ROTEIRO HEMOGRAMA

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Maria Lais Devólio de Almeida 
 
 
 
 
 
 
O Hemograma é um exame que visa avaliar as células sanguíneas. Pode ser 
dividido em três partes: Eritrograma, Leucograma e Plaquetograma. 
 
O ERITROGAMA... 
 
ERITOGRAMA 
Referências 
Mulheres Homens 
Hematócrito - HT 36 a 47% 40 a 54% 
Hemoglobina – Hb 12,0 a 15,0 g/dL 13,0 a 18,0 g/dL 
Hemácias – He 4,20 a 5,40 milhões/mm3 4,20 a 6,00 milhões/mm3 
VCM 80 a 98 ftl 
HCM 27 a 32 pg 
CHCM 32 a 36 g/dL 
Análise Morfológica série vermelha: 
 
DETERMINAÇÃO DO HEMATÓCRITO – VOLUME GLOBULAR 
 
• Princípio: 
 
 É o volume de células vermelhas compactadas por centrifugação, sendo expresso 
como porcentagem em relação ao sangue total. Usa-se a técnica do microhematócrito. 
 
• Matérias e Equipamentos: 
 
- Capilar para microhematócrito 
- Bico de bunsen ou massa para vedar 
- Microcentrífuga 
- Régua de leitura de hematócrito (tabela) 
- Papel higiênico 
- Descarte para capilar 
 
 
• Procedimento: 
 
1. O sangue colhido com anticoagulante EDTA é colocado em capilar próprio para 
microhematócrito; 
2. Fechar uma das extremidades do capilar com massa especial ou na chama pelo 
bico de bunsen; 
HEMOGRAMA 
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3. Centrifugar este capilar preenchido e fechado em centrífuga especial para 
microhematócrito a 12.000rpm por 5 minutos; 
4. Realizar a leitura, após a centrifugação, em uma régua apropriada, que contém o 
zero variável e o 100 fixo, realizando assim, a leitura da massa eritrocitária em 
porcentagem de eritrócitos em relação ao sangue total. 
 
 
 
A leitura é realizada através de uma tabela própria e o resultado é em %: 
 
 
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DOSAGEM DA CONCENTRAÇÃO DE HEMOGLOBINA 
 
• Princípio: 
 
Dosagem da concentração da hemoglobina no sangue total, existente dentro dos 
eritrócitos, sendo que o resultado é expresso em g/dL. 
 
• Obs.1: A concentração da hemoglobina pode ser obtida por mais de um método, 
porém iremos adotar o método da cianometahemoglobina que é o mais usado e 
amplamente difundido. 
 
• Obs.2: Para se determinar à concentração da hemoglobina pode-se utilizar 
padrões comerciais ou preparar uma solução de hemoglobina na qual a 
concentração tenha sido determinada por um método rigoroso. A partir deste 
padrão, pode-se fazer diluições seriadas e construir uma curva de calibração ou 
utiliza-lo para a obtenção de um fator de calibração. 
 
• Materiais e Equipamentos: 
 
- Tubos de ensaio 
- Pipeta automática de 20µL 
- Ponteiras 0-100µL 
- Pipeta volumétrica de 5mL 
- Líquido diluidor 
- Espectrofotômetro 
- Papel higiênico 
- Descarte para tubos 
- Descarte para ponteiras 
 
• Procedimento: 
 
Consiste em diluir uma amostra de sangue em solução que contenha cianeto e 
ferrocianeto de potássio (reagente de Drabkin) com pH 9,6 (para precipitar proteínas 
e turvar). 
A hemoglobina, metahemoglobina, carboxihemoglobina, carbohemoglobina e 
outras formas de hemoglobina (com exceção da sulfohemoglobina) são convertidas 
rapidamente em cianometahemoglobina. 
 
1. Adiciona-se 20µL de sangue, colhido com anticoagulante EDTA, em 5 ml da solução 
de Drabkin. 
2. Homogeneizar por inversão e esperar 10 minutos. 
3. Ler a absorbância em espectrofotômetro em 535 nm contra a solução de Drabkin, 
como branco. 
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4. Realizar também a leitura do padrão. 
 
