Flavonoides parte 2

Prévia do material em texto

15/10/2019 
1 
Flavonoides 
Prof. Maria Elvira Poleti Martucci 
Flavonoides 
O
O
O
O
O
O
OH
1 2 3
Flavonol Flavanona Flavona 
O
O
OH
4
OH
O
5
O
O
6
Chalcona Diidroflavonol Isoflavonoide 
Biossíntese 
 Biossíntese mista 
Via do acetato Via do chiquimato 
Biossíntese 
Ácido p-hidróxicumárico 
Ácido Chiquímico 
E1 
Enolização 
E1 
E1: Chalcona sintase 
Chalcona 
Biossíntese 
E4 
E4: Chalcona isomerase 
Chalcona 
Flavanona 
Flavonoides 
O
O
O
O
O
O
OH
1 2 3
Flavonol Flavanona Flavona 
O
O
OH
4
OH
O
5
O
O
6
Chalcona Diidroflavonol Isoflavonoide 
Antocianina 
15/10/2019 
2 
Propriedades Físico-Químicas 
Coloração: 
 Amarelo; azul; roxo 
 Solubilidade: 
 
 
 
 
 
 
• Solventes orgânicos 
apolares 
• Soluções alcalinas Agliconas 
• Água 
• Álcool 
• Soluções hidroalcoólicas Heterosídeos 
Propriedades Físico-Químicas 
O-heterosídeos 
 
 Hidrólise a quente 
 
 Hidrólise ácida e alcalina 
 
 Hidrólise enzimática 
Extração 
Agliconas: solventes orgânicos apolares 
Heterosídeos: soluções aquosas ou hidroalcoólicas 
 
Gradiente crescente de polaridade 
 
 
 
 
 
 
hexano Apolar 
• diclorometano 
• clorofórmio 
• acetato de etila 
Média 
polaridade 
• água 
• solução 
hidroalcoólica 
• metanol 
Polar 
Extração 
Droga vegetal 
Extrato hexânico 
Hexano 
Torta 
Solvente org de média polaridade 
Fase orgânica Fase aquosa 
n-butanol, acetona, MeOH, água 
Agliconas pouco polares 
Agliconas polares e heterosídeos 
Droga vegetal 
Extrato 
Etanol, Metanol 
Agliconas 
Heterosídeos 
Heterosídeos 
Solvente orgânico 
Agliconas livres 
Água, hidroalc 
Extrato aquoso 
n-butanol 
Extração Caracterização 
Ensaios histoquímicos 
 In situ 
 
Ensaios colorimétricos 
 
 
Ensaios cromatográficos e espectroscópicos 
15/10/2019 
3 
Ensaios Colorimétricos 
Análise Preliminar 
 
Diferencia as classes de flavonoides 
 
Coloração variável 
 
Doseamento 
 
Ensaios Colorimétricos 
Reação de Shinoda ou Reação da Cianidina 
 Reação de hidrogenação 
 Adição de Mg à solução ácida (HCl) 
 Derivados flavônicos: amarelo vermelho 
 
 
 
 
Reação de com Cloreto de Alumínio 
 Complexo fluorescente 
 
 
 
 
 
Ensaios Cromatográficos 
Cromatografia em camada delgada (CCD) 
 
 Fase estacionária: gel de sílica, celulose e poliamida 
 Fase móvel: 
 Agliconas: sistema BAW (n-butanol:ácido acético:água) 
 Heterosídeos: acetato de etila:ácido fórmico:água 
 
 
 
Ensaios Cromatográficos 
Cromatografia em camada delgada (CCD) 
 
Detecção direta sob luz UV (254 nm e 365 nm) 
 
Exposição a reagentes cromogênicos: 
FeCl3 a 1% alcoólico: vários fenólicos 
Vanilina sulfúrica: vários fenólicos 
Reagente Natural A (difenilboriloxietilamina a 1% em 
metanol): específico para flavonoides 
Ensaios Cromatográficos 
CCD bidimensional 
 
1º desenvolvimento 2º desenvolvimento 
90º 
Eluição com outro sistema solvente 
Separação de misturas complexas 
Ensaios Cromatográficos 
CCD preparativa 
Isolamento – as bandas são raspadas e extraídas com 
solvente 
 
CCD circular 
 
 Isolamento 
 Vantagem – gradiente de solventes 
 Frações monitoradas por CCD 
 Chromatotron 
 
15/10/2019 
4 
Ensaios Cromatográficos 
Cromatografia em coluna 
 Isolamento 
 Maior quantidade de amostra do que CCD 
Ensaios Cromatográficos 
Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) 
 
 Análise qualitativa e quantitativa- analítico 
 Isolamento - preparativo 
 Acoplada a detectores de UV ou MS 
 Tempo de retenção e espectros no UV e MS 
 
 
 
 
Caracterização 
Ultravioleta 
 
Espectros de absorção característicos para flavonoides 
 Banda II: 240 a 285 nm – anel A 
 Banda I: 300 a 400 nm – anel B 
 
Banda II 
Banda I 
Caracterização 
Ultravioleta 
Classe Banda I Banda II 
Flavona 304-350 nm 240-285 nm 
Flavonol 352-385 nm 240-285 nm 
Flavanona, 
isoflavona e di-
hidroflavonol 
Muito pouco 
intensa 
240-285 nm 
Chalcona 340-390 nm 220-270 nm 
Antocianina 465-550 nm 270-280 nm 
Flavona 
Flavona 
240-285 nm e 304-350 nm 
Flavonol 
240-285 nm e 352-385 nm 
 
Isoflavona 
240-285 nm 
 
Caracterização 
Efeito batocrômico: deslocamento no sentido de 
maior comprimento de onda 
 Aumento do n° de OH 
 
Efeito hipsocrômico: deslocamento para menor 
comprimento de onda 
 Metilação na OH de C-3 ou C-4’ 
 
 
 
Caracterização 
Flavonol 
II- 240-285nm 
I- 352-385 
 
Flavona 
II- 240-285nm 
I- 304-350 
 
15/10/2019 
5 
Caracterização 
Espectrometria de massas (MS) 
 
Sensível 
Análise 
 Infusão direta 
 Acoplado a cromatógrafo (LC-MS) 
 
 
Massa molecular (exata) 
Dados da estrutura molecular 
 
 
 
 
Caracterização 
Espectrometria de massas (MS) 
 
Caracterização 
Ressonância magnética nuclear (RMN) 
 
Menos sensível 
 
Dados complementares: 
 Estereoquímica, conectividade entre 
átomos, configurações atômicas 
 Fundamental para moléculas inéditas 
 
 
Ressonância Magnética Nuclear 
Padrões Característicos de deslocamentos químicos 
Identificação e Caracterização 
Ensaios colorimétricos 
 
Ensaios cromatográficos 
 CCD 
 HPLC 
 
Métodos espectroscópicos 
 UV 
 MS 
 RMN