Imunoensaios: Aglutinação, Coombs, Floculação e Precipitação

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RESUMO IMUNOENSAIOS 
AGLUTINAÇÃO
Há visualização do imunocomplexo 
Aglutinação direta:
Feito em testes de ABO, onde ocorre a hemaglutinação.
O epítopo que estou procurando já faz parte do antígeno que está ali. 
Inibição da aglutinação indireta: 
Aglutinação de hemácias 
No resultado positivo há ausência de hemaglutinação formando um ´´botão´´e no resultado negativo há presença de hemaglutinação formando um ´´tapete de hemácias´´. 
Aglutinação indireta/passiva:
Emprega adsorção de Ag´s ou Ac´s solúveis em micropartículas inertes (Látex)
Suporte com Ag´s: pesquisa por Ac´s
Suporte com Ac´s: pesquisa por Ag´s (látex já adsorvido com o Ag)
As hemácias fazem o paepel do látex, é uma molécula carreadora 
Aglutinou resultado positivo (formação de um ´´leite branco´´) e não aglutinou resultado negativo (transparente)
Microaglutinação: 
Partículas muito pequenas de gelatina colorida (molécula carreadora) que ampliam a área onde se ligam os Ag´s.
Formação de um botão não ocorre aglutinação e o teste é negativo. Formação de um tapete e suspensão ocorre a aglutinação e o teste é positivo. 
Coombs: 
Utiliza hemaglutinação indireta.
Pesquisas de Ac´s contra Ag´s eritrocitários. 
Teste feito em casos de incompatibilidade materno-fetal, anemias hemolíticas, autoimunes, provas de compatibilidade pré tranfusionais e doença hemolítica do recém-nascido. 
Coombs direto: 
Pesquisa anticorpos aderidos a células do meu corpo;
Aglutinou o teste é positivo e não aglutinou é negativo; 
Esse teste é feito no recém-nascido pois os anticorpos se encontram grudados nas hemácias do bebê;
Feito na doença hemolítica auto-inune. 
Coombs indireto:
Anticorpos irregulares e livres no plasma; 
Feito em mulheres grávidas pois os anticorpos estão livres e em testes pré transfusionais;
No coombs indireto é necessário adicionar uma molécula no soro ou plasma do paciente para que o anticorpo grude e mais o soro de coombs; 
Aglutinou o teste é postivo e não aglutinou o teste é negativo. 
Pegunta: *Qual teste é necessário fazer para eu saber se a mãe está sensibilizada? COOBS INDIRETO. 
*Se a mãe foi imunizada qual resultado o teste de Commbs daria? (mãe imunizada com a vacina até 72 horas antes do parto) INDIRETO POSITIVO E DIRETO POSITIVO PARA O BEBÊ. 
Inibição da aglutinação indireta: 
Esse teste é feito para aumentar a sensibilidade da aglutinação indireta. O sistema revelador é uma molécula grande adsorvido com o mesmo Ag. 
Molécula livre não há aglutinação e o resultado é positivo. Molécula grudou e houve aglutinação, então o resultado é negativo. 
Floculação:
Leva a formação de imunocomplexos em meio líquido detectáveis com auxílio do MO. Teste VDRL (Sífilis). 
Teste de triagem VDRL: Procura por anticorpos específicos contra colesterol, cardiolipina e lectina presentes na superfície do vírus da Sífilis. Se o resultado ter negativo a pessoa não possui sífilis, e se der positivo a pessoa possui (talvez) a sífilis. Por que outro antígeno também possui esses anticorpos de membrana. Contudo o teste confirmatório tem que ser feito para aqueles que deram positivo no teste de triagem. Teste confirmatório se houver floculação é positivo e se não houver é negativo para sífilis. 
ENSAIO DE PRECIPITAÇÃO: 
Identifica e quantifica precipitados resultantes de interações Ag-Ac. Ambos solúveis. Durante a incubação ocorre a difusão do Ag na Agarose, com formação de complexos Ag-Ac. 
Imunodifusão: 
Vantagem – em várias amostras posso pesquisar por vários Ag´s.
Simples: Apenas 1 se difunde. Ou o Ag ou o Ac.