 
• Cálculos: 
 
Determina-se a densidade ótica (DO) do padrão e posteriormente um fator que nos 
fornecerá a concentração de cada amostra quando medidas com mesmo reagente. 
 
Portanto: [ ] P / DO P = F 
 
 Assim: 
 
Fator: concentração do fator / leitura do padrão 
 
Então :[ ] da Hb da amostra = DO amostra x F 
 
Assim: Leitura x fator = Hb g /dl 
 
 
 
CONTAGEM DE ERITRÓCITOS 
 
• Princípio: 
 
O sangue é diluído em um líquido (Hayen) que preserva os glóbulos vermelhos. O 
número de partículas contadas em determinado volume é multiplicado por um fator, 
obtendo-se o número de eritrócitos por mm3 de sangue. 
 
• Matérias e Equipamentos: 
 
- Tubos de ensaio 
- Pipeta automática de 20µL 
- Ponteiras 0-100µ 
- Pipeta volumétrica de 5mL 
- Líquido diluidor 
- Câmara de Neubauer 
- Contador manual de células 
- Microscópio 
- Papel higiênico 
- Descarte para tubos 
- Descarte para ponteiras 
 
• Procedimento: 
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1. Em um tubo colocar 4mL de líquido de Hayem e 20µL de sangue total; 
2. Homogeneizar bem; 
3. Deixar em repouso por 5 minutos; 
4. Homogeneizar novamente e preencher a câmara de Neubauer; 
5. Manter a diluição preenchida em câmara úmida por aproximadamente 1 minuto, 
para que os elementos celulares sedimentem; 
6. Contar os eritrócitos nos cinco quadrantes do retículo central, em objetiva de 40X; 
7. Ao número de eritrócitos contados no retículo multiplicar por 10.000 ou 
acrescentar 4 zeros 
8. O resultado é expresso em número de eritrócitos por mm3 de sangue. Por 
exemplo: 5,4 milhões de hemácias/mm3 de sangue 
 
 
 
Obs: Cuidado para não deixar faltar ou sobrar líquido quando preencher a câmara e nem 
deixar formar bolhas. 
 
• Cálculo: N = 
DV
X
.
 
Onde: 
N= nº de células por mm3 
X= nº de células contados 
V= volume da Câmara de Neubauer 
D= diluição 
 
Volume= Área x Altura 
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Área= nº de quadrados a serem contados X nº quadrantes X área de um quadrante 
Área= 16 x 5 x 1/400 
Área= 1/5 mm2 
Altura= 1/10 mm 
 
Volume= Área x Altura 
Volume = 1/5 mm2 x 1/10 mm 
Volume = 1/50 mm3 
 
N = 
DV
X
.
 
 
N = X N = X x 10.000 
 1 x 1 
 50 200 
 
 
CÁLCULO DOS ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS 
 
A determinação do tamanho e do teor de hemoglobina dos eritrócitos é realizada 
através dos índices hematimétricos: VCM, HCM, E CHCM. Esses parâmetros podem ser 
avaliados qualitativamente pelo esfregaço sanguíneo e quantitativamente calculados a 
partir da contagem de hemácias (He), do doseamento de hemoglobina (Hb) e da 
determinação do hematócrito (Ht). 
 
- Volume Corpuscular Médio- VCM: 
 
Indica o volume médio de cada eritrócito – tamanho do eritrócito. 
 
VCM = Ht x 10 
 He 
 
Unidade: micrometros cúbicos (µ3) = fentrolitros (ftl) 
 
 
- Hemoglobina Corpuscular Média – HCM: 
 
Indica o conteúdo de hemoglobina em média de cada eritrócito. 
 
 
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HCM = Hb x 10 
 He 
Unidade: micromicrogramas (µµg) = picogramas (pg) 
 
 
- Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média – CHCM: 
 
 Indica a concentração em média da hemoglobina dos eritrócitos. 
 
 
CHCM = Hb x 100 
 Ht 
 
Unidade: porcentagem (%) = gramas por decilitros (g/dL) 
 
 
 
O LEUCOGRAMA... 
 
