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Técnicas de Preparação e Preservação para Anatomia de Vertebrados Prof. Dr. Flávio Alicino Bockmann Prof. Dr. Hertz Figueiredo dos Santos Dr. André Luiz Henríques Esguícero 2019 Posição Anatômica Planos de Secção Eixos Imaginarios Orientações e Posicionamentos Fixação e Preservação • Processo de fixação – Evitar o “apodrecimento” do material • Formalina (formol) a 10% - desnaturação proteica • Solução Tamponada. • Afogamento em formol / injetar a solução Biometria https://www.google.com.br/imgres?imgurl=https%3A%2F%2Fs3.amazonaws.com%2Fclassconnection%2F663%2Fflashcards%2F5656663%2Fpng%2Ffish_lengths-15077211059422DEA0F-thumb400.png&imgrefurl=https%3A%2F%2Fwww.studyblue.com%2Fnotes%2Fnote%2Fn%2Ffish-measurements%2Fdeck%2F15664699&docid=mrPYuqm2P6TVGM&tbnid=mJfsL1TJxSPkUM%3A&vet=10ahUKEwjnt5Tn8prhAhWlI7kGHSS4CH4QMwhEKAUwBQ..i&w=328&h=255&bih=787&biw=1536&q=fish%20measurements&ved=0ahUKEwjnt5Tn8prhAhWlI7kGHSS4CH4QMwhEKAUwBQ&iact=mrc&uact=8 Técnicas de Preparação – Esqueletos Secos RETIRADA DA PELE E ANEXOS DESMEMBRAMENTO IDENTIFICAÇÃO DO EXEMPLAR E PEÇAS LIMPEZA DAS PEÇAS • Maceração: Biológica ou Química • Limpeza Manual com Cozimento (Cozimento das peças identificadas em solução de KOH 10%) • Limpeza por Dermestídeos • Limpeza por larvas de moscas e outros insetos • Limpeza por digestão enzimática BRANQUEAMENTO E CONSERVAÇÃO Técnicas de Preparação – Embalsamento Preenchimento por formol 10% Sistema circulatório Cavidades Massas musculares Imersão em formol Secagem Técnicas de Preparação – Parafinagem Fixação do exemplar em Bouin’s formol-acético-picrico Posicionamento do animal e cobrir o animal em fixador Desidratação – Alcool 95% Tranferencia a xilol 100% Tranferencia a xilol / parafina 50% Transferencia a parafina 100% Lavar em agua gelada e secar Remover excesso de parafina com xilol e pincel Técnicas de Preparação – Taxidermia Preparação da pele de um vertebrado para estudo científico ou exibição Escalpelação – preparação para pele cheia ou pele aberta Fixação e Envenenamento (Sulfato de alumínio + Bórax, em partes iguais) Curtimento - Colocação da pele em solução de acido acético 10% para remoção de colágeno; transferência par solução de 200g sulfato de alumínio/200g nacl/10g borax/litro d’agua. Incisões para pele aberta: Técnicas de Preparação – Diafanização 1. Fixar os espécimes em formol 10% 2. Branquear em UV ou em Peróxido de Hidrogênio a 50% em água destilada mais 0,3g de KOH (em 100 ml de solução) 3. Desidratar em solução crescente de concentração de álcool como: 25% e 50%, e manter em 75% por 12h. 4. Colorir os ossos em solução alcoólica de alizarina (0,05g de Alizarin Red S dissolvida em 100 ml de álcool 75%). 5. Remover o excesso de alizarina com imersão do exemplar em solução de álcool a 75%, deixar por pelo menos uma hora. 6. Colorir as cartilagens com solução álcool-ácida de Alcian Blue (0,05g de Alcian Blue dissolvido em 100ml de solução de 25 partes de ácido acético mais 75 partes de álcool P.A.) 7. Neutralizar o ácido em solução saturada de bórax. Ao mesmo tempo realiza-se a reidratação do espécime, com a transferência de soluções decrescentes de álcool saturadas em bórax, como: 75%, 50% e 25%, e armazenamento por 12 horas em solução aquosa saturada em bórax 8. Remover todas as impurezas pela lavagem em água destilada, com sucessivas transferências. 9. Macerar em solução enzimática a 0,1 %. 