Coleta de Material Micologico

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Coleta de material 
micológico
Profa. Tatiana
2019
MICOSE SUPERFICIAL
Pitiríase versicolor (Malassezia furfur)
Limitadas à pele, pêlos, unhas e mucosas.
MICOSE CUTÂNEA
Envolve as camadas mais profundas da epiderme e seus tegumentos,
o cabelo e as unhas.
MICOSE SUBCUTÂNEA
Esporotricose, Cromomicose e Rinosporidiose
Envolvem a derme, tecidos subcutâneos e músculo.
MICOSE SISTÊMICA
Paracoccidioides brasiliensis
Atacam órgãos internos do organismo.
Adquirida por inalação dos esporos dos fungos.
Recomendações para a coleta 
20 – 30 dias antes do exame
• Primeira etapa do diagnóstico laboratorial
• Deve ser feita corretamente, sob pena de inutilizar todo o procedimento
laboratorial posterior, pois amostras coletadas inadequadamente podem
redundar em resultados falsos.
• A positividade e segurança de um exame direto dependem da obtenção de
uma amostra apropriada.
• Todos os espécimes clínicos encaminhados ao laboratório de micologia
médica devem vir acompanhados de uma ficha padrão, contendo todos os
dados clínicos e epidemiológicos do paciente.
• Ficha: identificação, origem, residência, tempo de evolução da doença,
localização e aspectos clínicos da lesão, possível contato com animais, uso
de drogas antifúngicas nos últimos 30 dias e suspeita clinica, quando
informado pelo médico.
Coleta de amostras clínicas para exame micológico 
• Lâmina de bisturi
• Pinça de depilação
• Tesoura
• Lâminas de microscopia
• Placas de petri
• Tubos de ensaio com salina esterilizada
• Swabs
COLETA - Materiais 
• Dia da coleta: higiene corporal normal
• Não é permitido o uso de cremes, loções, pomadas ou outras substâncias
gordurosas, pois:
- formação de artefatos
- dificulta a detecção de estruturas fúngicas
- impede o isolamento dos fungos
Amostras clínicas / Pele 
Tinea Pedis – coleta das escamas de 
pele
Tinea Pedis
Tinea capitis 
• Se a lesão for ao longo do cabelo ou pêlo (nódulos, por exemplo), esses devem ser
cortados com tesoura e acondicionados em placas de petri.
Tinea capitis
Tinea unguium ou onicomicose 
• Gaze com álcool 70%
• Bisturi
• Palito (manicure) ou Espátula
• Placa de petri
Onicomicose 
• Gaze com álcool 70%
• Bisturi
• Palito (manicure)
• Espátula
PROCURAR PENETRAR BEM
E COLHER SEMPRE NA REGIÃO
LIMITE ENTRE A PARTE SAUDÁVEL
E A AFETADA PELO FUNGO!
Amostras clínicas / Unhas 
Onicomicose subungueal lateral
COMO CARACTERIZAR UM BOM 
MATERIAL?
