Aula 3 PCR

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Reação em Cadeia da 
Polimerase (PCR)
Polymerase Chain Reaction
Centro Universitário Joaquim Nabuco 
Disciplina: Biologia Molecular
O que é a PCR?
“Fotocopiadora” molecular 
Início...
• 1983 - Kary Mullis
• 1989 - Primeira publicação (Methods in 
Enzymology) 
• 1993 - Nobel de Química 
Fundamentos da PCR
• Polimerização in vitro do DNA 
• Moléculas de DNA (RNA e proteínas) 
1. Enzima 
2. Oligonucleotídeos
3. Íons (MgCl2)
4. dNTPs (A, T, G e C)
5. Diferentes temperaturas
Enzima
• DNA Polimerase
Oligonucleotídeos
Iniciadores =PRIMERS
1 par
Ciclos de Temperatura
1 2 3
Reação cíclica
Eletroforese
• Gel de agarose
• Separação de 
fragmentos de DNA
• DNA (-) (+)
Resultados
Visualização dos produtos em 
géis (eletroforese)
Vamos fazer uma PCR?
• Primers
• Íons
• dNTPs
• Taq DNA polimerase
• Amostra de DNA
Reação
1. Desnaturação
2. Hibridização
3. Extensão
Aplicações da PCR
• Amplificação de fragmentos específicos de 
DNA; 
• Teste de paternidade;
• Clonagem; 
• Medicina forense; 
• Diagnóstico molecular; 
• Detecção de mutações;
• Identificação de espécies; 
• Análises de expressão gênica...
Variações
• PCR quantitativa em tempo real (qPCR);
• Multiplex PCR;
• Transcrição Reversa seguida de PCR (RT-
PCR);
• Touchdown PCR;
• Nested PCR...
Vantagens
• Simples;
• Sensibilidade;
• Especificidade;
• Segura;
• Qualitativa;
• Quantitativa.
Dúvidas?
Estudo dirigido
Email: kamilsalesg@gmail.com
300pb
500pb
Perguntinhas!!!
Uma técnica conhecida como reação em cadeia da 
polimerase (PCR) é capaz de produzir milhões de cópias 
de uma molécula de DNA em apenas algumas horas.
Com qual dos seguintes processos celulares a PCR é mais 
parecida?
a) Tradução
b) Replicação
c) Transcrição
d) Hibridoma
e) Mitose
Perguntinhas!!!
Em relação a técnica de PCR (reação em cadeia da 
polimerase), a primeira etapa do procedimento é:
a) Amplificação.
b) Dissociação.
c) Desnaturação.
d) Anelamento.
e) Ajuste.
Perguntinhas!!!
A PCR (reação em cadeia da polimerase) requer todos os 
componentes seguintes, EXCETO:
a) Iniciadores.
b) DNA ligase.
c) DNA polimerase.
d) Agarose
c) Desoxirribonucleotídeos.
Perguntinhas!!!
A eletroforese em gel é
frequentemente usada para
estudar as relações
evolutivas das espécies. O
diagrama abaixo mostra os
resultados de eletroforese
em gel para quatro animais
diferentes: A, B, C e D.
Qual espécie tem mais DNA
em comum com a espécie A?
Até a próxima!!