10. Transferir para soluções de porcentagem crescente de glicerina em agua destilada, como: 25%, 50% e 75%, e manter em glicerina 100%. Anfíbio (Rana catesbeiana– Anura: Ranidae) Fonte das imagens: De Luliis & Pulerá, 2007 – The Dissection of Vertebrates. Aves (Coturnix coturnix – Galliformes: Phasianidae) Fonte das imagens: De Luliis & Pulerá, 2007 – The Dissection of Vertebrates. Mamífero (Oryctolagus cuniculus – Lagomorpha: Leporidae) Fonte das imagens: Zoeckler, 2016 – Rabbit Visual Dissection Guide; Bentley, 1948 – Practical Anatomy of the Rabbit. Referências Bibliográficas Auricchio, P., & Salomão, M. D. G. (2002). Técnicas de coleta e preparação de vertebrados para fins científicos e didáticos. São Paulo: Instituto Pau Brasil de História Natural, 9-14. Auricchio, P., & Salomão, M. D. G. (2002). Técnicas de coleta e preparação de vertebrados para fins científicos e didáticos. São Paulo: Instituto Pau Brasil de História Natural. Azaripour, A., Lagerweij, T., Scharfbillig, C., Jadczak, A. E., Willershausen, B. & Van Noorden, C. J. F. (2016). A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues withspecial reference to connective tissue. Progress in Histochemistry and Cytochemistry, 51 (1), 9–23. Bemis, W. E., Hilton, E. J., Brown, B., Arrindell, R., Richmond, A. M., Little, C. D. & Nelson, G. J. (2004). Methods for preparing dry, partially articulated skeletons of osteichthyans, with notes on making Ridewood dissections of the cranial skeleton. Copeia, 2004(3), 603-609. Bensley, B. A. (1910). Practical anatomy of the rabbit. The University Press. Datovo, A. & Bockmann, F. A. (2010). Dorsolateral head muscles of the catfish families Nematogenyidae and Trichomycteridae (Siluriformes: Loricarioidei): comparative anatomy and phylogenetic analysis. Neotropical Ichthyology, 8, 193246. De Iuliis, G., & Pulerà, D. (2006). The dissection of vertebrates. Academic Press. Filipski, G. T., & Wilson, M. V. (1984). Sudan Black B as a nerve stain for whole cleared fishes. Copeia, 1984(1), 204-208. Hoffmann, A., Decher, J., Rovero, F., Schaer, J., Voigt, C., & Wibbelt, G. (2010). Field methods and techniques for monitoring mammals. Manual on field recording techniques and protocols for All Taxa Biodiversity Inventories and Monitoring, 8, 482-529. Höfling, E., Oliveira, A. M. S., Rodrigues, M. T., Trajano, E. & Rocha, P. L. B. (1995). Chordata: manual para um curso prático. Edusp, São Paulo. Kardong, K. V. (2011). Vertebrates: comparative anatomy, function, evolution. Boston: McGraw-Hill. Lauder, G. V. (1981). Form and function: structural analysis in evolutionary morphology. Paleobiology, 7, 430-442. Liem, K. F., Bemis, W. E., Walker, W. F., & Grande, L. (2001). Functional anatomy of the vertebrates: an evolutionary perspective. Brooks/Cole – USA. Mu, L. & Sanders, I. (2010). Sihler’s whole mount nerve staining technique: a review. Biotech Histochem, 85, 1-19. Mussa, M. T., Kamal, M. M., Mahmud, M. A. A., Sarker, B. K., Jalil, M. A., & Das, S. K. (2016). Evaluation of a rapid and efficient method for preparation of skeletons of rabbit and goose. Bangladesh Journal of Veterinary Medicine, 13(2), 27-31. Pough, F. H., Janis, C. M., & Heiser, J. B. (1999). Vertebrate life. 9th edition. Upper Saddle River, NJ: Prentice Hall. Simonsen, K. P., Rasmussen, A. R., Mathisen, P., Petersen, H., & Borup, F. (2011). A fast preparation of skeletal materials using enzyme maceration. Journal of Forensic Sciences, 56(2), 480-484. Taylor, W. R. & van Dyke, G. C. (1985). 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Ficha Espécie: _____________________________________________________________________________________________________________________ Medições: _____________________________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________________________ Lista de peças: Ficha Espécie: _____________________________________________________________________________________________________________________ Medições: _____________________________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________________________ Lista de peças: Ficha Espécie: _____________________________________________________________________________________________________________________ Medições: _____________________________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________________________ Lista de peças: Análise anatômica comparativa sucinta entre os grupos com base no material preparado. _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________________________
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