métodos de microscopia

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30/08/2019
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Aspectos celulares e 
teciduais
Prof. Thaís de Mérici
thais.domingues@prof.una.br
Temas estudados
Métodos de estudo empregados no estudo de células e tecidos.
Ultraestrutura e a função dos principais componentes de uma célula eucariótica.
Mecanismos de síntese e degradação de macromoléculas.
Morfologia e classificação dos tecidos epiteliais.
Morfologia e classificação dos tecidos conjuntivos propriamente ditos e com 
propriedades especiais (adiposo, ósseo e cartilaginoso).
Morfologia e classificação dos tecidos musculares.
Morfologia dos tecidos nervoso central e periférico.
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Bibliografia
- JUNQUEIRA, L.C. & CARNEIRO, J. Histologia Básica. 10ed. Guanabara Koogan,
2004.
Distribuição de notas
• 20 ptos D1 
• 20 ptos D2
• 20 ptos MODULAR
• 20 ptos análise de artigos (A1)
• 20 ptos seminário (A2)
• TOTAL 100 ptos
• OBS < 69,0 = 69,0 ≠ 70,0 = necessidade de PS
> 70,0 = aprovação
• OBS 2: não respondo WhatsApp nem redes sociais para assuntos 
acadêmicos. Adiciono, sigo e respondo para qualquer outro assunto! 
respondo e-mail SEMPRE: thais.domingues@prof.una.br
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Calendário Aspectos celulares e teciduais - 2019/2 - Quartas-feiras
Data Abordagem
quarta-feira, 21 de agosto de 2019 Princípios básicos da microscopia
quarta-feira, 28 de agosto de 2019 Membrana plasmática e transporte de moléculas
quarta-feira, 4 de setembro de 2019 Citoesqueleto
quarta-feira, 11 de setembro de 2019 Análise de artigo científico em sala - A1
quarta-feira, 18 de setembro de 2019 Organelas celulares, síntese e secreção de moléculas
quarta-feira, 25 de setembro de 2019 Núcleo interfásico e divisão celular
quarta-feira, 2 de outubro de 2019 Avaliação D1
quarta-feira, 9 de outubro de 2019 Tecido epitelial de revestimento
quarta-feira, 16 de outubro de 2019 Tecido epitelial glandular
quarta-feira, 23 de outubro de 2019 Tecido conjuntivo e matriz extracelular
quarta-feira, 30 de outubro de 2019 Tecido cartilaginoso e tecido ósseo
quarta-feira, 6 de novembro de 2019 Avaliação D2
quarta-feira, 13 de novembro de 2019 Tecido muscular
quarta-feira, 20 de novembro de 2019 Tecido nervoso
quarta-feira, 27 de novembro de 2019 ExpoUNA – não haverá aula
quarta-feira, 4 de dezembro de 2019 Apresentação de seminários - A2
quarta-feira, 11 de dezembro de 2019 Apresentação de seminários - A2
quarta-feira, 18 de dezembro de 2019 Prova Substitutiva (PS)
Aspectos celulares e teciduais
Introdução à Biologia Celular e 
Histologia Geral
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O que é um NERVO?
Como se forma um tumor?
Você sabia que as células 
possuem ESQUELETO?
Por que o bebê que fica muito 
agasalhado tende a ser obeso?
Como nosso corpo cresce?
Por que a mulher tem mais 
dificuldade para emagrecer em 
relação ao homem?
Por que não dói cortar o cabelo?
Por que não dói cortar a unha?
Por que dói cortar o dedo?
Por que o Kiko nunca perdeu 
um pedaço do braço? kkkk
Creme com colágeno funciona?
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Citologia e Histologia
Citologia – Estudo da célula
Histologia – Descreve a estrutura microscópica (baseada em cortes finíssimos)
das células, tecidos e órgãos dos indivíduos.
Célula – Menor unidade do organismo limitada por membranas, preenchidas com
uma solução aquosa concentrada de químicos e dotada da capacidade de se
dividir.
SistemaTecido ÓrgãoCélula Organismo
Como estudar estruturas de tamanhos tão 
pequenos?
oTécnicas microscópicas
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o O conhecimento sobre as células progridem paralelamente ao avanço 
tecnológico e as progressivas descobertas científicas.