LEUCOGRAMA Referências 
Leucócitos Totais 4.000 a 11.000 mm3 
DIFERENCIAÇÃO Relativo % Absoluto mm3 
Bastonetes 1 a 4 0 a 500 
Segmentados ou Neutrófilos 40 a 66 2.500 a 7.000 
Eosinófilos 1 a 5 100 a 500 
Linfócitos 25 a 49 1.000 a 5.000 
Monócitos 2 a 8 100 a 900 
Basófilos 0 a 1 0 a 100 
Análise Morfológica série branca: 
 
CONTAGEM GLOBAL DE LEUCÓCITOS 
 
• Princípio: 
 
O sangue é diluído em um líquido que lisa quase todos os eritrócitos e preserva as 
células nucleadas. O número de células contadas microscopicamente é multiplicado por 
um fator, obtendo-se o número de leucócitos por milímetro cúbico de sangue. 
 
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• Matérias e Equipamentos: 
 
- tubos de ensaio 
- pipetas automática 400µL e 20µL 
- ponteiras 0-100µL e 100-1000µL 
- líquido diluidor 
- câmara de Neubauer 
- contador manual de células 
- microscópio 
- papel higiênico 
- descarte para tubos 
- descarte para ponteiras 
 
• Procedimento: 
 
9. Em um tubo colocar 380µL de líquido de Turk e 20µL de sangue anticoagulado; 
10. Homogeneizar bem; 
11. Deixar em repouso por 5 minutos;12. Homogeneizar novamente e preencher a câmara de Neubauer; 
13. Manter a diluição preenchida em câmara úmida por aproximadamente 1 minutos, 
para que os elementos celulares sedimentem; 
14. Contar os leucócitos nos quatros quadrantes exteriores, em objetiva de 40X; 
15. E posteriormente calculá-los de acordo com a fórmula. 
 
 
Obs: Cuidado para não deixar faltar ou sobrar líquido quando preencher a câmara e nem 
deixar formar bolhas. 
 
• Cálculo: N = 
DV
X
.
 
Onde: 
 
N= nº de células por mm3 
X= nº de células contados 
V= volume da Câmara de Neubauer 
D= diluição 
 
Volume= Área x Altura 
 
Área= nº de quadrados a serem contados X nº quadrantes X área de um quadrado 
 
Área= 16 x 4 x 1/16 
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Área= 64/16 mm2 
 
Altura= 1/10 mm 
 
Volume= Área x Altura 
Volume = 64/16 mm2 x 1/10 mm 
Volume = 64/160 mm3 
 
N = 
DV
X
.
 
 
N = X N = X x 50 
 64 x 1 
 160 20 
 
 
 
*W= área de contagem de LEUCÓCITOS 
**R= área de contagem de HEMÁCIAS 
 
 
CONFECÇÃO DO ESFREGAÇO SANGUÍNEO 
 
• Materiais: 
 
- Lâminas 
- Lâmina extensora 
- Pipetas automáticas de 5 ou 10 µL 
- Ponteiras 0-100µL 
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- Descarte para ponteiras 
- Descarte para lâminas 
- Papel higiênico 
 
• Procedimento: 
 
Coloca-se uma pequena gota de sangue na linha média da lâmina suporte a 1 ou 2 
centímetros do seu extremo. 
Em cima desta, coloca-se uma lâmina extensora na posição de 45 C. 
Pressionar, levemente a borda da lâmina extensora sobre a lâmina suporte e 
desloque-a para trás, até que a mesma alcance a gota de sangue. O sangue se espalha 
rapidamente na linha de contato entre as duas lâminas. 
Empurra-se a lâmina extensora para a frente com pouca pressão, para que o sangue 
seja distendido em um esfregaço fino. 
Secar, imediatamente após a confecção, ao ar. 
 
 
Técnica de deslizamento: 
 
 
 
 
Obs: As lâminas, onde serão realizados os esfregaços, devem estar criteriosamente 
limpas e sem resíduos do material que foi usado para enxugá-las. 
 
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• Características de um bom esfregaço: 
 
Não apresentar filamentos, espaços em branco, regiões de acúmulo de sangue, isto 
é, esfregaço uniforme. Não deve ser nem grosso, nem fino demais. A característica da 
área útil do esfregaço é as hemácias apenas se tocarem. 
 
