Coloração de Gram e Meios de Cultura em Microbiologia

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Microbiologia
Coloração de Gram
O método mais utilizado para diferenciar as bactérias é a coloração de gram, sendo uma técnica barata, rápida.
O método consiste em usar cristal violeta, lugol, álcool-acetona e fucscina.
O método passa a passo consiste em:
Fazer o esfregaço com a amostra desejada em uma lâmina nova e esperar secar
Apos seca, pingar sobre a lâmina cristal-violeta(corante) até cobrir todo o local aonde foi feito o esfregaço, e deixar agir por 1minuto.
Passado o 1minuto, retirar o excesso de cristal-violeta e pingar sobre a lâmina o lugol(mordente) e deixar agir por 1minuto.
Retirar o excesso de lugol da lâmina e pingar a solução descorante álcool-acetona e deixar agir por 3-5segundos e depois colocar a lâmina sobre a água corrente para retirar a solução descorante.
Após a retirada do álcool-acetona(solução descorante) pingar na lâmina a fucsina e deixar agir por 30segundos e após isso colocar na água corrente para retirar o excesso.
Espera a lâmina secar e utilize o microscópio para realizar a leitura da lâmina.
As bactérias gram positivas retem o cristal-violeta devido a grande camada de peptidoglicano, causando que sua coloração final seja roxa. As bactérias gram negativas como possuem uma camada mais fina de peptidoglicano elas não absorvem tanto cristal-violeta, e no final do processo a coloração das estruturas são rosadas ou avermelhadas.
A seguir na tabela iremos ver exemplos das principais bactérias tanto gram positivas como gram negativas:
Bacilos Gram Negativos:
	BACTÉRIA
	COMENSAL
	PATOGÊNESE
	E.coli
	Trato gastro intestinal
	Gastroenterite, ITU, meningites e sepses
	Klebsiella pneumoniae
	Pulmões
	Inflamação dos pulmões, infecção urinaria, febre
	Proteus mirabilis
	Trato urinário
	Infecção de bexiga ou cistite, infecção renal ou pielonefrite
	Salmonella
	 -
	Septicemia, gastroenterite, febre entérica e colonização assintomática
	Shigella
	 -
	Dores abdominais, diarreia, febre e fezes sanguinolentas
	Pseudomonas aeruginosa
	 -
	Infecções do trato respiratório, infecções cutâneas e de tecido mole, infecção de ouvido e infecções oculares.
Cocos gram positivos:
	BACTÉRIA
	COMENSAL
	PATOGÊNESE
	Staphylococcus saprophyticus
	Microbiota normal da pele, região periuretral e mucosas das vias urinárias e genitais.
	Cistite e pielonefrite
	Staphylococcus epidermidis
	Pele humana e superfícies mucosas
	Infecção do trato urinário, infecção de cateter e manuseio, infecção de feridas
	Staphylococcus aureus
	Orofaringe, trato gastrointestinal, urogenital
	SSSS, Síndrome do choque tóxico, foliculite, endocardite, pneumonia e empiema, artrite séptica
	Streptococcus grupo viridans
	Boca
	Septicemia em pacientes neutropênicos, endocardite subaguda, infecções odontogênicas e cárie dentaria
	Streptococcus pneumoniae
	Orofaringe e nasofaringe
	Pneumonia, sinusite e otite média, meningite e bacteremia
	Streptococcus agalactiae
	Trato gastrointestinal
	Sepse, meningite e pneumonia
	Streptococcus pyogenes
	Orofaringe
	Faringite e piodermia
	Enterococcus
	Intestino grosso
	Cistite não complicada ou cistite associada a pielonefrite, infecção no trato urinário, endocardite
Coloração de Ziehl-Neelsen
As bactérias que não conseguem ser classificadas pela coloração de gram, são as micobactérias ou outros organismos acidorresistentes., pois elas possuem um revestimento externo lipídico e são diferenciadas pela coloração de Ziehl-Neelsen.