OBSERVAÇÃO MACROSCÓPICA E MICROSCÓPICA
Exame micológico direto
- ESCAMAS DE PELE, PÊLOS, CABELOS E UNHAS
Hidróxido de Potássio 10-40%
Microscopia do material 
Leveduras Hifas
• Útil no diagnóstico da infecção fúngica
• Resultados falso negativos e falso positivos podem
ocorrer
* Exame direto negativo NÃO exclui infecção fúngica
Exame micológico direto
MICROSCOPIA CULTURA
Menos sensível
Amostras clínicas / Amostra subcutânea
BIÓPSIA 
BIÓPSIA
• Hematoxilina e eosina (H & E)
• Ácido periódico de Schiff (PAS)
• Gomori-Grocott (prata)
Utilizados em citologia 
ou histopatologia
Colorações empregadas em caso de biópsia
*Exames citológicos e/ou histopatológicos
• Meio mais sensível de diagnosticar uma infecção
fúngica
• Necessária para identificar os agentes etiológicos
• Nenhum meio de cultura isoladamente é suficiente para
isolar todos os fungos clinicamente importantes
• É usualmente aceito que devam ser utilizados pelo
menos dois tipos de meios – SELETIVO e NÃO-
SELETIVO
Isolamento do fungo em cultura 
• Os fungos crescem em muitos meios utilizados para bactérias (-
agar sangue – hemoculturas), entretanto, o crescimento pode ser
lento
• Um meio mais enriquecido é recomendado
Ágar com infusão de cérebro e coração (BHI)
Isolamento do fungo em cultura 
1. Ágar Sabouraud dextrose
2. Ágar Sabouraud dextrose suplementado com antibióticos
(Penicilina e Estreptomicina)
3. Ágar Micobiotic e/ou Mycosel (Cloranfenicol e Ciclohexidima)
Isolamento do fungo em cultura 
• Fungos específicos podem necessitar de meios
especializados
Isolamento do fungo em cultura 
Pitiríase versicolor (Malassezia sp)
Infecção superficial da pele
Meio contendo azeite de oliva ou outra fonte 
de ácidos graxos de cadeia longa para 
isolamento
• Inoculação (implantação do material clínico no meio de 
cultura)
• Culturas fúngicas incubadas em aerobiose
• Temperatura adequada (25 – 30ºC)
*Hemocultura 35 - 37ºC 
• Período 15 dias
• Vedar as placas com fitas gás permeável (evita
desidratação)
Isolamento do fungo em cultura 
*FUNGO DIMÓRFICO
A detecção de fungemia é uma medida importante
no diagnóstico da infecção fúngica invasiva. Infelizmente
hemoculturas têm muitas vezes resultados negativos
apesar da presença de doença disseminada,
especialmente quando o organismo infeccioso é um fungo
filamentoso.
Fungemia – Micose sistêmica 
Amostras de sangue - semeadas em 
frascos contendo caldos nutrientes 
adequados para assegurar o isolamento 
máximo de microrganismos importantes
Hemocultura 
• Bacteremia e fungemia – referidas como sepse
• Sinais clínicos: febre, calafrios e hipotensão
- Resposta à liberação de endotoxinas ou exotoxinas pelos
microrganismos
- Ocorrem pelo menos 1 hora após a entrada do
microrganismo no sangue
OBS: pouco ou nenhum microrganismo pode estar presente quando o
paciente apresenta-se febril. Por esta razão, é recomendado que 2 a 3
amostras de sangue sejam coletadas ao acaso durante um período de 24
horas.
Hemocultura
Frascos de caldo recebidos no laboratório incubados
a 37ºC e examinados em intervalos regulares para a
evidência do crescimento microbiano
Estufa automatizada
Hemocultura
1. Crescimento detectado
Instrumento automatizado para cultura de sangue
1. Crescimento detectado
2. Lâmina (coloração de Gram)
Instrumento automatizado para cultura de sangue
1. Crescimento detectado
2. Lâmina (coloração de Gram)
3. Frascos são subcultivados (incubar 5 – 7 dias, exceção:
microrganismos fastidiosos). Microrganismos
posteriormente isolados
*HEMOCULTURA – Técnica de esgotamento em placa
*AMOSTRAS CLÍNICAS DE MICOSES SUPERFICIAIS,
CUTÂNEAS E SUBCUTÂNEAS – Implantar a amostra em
ágar seletivo
Instrumento automatizado para cultura de sangue
Crescimento em ágar Sabouraud
Fungo leveduriforme
-Pastosas
- cremosas
Fungo filamentoso
-Algodonosas
-Aveludadas
-pulverulentas
*Características morfológicas observadas: textura, cor, borda, relevo
Microscopia da colônia proveniente do ágar 
Sabouraud
Fungo leveduriforme -Células unicelulares, ovais
-Presença ou não de
blastoconídeos
Microscopia da colônia proveniente do ágar 
Sabouraud
Fungo filamentoso - Hifas (septadas ou cenotícitas)
- Micélio
- Ramificações
A identificação do gênero e da espécie requer estudo microscópico
mais detalhado para delinear as estruturas características.
Identificação bioquímica
Ágar cromogênico
Microcultivo em lâmina
Ágar batata
Microcultivo em lâmina
Ágar fubá
Leveduriformes
3 inóculos 
horizontais