 
 
 
Após a confecção do esfregaço prosseguir com a coloração e a contagem diferencial 
dos leucócitos: 
- ATENÇÃO A ÁREA DE CONTAGEM! 
 
 
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RECONHECIMENTO DE CÉLULAS SANGUÍNEAS - DIFERENCIAÇÃO 
 
• Materiais e Equipamentos: 
 
- laminário de células normais 
- óleo de imersão 
- microscópio 
- papel higiênico 
 
 
• Procedimento: 
 
Focar a lâmina na objetiva de 40X e observar a morfologia das células, em seguida 
passar para objetiva de 100X com óleo de imersão observar a as células e fazer a 
diferenciação. 
 
 
 
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• Fórmula leucocitária relativa (%) e absoluta (por mm3): 
 
A fórmula leucocitária relativa consiste em reconhecer microscopicamente e 
contar (na área útil do esfregaço sanguíneo) os diferentes tipos de leucócitos e 
estabelecer sua distribuição percentual (contam-se 100 na objetiva de imersão). 
A distribuição percentual dos leucócitos, isoladamente não tem valor 
interpretativo. Por uma régua de três, relaciona-se o valor percentual (relativo) de um 
determinado elemento leucocitário, com o número global de leucócitos por mm3 de 
sangue, obteremos o valor absoluto deste tipo de leucócito (fórmula leucocitária 
absoluta). 
 
Exemplo: 
 
Contagem global de leucócitos: 5.000 mm3 
Valor relativo de Neutrófilos: 70% (o valor encontrado na diferenciação) 
 
Então: 
5.000 - 100% 
 x - 70% 
 
x= 3.500 mm3 (valor absoluto de neutrófilos 
 
 Hemácias 
Eosinófilos 
 
Neutrófilos 
segmentados 
Basófilos 
 
Monócitos 
 Linfócitos 
 Neutrófilos 
 bastonetes 
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Contagem Global de Plaquetas 
 
• Matérias e Equipamentos: 
 
- tubos de ensaio 
- pipeta automática de 100µL 
- ponteiras 0-100µ 
- pipeta volumétrica de 5mL 
- líquido diluidor 
- câmara de Neubauer 
- contador manual de células 
- microscópio 
- papel higiênico 
- descarte para tubos 
- descarte para ponteiras 
 
• Procedimento: 
 
1. Aspirar 2900 microlitros de Oxalato de amônia em um tubo de ensaio. 
2. Em seguida, aspirar 100 microlitros de sangue total com EDTA e colocar junto à 
solução. 
3. Misturar por agitação, durante cerca de dois minutos. 
4. Deixar em repouso durante 10 minutos. 
5. Homogeneizar e preencher a câmara de contagem, esperando 20 minutos (em 
câmara úmida), a fim de que as plaquetas se depositem. 
6. Fazer a contagem com objetiva 40 vezes. 
7. Contar as plaquetas na área reticulada da câmara, contar 5 retículos e acrescentar 
três zeros (000). 
 
 
• Líquido de Contagem de Plaquetas 
 
Oxalato de amônia 10 g 
Água destilada qsp. 100 ml 
 
 
 
- MÉTODO INDIRETO OU MÉTODO DE FÔNIO (Contagem em lâmina corada): 
 
- Confeccionar e corar o esfregaço 
- Contar mil hemácias (aproximadamente 5 campos – 200 hemácias cada) e, ao mesmo 
tempo, as plaquetas encontradas, anotando seus números 
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- A contagem é feita em vários campos sucessivos seguindo linhas longitudinais em 
relação à lâmina. 
- Realizar também a contagem de hemácias na câmara de Neubauer 
 
Cálculos Plaquetas/µl de Sangue = He/µ x nº de plaquetas por 1000 he 
 1000 
Exemplo: 
Nº de plaquetas contadas em 1000 He = 90 
He/µ = 3.600,000 milhões/mm3 
 
Então: 
 
Plaquetas/µl de Sangue = 3.600,000 x 90 
 1000 
 
Plaquetas/µl de Sangue = 324.000 mm3 
 
 
 
1. Hemácias 
2. Plaquetas 
	HEMOGRAMA