O método consiste em:
Após fazer o esfregaço em lâmina nova, esperar secar completamente.
Pingar sobre toda a lâmina a solução de fucsina de Ziehl-Neelsen e deixar agir por 20minutos.
Colocar a lâmina embaixo da água corrente e tirar todo o excesso do corante fucsina.
 Pingar a solução descorante de álcool-acido até que saia grande parte do corante e a esfregaço fique com uma coloração rosada.
Lavar novamente a lâmina na água corrente e pingar sobre o esfregaço o azul de metileno e deixar agir por 1 minuto.
Lavar e deixar secar.
Após estar completamente seca, usar o microscópio para a leitura da lâmina.
Exemplos de micobactérias são: M.leprae, M. tuberculosis, M.bovis e M. avium.
Meios de Cultura
Os meio de cultura são utilizados para o crescimento de bactérias em codições de laboratório. Tendo meios seletivos, meios enriquecidos não seletivos, meios diferenciais e meios especializados.
Meios Enriquecidos não Seletivos:
Ágar-sangue: serve para crescimento de bactérias e fungos. Usado para crescimento e identificação de patógenos exigente.
Ágar-chocolate: é um meio ágar-sangue modificado, esse meio permite o crescimento da maioria das bactérias, incluindo algumas que não são capazes de crescer em ágar-sangue.
Ágar-Mueller-Hinton: recomendado para testes de rotinas de suscetibilidade de bactérias aos antibioticos. (antibiograma)
Ágar Cled: utilizado para fazer uroculturas.
CALDO BHI (BRAIN HEART INFUSION): recomendado para a maioria das amostras clincias.
Meios Seletivos e Diferenciais
Ágar-MacConkey: agar seletivo para bactérias gram negativas, e exclusivo por causa da diferenciação que promove entre os organismos fermentadores de não fermentadores.
Ágar-Manitol: meio seletivo utilizado para crescimento de Staphylococcus.
Meio de Lowenstein-Jensen (LJ): meio utilizado para o isolamento de micobactérias.
Agar SS: utilizado para crescimento de bacilos entéricos patogênicos.
Ágar Todd- Hewitt: utilizado para confirmação de Streptococcus agalactiae
Clado GBC: meio de cultura para isolamento de estreptococos do grupo B em amostras genitais
Rugai: meio de cultura diferencial utilizado na identificação presuntiva de enterobactérias oxidase negativas
Tabela utilizada para realiza a leitura do meio IAL/RUGAI
Mini kit: utilizado na identificação de enterobactérias. Este kit é especialmente indicado para a identificação de bacilos Gram negativos atípicos, que constituem em grande parte a microbiota bacteriana isolada de pacientes hospitalizados
Quadro utilizado na interpretação do kit.
	
	COR/MEIO
	POSITIVO
	NEGATIVO
	EPM
	VERDE
	LDT: TRIPTOFANO: verde garrada(ápice)
GLICOSE: amarelo(base)
H2S: enegracimento: base
CO2: bolhas de ar
	
	LISINA
	VIOLETA
	Qualquer cor diferente de amarelo
	Amarelo
	M.I.O
	VIOLETA
	ORNITINA: qualquer cor diferente de amarelo
MOTILIDADE: turvação do meio (crescimento na picada)
REATIVO DE KOVACS: vermelho
	Amarelo
	CITRATO
	VERDE
	Azul/Cresimento
	Cor Original
	RHAMNOSE
	VERDE
	Amarelo
	Cor Original
Antibiograma
O antibiograma é um teste realizado aonde minidiscos que estão impregnados com os antimicrobianos são colocados na superfície do meio aonde cultivaremos a bactéria. Após colocarmos os discos, levamos o meio para a estufa e deixamos de 18 a 24horas, depois do tempo necessário, iremos ler os halos e identificar se a bactéria é resiste ou sensível ao antibiótico.