Simples linear: Um deles se difundem apenas, em uma direção. Permite determinar a [ ] do Ag. 
Simples radial: Se difunde em todas as direções e quanto mais grosso, há mais Ag, pois, a linha do precipitado foi maior. É possível realizar em amostras de vários pacientes ao mesmo tempo. 
Dupla radial: Ag e Ac se difundem em várias direções formando linhas/arcos de precipitações correspondentes aos imunocomplexos. É possível realizar apenas em 1 paciente. 
Imunoeletroforese: 
Detecta Ag utilizando Ac específico. É um método QUALITATIVO e NÃO possui sensibilidade alta. 
Combinação de eletroforese e difusão dupla em meio gelificado. 
Quanto maior a banda, maior é a quantidade de Ac procurado. 
EX: IgG alta – doença passada e IgM- doença recente 
Imunofixação: 
Combinação de eletroforese + imunoprecipitação dupla em meio gelificado. E é mis sensível que a imunoeletroforese. Utilizada para diagnóstico de doenças precoces como gamopatias, doenças de cadeia pesada e doenças linfoproliferativas. 
Eletroimunodifusão: 
Ac é colocado em lâmina e o Ag é adicionado em orifício e vai para eletroforese. A precipitação é proporcional à concentração. 
Simples: maior precipitação quer dizer mais antígenos. 
Dupla: A quantificação ocorre pela linha de precipitação que aparece, quanto mais grossa mais Ag ou Ac tem. 
Automação: 
Nefelometria: baseia-se na dispersão da luz produzida pela precipitação de Ag e Ac diluídos em solução. Medida em célula fotométrica em D.O.
Turbidimetria: Mede a luz transmitida, lida em espectrofotômetro. 
ENSAIOS LÍTICOS: 
São imunoensaios para detecção de Ag´s e Ac´s, tendo como produto, hemólise ou não.
Sinstema do complemento: Serve para furar a membrana do Antígeno. 
CH50: dosagem do complemento 
Mensura a atividade funcional do sistema do complemento (via clássica) – por que necessita de anticorpos - pela lise de hemácias revestidas com IgM e IgG. 
Complemento diminuído: doenças genéticas 
Complemento aumentado: Processos inflamatórios; doenças autoimunes; processos crônicos agudos. 
Sistema revelador: Hemácias + Ac 
Presença de hemólise: o complemento está funcionando 
Não hemólise: Alguma etapa do complemento não está funcionando (não dá para saber em qual etapa). 
Fixação do complemento (RFC):
Detecta presença de Ag ou Ac quando um dos elementos é conhecido. Não dosa o sistema do complemento, somente utiliza moléculas prontas de laboratório.
Não hemólise (botão) Tem Ac e hemólise (tapete) Não tem Ac.
Inibição da Hemólise:
Detecção de Ac’s anti-estreptolisina O. Esse estreptococos produzem uma toxina que lisa hemácias. 
Formação de imunocomplexo: positivo para anticorpos. Não formação de imunocomplexo não indica presença de anticorpos. 
IMUNOENSAIOS ENZIMÁTICOS CONJULGADOS 
O sistema revelador é conjugado. 
Imunofluorescência:
Direta: Dosa antígeno. Emite luz é positivo e não emite luz é negativo e não tem o Ag. 
Indireto: Dosa anticorpo. Utiliza-se um anti-anticorpo específico contra o anticorpo que eu estou dosando. 
Fluorescência = positivo. 
Citometria de fluxo: 
Utilizada para contar, examinar e classificar partículas microscópicas suspensas em um meio líquido em fluxo. Eixo Y – granulosidade e eixo X – tamanho da célula. 
Polarizada: 
Utilizada para detectar antígenos muito pequenos - HAPTENOS
Polarizada para uma direção: negativa 
Polarizada para várias direções: positiva 
Radioimunoensaios: 
É utilizado somente por falta de opção
Quanto + radiação – antígeno 
Quanto – radiação + antígeno 
IMUNOENZIMÁTICOS: 
EMIT: 
Vantagem: não tem etapa de lavagem. 
Amostra +: Substrato não vai ser quebrado. 
Amostra -: Substrato quebrado e emite cor.