PCR VARIANTES

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PCR 
E 
VARIANTES
PROF. DR CLEYSON VALENÇA REIS
PCR Multiplex
Mais de um segmento genômico é amplificado numa única
reação, cada um com seu par de primers específico.
APLICAÇÕES
❖ Investigação de paternidade
❖ Diagnóstico de doenças
❖ Identificação de transgênicos
DIAGNÓSTICO DE MALÁRIA
P.
 f
a
lc
ip
a
ru
m
P.
 v
iv
a
x
P.
 F
a
lc
ip
a
ru
m
+ 
 
 P
. v
iv
a
x
DIAGNÓSTICO DE TUBERCULOSE
RT-PCR
(Reverse Transcriptase Chain Reaction)
RNA, que é convertido em cDNA (DNA complementar)
Ferramenta útil em estudos de expressão gênica
RT-PCR
(Reverse 
Transcriptase 
Chain 
Reaction)
NESTED PCR
• O princípio da Nested PCR é o mesmo da PCR convencional, o que vai
diferenciar é a origem da amostra contendo o material genético que será
utilizado.
• Na nested PCR, ao invés de se usar uma amostra primária para fazer a PCR,
utiliza-se o produto de uma PCR anterior com um par de primers internos ao par
utilizado na primeira reação, ou seja, é a PCR do produto da PCR.
• Essa variação da PCR é utilizada para aumentar a sensibilidade e especificidade
nos casos em que as amostras utilizadas não são muito boas.
• Na prática, fazemos a primeira reação e, quando ela fica pronta, transferimos
poucos microlitros para um outro tubo e fazemos a segunda reação (nested).
• Com isso, gastamos mais que o dobro do tempo para visualizar o resultado final
no gel após a eletroforese.
PCR EM TEMPO REAL
QUANTIFICAÇÃO
O SYBR* Green I fluoresce quando ligado 
à dupla hélice de DNA
Quando o DNA está desnaturado, o
SYBR* Green I é liberado e a
fluorescência é drasticamente reduzida
Durante a extensão, os primers anelam e 
o produto de PCR é gerado.
O SYBR* Green I liga-se ás novas duplas-
hélices, resultando em um aumento na 
fluorescência detectada
QUANTIFICAÇÃO
Fase de plateau
Fase linear
Fase exponencial
Linha de base
Amostra negativa
Ciclos
Fl
u
o
re
sc
ê
n
ci
a 
n
o
rm
al
iz
ad
a
exato