Contagem de Leucocitos - Aula Pratica

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Aula Pratica – Turma de Hematologia Clinica
Contagem de Leucócitos
Materiais:
Sangue Total em EDTA;
Líquido de Turk;
Câmara de Neubauer;
Lamínulas;
Pipeta de 400 µL ou 200 µL;
Pipeta de 20 µL;
Frasco de Penicilina ou Tubo de ensaio;
Ponteiras.
Técnica: 
Consiste na determinação do número de leucócitos por mm³ (ou µL) de sangue, em um hemocitômetro, após a diluição de amostra de sangue total com solução que promova lise de eritrócitos (hemácias) e plaquetas. A contagem é feita nos quatro quadrados laterais da câmara de Neubauer (L1+L2+L3+L4) e o resultado em mm³ (ou µL) é dado após ajuste dos cálculos para o grau de diluição e local de contagem.
Método:
Pipetar 0,4 ml (400 µL) do liquido diluidor para um tubo de hemólise;
Aspirar 0,02 ml (20 µL) de sangue total (Limpar a parte externa da ponteira);
Transferir os 20 µL para o tubo de hemólise com liquido diluidor (tendo o cuidado de lavar o interior da ponteira por aspiração e expulsão);
A diluição será de 1:20;
Agitar suavemente;
Aguardar 2 minutos para depois proceder ao enchimento da câmara e a contagem em microscópio óptico (Objetiva 10x – Condensador baixo).
Cálculo:
Cada quadrado lateral secundário (cada L) tem capacidade para um volume de 0,1 mm³, ou seja, 1/10 mm³;
N: Número total de leucócitos lidos nos quatro quadrados;
10: ajuste para mm³;
20: ajuste para grau de diluição;
4: ajuste para o número de quadrados lidos.
Leucócitos/mm³: Nx10x20/4
Ou
Leucócitos/mm³: (L1+L2+L3+L4)x50