Métodos Cromatográficos - Resumo

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Farmacognosia 03 
Métodos Cromatográficos 
1. Conceito 
É um método fisico-químico de separação de componentes de uma mistura, realizada através 
da distribuição desses componentes entre duas fases, que estão em contato íntimo → serve 
para separar, identificar e quantificar. 
2. Fase Normal e Fase Reversa 
Fase Normal: separa os compostos com base na sua polaridade. Utiliza uma fase 
estacionária polar e uma fase móvel apolar → interessante para compostos polares → quanto 
maior a polaridade do composto maior é o tempo de retenção → depende também da 
estereosemeria. Caiu em desuso devido a falta de reprodutibilidade. 
Fase Reversa: tem uma fase estacionária apolar e uma fase móvel de polaridade moderada. 
O tempo de retenção é maior para as moléculas apolares e as polares eluem mais 
rapidamente → mecanismo se dá por um adsorvente apolar interagindo com um composto 
relativamente apolar e uma fase estacionária polar. 
3. Sílica 
Sílica Gel: grupos Si-Oh, altamente polar, fase estacionária na normal. 
Sílica de Fase Reversa: possui longas cardeias de carbono ligadas a sílica que conferem o 
caráter apolar, fase estacionaria na reversa. 
 
4. Classificações 
Quanto ao Tipo 
Em coluna: baseia-se na capacidade de adsorção e solubilidade. Preenche-se a coluna com 
um adsorvente adequado que irá permitir o fluxo do solvente. A mistura é então colocada na 
coluna com um eluente menos polar → adiciona-se uma sequência contínua de eluentes que 
aumentam a polaridade como se fosse uma escada e as partes mais polares da mistura irão 
correr adiante em velocidades distintas alcançando cada “degrau da escada” que for possível 
de acordo com sua polaridade (se não for polar o suficiente não chega nos últimos degraus). 
Planar: existe em 2 tipos: 
➢ Papel: líquido – líquido; um deles se fixa a um suporte sólido → recebe esse nome 
pois a separação se dar por um papel filtro, sendo essa a fase estacionária. 
➢ Camada Delgada: líquido – sólido; a fase líquida ascende por uma camada fina de 
adsorvente preso a um suporte dentro de um recipiente fechado → o solvente 
arrasta mais os compostos que interagiram menos com a fase estacionária, isso 
causa separação. 
Quanto a fase móvel empregada 
1. Cromatografia Gasosa: fase gasosa sobre um solvente. Ocorre em um tubo estreito, onde 
os componentes da mistura irão passar por uma corrente de gás, a fase estacionária é 
representada pelo tubo → a separação se dá pela estrutura química, temperatura e fase 
estacionária; 
2. Cromatografia Líquida: fase estacionaria são partículas sólidas organizadas em uma 
coluna, atravessada por uma fase móvel liquida. 
➢ Líquida Clássica: a coluna é preenchida uma só vez pois parte da amostra se 
adsorve de forma irreversível 
➢ Líquida de Alta Eficiência: utiliza bombas de alta pressão para a eluição da fase 
móvel → migra em uma velocidade razoável → muitas amostras em pouco tempo 
→ equipamentos específicos. 
3. Cromatografia Supercrítica: fase móvel é o vapor pressurizado acima da sua temperatura 
crítica, geralmente o eluente mais utilizado é o CO2. 
Quanto a fase estacionária empregada 
➢ Líquida: o líquido está adsorvido em um suporte ou imobilizado sobre ele. 
➢ Sólida: quando a fase fixa é um sólido. 
Quanto ao mecanismo de separação 
1) Adsorção: a amostra será retida na fase estacionária sólida se tiver afinidade com a 
mesma, caso tenha maior afinidade com a fase móvel irá eluir. 
2) Partição: Se a amostra tiver mais afinidade com a fase estacionária líquida ela irá 
entrar para dentro desse líquido, caso tenha maior afinidade pela móvel, será 
absorvida para a mesma → processo interfacial 
3) Troca Iônica: baseia-se nas interações entre cargas e tem 2 fases adsorção e 
eluição. A fase estacionária tem uma carga positiva e atrai as moléculas negativas e 
as positivas eluem na fase móvel. 
4) Exclusão por tamanho: solutos maiores são eluídos primeiro que os menores que 
ficam retidos no gel. 
5) Bioafinidade: isolamento seletivo de macromoléculas biológicas de acordo com suas 
características biológicas.