia ferropênica Talassemia Policitemia vera Hemoglobinopatias ANEMIAS ASSOCIADAS À NORMOCITOSE: Anemia de doença crônica Deficiência combinada de vit.B12 e /ac.fólico com def.ferro IRC SMD DOSAGEM DE HEMOGLOBINA A dosagem de hemoglobina é a determinação da concentração do pigmento hemoglobínico no sangue total. O resultado é expresso em g/dL Apresenta valores que variam com a idade e o sexo. Os valores de referência variam de acordo com o laboratório, mas são geralmente em torno de 12 a 15,8 g/dL para mulheres e 13 a 16,5 g/dL para homens. Existem vários métodos de dosagem, onde a hemoglobina é transformada em um composto estável e lida no fotocolorímetro ou no espectrofotômetro. 15/09/2019 9 Determinação da Hemoglobina Métodos de Oxihemoglobina. Hemácias são hemolisadas com água destilada liberando oxihemoglobina. Leitura Fotocolorimétrico (filtro verde) Espectrofotômetro (540 nm) contra o branco de água destilada contendo 2 gotas de amônia a 50% Cálculo: absorbância x fator de calibração = conc. De Hb no sangue (g de Hb/100 ml de sangue). Método de Cianohemoglobina Neste método os compostos de hemoglobina, convertidos em ciametahemoglobina sob a ação do cianeto de potássio e do ferricianeto de potássio (reagente de Drabkin). A leitura: Fotocolorimétro (filtro verde) Espectrofotômetro (540 nm) contra solução de Drabkin. Cálculo: absorbância x fator de calibração= g/dL Hb sangue total. Desvantagens: Extrema toxicidade do cianeto. LEUCOGRAMALEUCOGRAMA ESTUDO DA SÉRIE BRANCA / LEUCÓCITOS É composto por 2 contagens: CONTAGEM TOTAL (global) dos leucócitos Contagem é realizada câmara de newbauer CONTAGEM DIFERENCIAL Conta-se 100 células em um esfregaço sanguíneo Consiste em determinar a proporção existente entre as distintas variedades de leucócitos. Indicado: Avaliação de infecções, Inflamações, Acompanhamento de terapias medicamentosas, Neoplasias hematológicas, entre outras. CONTAGEM TOTAL DOS LEUCÓCITOS CONTAGEM DOS LEUCÓCITOS Fazer a contagem de todos os leucócitos nos 4 quadrantes laterais da câmara de Newbauer, Multiplicar o número de leucócitos contados nos 4 quadrantes por 50. 1 2 3 4 15/09/2019 10 Contagem GlobalContagem Global Valores normais: Adultos: 4.000 a 11.000 p/mm3 de sangue Recém-nascidos: 10.000 a 25.000 p/mm3 de sangue Crianças de l ano: 6.000 a 18.000 p/mm3 de sangue Crianças de 4 a 7 anos: 6.000 a 15.000 p/mm3 de sangue Crianças de 8 a 12 anos: 4.500 a 13.500 p/mm3 de sangue Valores abaixo da Referencia: LEUCOPENIA Valores acima da Referencia : LEUCOCITOSE LEUCOGRAMALEUCOGRAMA TIPOS DE CÉLULAS DO LEUCOGRAMA TIPOS DE CÉLULAS DO LEUCOGRAMA Bastões 22 a 3%a 3% Segmentado 59 a 6259 a 62 Neutrofilo 60 a 65%60 a 65% Basófilos 0 a 1 %0 a 1 % Eosinófilos 2 a 4 %2 a 4 % Linfócitos 20 a 30 %20 a 30 % Monócitos 4 a 8 %4 a 8 % Plasmócitos 0 a 1 %0 a 1 % LEUCOGRAMALEUCOGRAMA LEUCOCITOSE ASSOCIADA À CÉLULAS BRANCAS LEUCOCITOSE ASSOCIADA À CÉLULAS BRANCAS : : Bastonetes - Infecções bacteriana agudas . Neutrófilos - Infecções bacterianas, Infarto Agudo, Leucemia mielocítica e Hemorragias. Eosinófilos - Alergias, Parasitoses, Doenças da Pele . Basófilos - Mielofibrose, Dermatites, Alergia, Leucemia crônica. Linfócitos - Infecções agudas, Crônicas virais(Tuberculose, Sífilis) e Mononucleose (grande número de linfócitos atípicos). Monócitos - Tuberculose, Protozooses (Malária e Tripanossomose), Leucemias agudas, Lúpus Eritematoso Sistêmico e Artrite Reumatóide. 