Microscópio de luz
Técnicas citoquímicas
Microscópio eletrônico
Separação de organelas celulares
Cultura de células
Biologia celular e molecular
Microscopia óptica
Observação de células e tecidos ao microscópio
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O microscópio de luz
Lente ocular
Condensador
Ampliação total = 
aumento da objetiva 
+
aumento da ocular
Resolução: separação de detalhesLente objetiva
*Limite de resolução do microscópio de
luz: 0,2µm
Limite de resolução: menor distância
que deve existir entre dois pontos para
que eles apareçam individualizados
Ampliação + resolução = riqueza de detalhes
Poder de resolução
oLimite de resolução: menor distância que deve existir entre dois pontos
para que eles apareçam individualizados
1 micrômetro = 1 metro/1000
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Alberts, 2011
Unidades de microscopia
oTécnicas microscópicas
Ocular Objetiva Aumento
10 x 10x (pequeno aumento) 100x
10 x 40x (grande aumento a seco) 400x
10 x 100x (imersão em óleo) 1.000x
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Como a imagem se forma no microscópio óptico?
o A imagem se forma após o feixe de luz atravessar alguma estrutura.
o Uma combinação de lentes objetivas e de lentes oculares é arranjada para
focar, no olho, uma imagem da amostra iluminada.
o Células vivas ou camadas muito delgadas ou de tecidos, membranas
transparentes podem ser vistas diretamente no microscópio.
o A maioria dos tecidos e órgãos são espessos e não permitem a passagem
adequada da luz para formação de uma imagem.
Preparação de tecidos para microscopia
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1 – Coleta de material
o Consiste na obtenção do fragmento de órgão a ser estudado
o O material é retirado e recortado em fatias de no máximo 3 mm de espessura.
2 - Fixação
o Evitar ação de proteases (autólise)
o Evitar putrefação
o Preservar estrutura e composição molecular
o A fixação pode ser feita por métodos químicos (fixadores) ou físicos
(congelamento)
o Os tecidos são imersos em soluções de agentes desnaturantes
o A fixação ocorre pela estabilização químicas entre as moléculas (formação de
pontes )
o Mais utilizados: paraformaldeído 4%,
formol, glutaraldeído, Karnovisky, Bouin.
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3 - Inclusão
o Permite obtenção de secções delgadas
o A substância utilizada deverá proporcionar rigidez
o Comumente feita em parafina e resinas plásticas
o Três etapas: desidratação e clareamento
1 - Desidratação – O material é imerso em vários banhos de álcool,
em ordem crescente de concentração, até o álcool absoluto (70% ao
100%).
2 - Clareamento – Visa impregnar a peça com um solvente de
parafina. O mais usado é o xilol.
3 - Imersão – O material é mantido em parafina ou resina líquida,
por tempo determinado.
3 - Inclusão
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4 - Microtomia
o Consiste na obtenção de cortes finos (1-10 mm)
o Os cortes são colocados para flutuar sobre a superfície de água (distender os 
cortes) e depois colocados sobre as lâminas de vidro, onde aderem e são 
corados
5 - Coloração
o Permite evidenciação do tecido e a distinção de seus componentes.
o São utilizados corantes: substâncias ácidas ou básicas.
o Corantes mais comuns: hematoxilina & eosina, Alcian-blue, azul de toluidina, etc.
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5 - Coloração
5 - Coloração
Corantes básicos:
Hematoxilina, Azul de Toluidina, Azul de Metileno
Corantes ácidos:
Eosina, Orange de Acridina, Fucsina Ácida
HE
hematoxilina eosina
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6 – Montagem da lâmina
o Na montagem, uma gota de resina é colocada sobre a lamínula e esta é
pressionada sobre a lâmina, protegendo o corte histológico.
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Resumindo...
Planos de corte
(Cedido pela Profa. Gleydes G. Parreira, UFMG)
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Microscopias especiais
Imunohistoquímica e Imunofluorescência
Microscopia eletrônica de transmissão
Microscopia eletrônica de varredura
Microscopia intravital
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Imunohistoquímica e Imunofluorescência
Imunohistoquímica e Imunofluorescência
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Microscopia eletrônica de transmissão
o Alta resolução, permitindo a 
espécime ser ampliada 400.000 
vezes,para ser vista em detalhes
Microscopia eletrônica de varredura
o Os elétrons não atravessam o espécime, mas os elétrons varrem uma
delgada camada de metal previamente aplicada ao espécime e são
refletidos pelos átomos do metal, que são capturados por um detector e
transmitidos a amplificadores que geram o sinal.
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Microscopia eletrônica
Transmissão
Varredura
Microscopia eletrônica
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Microscopia eletrônica
Microscopia eletrônica
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21
Microscopia eletrônica
Microscopia eletrônica
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Microscopia intravital
Marques et al, 2015
Microscopia intravital
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Obrigada!