15/09/2019 11 LEUCOGRAMALEUCOGRAMA LEUCOPENIA ASSOCIADA À CÉLULAS BRANCAS LEUCOPENIA ASSOCIADA À CÉLULAS BRANCAS : : NEUTRÓFILOS – Uso de fármacos (fenotiazinas, antitireoideos, clozapina, quimioteráp. Neoplasias, Doenças infecciosas, Neutropenias crônicas (neutropenia cíclica, neutropenia crônica benigna, síndromes Genéticas) EOSINÓFILOS - Casos de estímulo do eixo hipófise/supra-renal (estresse, doenças infecciosas), uso de corticóide Linfócitos -Linfopenia passageira (estresse agudo), após radioterapia, drogas imunossupressoras, Linfoma de Hodgkin e AIDS Basófilos – Sem significado clínico. Monócitos - Sem significado clínico. Bastonetes – Sem significado clínico. HEMOGRAMA ATLASHEMOGRAMA ATLAS HEMÁCEA PLAQUETA LEUCÓCITO ESFREGAÇO SANGUÍNEOESFREGAÇO SANGUÍNEO Permite a separação de células em meio líquido. Espalhando fragmento de tecido sobre lâmina de vidro Provocando a dissociação dos elementos celulares e a sua aderência ao vidro. Formando uma fina camada de células, facilitando a observação. Depois de seco o material pode ser fixado e corado. A confecção do esfregaço sanguíneo é crucial para a realização de um hemograma confiável, por isso a sua padronização deve ser a principal exigência. 15/09/2019 12 ESFREGAÇO SANGUÍNEO ESFREGAÇO SANGUÍNEO TÉCNICA Utiliza-se uma lâmina limpa, sem resquícios de gordura ou outros materiais. Uma lâmina extensora (cantos recortados). O esfregaço ideal deve ser livre de falhas e paradas, não muito espesso, nem fino demais e sem falhas na cauda. LAMINA EXTENSORA Confecção do Esfregaço 1. Limpar e desengorduradas lâminas 2. Colocar 1 gota de sangue na lâmina. 3. Posicionar a extensora a frente da gota num ângulo 45º 4.Puxar a extensora para trás até o sangue se espalhar entre a lâmina e a extensora 5.Com movimento uniforme, para frente, fazer lâmina extensora deslizar sobre a lamina 6.O sangue será arrastado e espalhará uma fina camada; 7. Agitar esfregaço ao ar até secar completamente 8.Identifica-lo com lápis na parte fosca da lamina 9. Ao microscópio às 2 bordas onde são realizadas as contagens devem apresentar os eritrócitos mais separados e os leucócitos bem distribuídos IDENTIFICAÇÃO DA AMOSTRA NA LÂMINA PREPARADA Sem a identificação todo trabalho é inútil. Deve ser de forma organização; 15/09/2019 13 ESFREGAÇO 1- CABEÇA 2- CORPO 3- CAUDA A confecção padronizada do esfregaço é de suma importância para a realização de um hemograma confiável. F) Sujeira ou gordura na lâmina ou amostra lipêmica G) Pressão desigual na lâmina extensora H) Demora na confecção do esfregaço (gota seca) . A) Borda irregular da lâmina extensora B) Pausas na hora de mover a lâmina extensora C) Movimento muito rápido D) Gota de sangue muito pequena E) Gota de sangue concentrada do centro da lâmina COMO PERCORRER A LÂMINA DURANTE A VISUALIZAÇÃO 15/09/2019 14 CONTAGEM CELULAR – MELHOR ÁREA COLORAÇÃO- ESFREGAÇO Método Wright O corante utilizado é uma solução de eosina e uma mistura de azul de metileno e azul B junto de outros derivados do álcool metílico. Coloração de uma forma geral baseia-se: Eosina ( corante acido) Azul de metileno (alcalino) Alcool (Fixador) Método Rapido - Panótipo 1. FINALIDADE: Conjunto para coloração rápida em hematologia. 2. INTRODUÇÃO: Baseia-se no princípio de coloração hematológica estabelecida por Romanowsky. Atua em 15 segundos. 3. AMOSTRA: Amostra usada consiste em lâminas com extensões de sangueperiférico PANÓTICO RÁPIDO LB PROCEDIMENTO TÉCNICO 1- Fazer esfregaço deixar secar em temperatura ambiente; 2- Preencher 3 recipientes ( 1 para cada solução) nº 1, 2 e 3 3- Submergir a lâmina na solução nº1 mantendo movimento contínuo de cima para baixo por 5 seg. deixar escorrer. 4- Submergir as lâminas na solução nº2 mantendo-se um movimento contínuo de cima para baixo por 5 seg. 1 2 3 15/09/2019 15 PANÓTICO RÁPIDO LB 5- Submergir as lâminas na solução nº 3 mantendo-se um movimento contínuo de cima para baixo 5 seg (5 imersões de 1 segundo cada) e deixar escorrer bem Lavar com água deionizada recente secar ao ar na posição vertical e com o final da extensão voltado para cima. Observação: Os tempos de imersão sugeridos podem ser alterados conforme critério do usuário para ajustes necessários. RESULTADOS OBTIDOS NA COLORAÇÃO Hemácias: Coloração rósea. Plaquetas: Coloração azulada. Neutrófilos: Núcleo azul escuro e citoplasma rosa pálido com granulações que variam do rosa ao azul claro. Linfócitos: Núcleo azul violeta e o citoplasma azul. Basófilos: Núcleo púrpura a azul escuro e citoplasma com granulações volumosas azul escuro. Monócitos: Núcleo azul violeta e citoplasma azul claro. Eosinófilos: Núcleo azul e citoplasma rosa pálido com grânulos volumosos que variam do vermelho ao laranja. 15/09/2019 16 ALTERAÇÕES MORFOLÓGICAS EM LEUCÓCITOS Granulação tóxica: Consiste na persistência de grânulos primários, próprios de pró-mielócitos. Durante a maturação normal, os grânulos primários são substituídos por grânulos secundários, que não se coram, ou coram-se fracamente. Vacuolização citoplasmática: São vacúolos claros, causados provavelmente por autodigestão, pois toxinas bacterianas podem induzir ruptura dos lisossomos do neutrófilo, liberando seu conteúdo enzimático. CONTAGEM DE PLAQUETAS São responsáveis processos Bioquímicos envolvidos na: Hemostasia, Trombose e Coagulação do sangue. Morfologicamente falando: As plaquetas são fragmentos citoplasmáticos anucleados Formadas apartir do seu precursor, o megacariócito, Célula grande e multilobulada formada na medula óssea. PLAQUETASPLAQUETAS Importância da contagem de plaquetas: Antes de cirurgias Avaliação de quadro de sangramentos sem causa definida. Monitoramento de doenças como a dengue Valores Normais: 150 a 450 mil /mm3 ALTERAÇÕES: TROMBOCITOSE Aumento na contagem de plaquetas presente: Respostas às infecções, Processos inflamatórios, Hemorragias e pós-operatório. Podendo estar presente na anemia ferropriva e Doenças mieloproliferativas crônicas. 15/09/2019 17 TROMBOCITOPENIA- PLAQUETOPENIA Diminuição na contagem de plaquetas, presente em: Síndromes Congênitas, Uso abusivo de Drogas, Doenças Hereditárias, Infecções Virais (p.ex. Dengue), Deficiência de Vitamina B12, Púrpura Trombocitopênica, Vasculites, Neoplasias, Hemólise Intravascular e na gestação (pré eclampsia , HELLP, trombocitopenia gestacional). CONTAGEM DE PLAQUETAS Câmara de Newbauer:Método -Ress-Ecker Sangue com EDTA diluído, as plaquetas são contadas por microscopia ótica comum. Método utiliza de câmara úmida. Contagem microscópio (40x), no quadrante central (quatro quadrantes laterais e um no centro), conforme contagem de he. Calcular o nº de plaquetas por mm³ :Multiplicando o número de plaquetas contadas nos quadrantes por 10.000. Contagem Microscópica: Contar 5 campos de 200 hemácias em cada (1000 hemácias), multiplicar pelo nº total de Hcs e dividir por 1000. Nº de plaquetas= total de plaq(em 1000 hcs) x nº total de hcs 1000
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