Exercícios bioquímica experimental

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Universidade de São Paulo 
 
Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto 
 
Departamento de Química 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
5930233 - Bioquímica Experimental 
Trabalho 1 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
João Vitor Perilo Oliveira Elói (nº USP 10732812) 
 
Ribeirão Preto 
2020 
 
 
1. Sobre dosagem de proteína responda: a) Sobre o método de Read e Northcote: Em uma 
curva padrão de 2 a 20g/mL de BSA, obtevese as absorbâncias: 2g=0,12; 6g=0,35; 
10g=0,53; 14g=0,75; 20g=0,99. As amostras 1, 2 e 3 (de volume final 1mL) apresentaram, 
respectivamente, as absorbâncias de 0,33 ( amostra 1); 0,22 ( amostra 2) e 0,41 (amostra 
3). Se você, antes de completar para 1mL de água, pipetou nos tubos das amostras (1, 2 e 
3), respectivamente, 5L (amostra 1), 13,5L (amostra 2) e 7,5L (amostra 3), provenientes dos 
respectivos tubos estoques, qual a concentração de proteína, em mg/mL, nos tubos 
estoques das proteínas? Mostre os cálculos. b) Um estoque de uma proteína com 
coeficiente de extinção molar em 280nm () igual a 21.350 M-1cm-1 foi diluída 4,5 vezes e 
apresentou uma absorbância, em 280nm, de 0,640 usando uma cubeta de 5mm de caminho 
óptico. Sabendo que a massa molecular da proteína é 50000g/mol, calcule a concentração 
em mg/mL do estoque de proteína. 
 
 
 
 
 
2. Um aluno usando uma solução de 30mL de ovalbumina 1% (m/v) realizou 3 experimentos 
distintos e suas anotações estão transcritas abaixo: a) Misturou 10 mL da solução protéica 
com 5 mL de solução saturada de (NH4)2SO4. E após homogeneização e banho de gelo 
observou um precipitado. b) Ao adicionar 0,1mL de NaCl 5M a 10 mL de ovalbumina 
verificou que a solução protéica ficou mais transparente. c) Misturou 10mL restantes da 
solução protéica com 1mL de acetona gelada e ficou imediatamente leitosa. Após 
centrifugação o precipitado foi rapidamente dissolvido com adição de água. Com base 
nessas observações do aluno discuta cada um dos processos empregados, explicando os 
efeitos nas amostras e quais as utilidades desses experimentos para estudos de proteínas
3. O mesmo extrato protéico (2mL) foi dividido em duas amostras para a aplicação em duas 
colunas (1mL para cada) de cromatografia de filtração em gel, denominadas colunas 1 e 2. 
Os cromatogramas obtidos (Abs 280nm) das duas colunas são mostrados abaixo. O extrato 
era constituído de uma mistura de 4 proteínas de massas moleculares: a) 97.000 ; b) 
14.000; c) 45.000 e d) 66.000. Após as cromatografias, amostras dos tubos, referentes aos 
tempos de eluição, foram aplicadas em eletroforese SDS-PAGE. Sobre os resultados, 
responda: a) Aponte, na figura, em que posição nos cromatogramas (tempos em min) estão 
as proteínas a, b, c, d. Aponte na figura dos géis de eletroforese o perfil de posições das 
bandas (proteínas a, b, c, d). As amostras aplicadas nos géis foram dos tubos eluídos nos 
tempos 10, 20, 30, 40, 50, 60 das filtrações das colunas 1 e 2. b) Entre a utilização de um 
método colorimétrico (dosagem com corante coomassie) ou o emprego de coeficiente de 
extinção molar (caso estes tivessem sido dados), qual(is) você considera mais apropriado(s) 
para quantificar as proteínas eluídas nos tubos das duas filtrações em gel? Por quê? 
4. Dois frascos idênticos e sem rótulos foram encontrados em uma estante de aula prática 
de bioquímica. Na bancada havia os seguintes reagentes: ninidrina, acetato de chumbo, 
sulfato de cobre, hidróxido de sódio e ácido clorídrico. Os dois frascos foram identificados 
como A e B, pois poderiam ser albumina 1% (m/v) e ácido glutâmico 0,1M. Escreva uma 
estratégia (com, no mínimo, três experimentos com esses e outros reagentes) e explique os 
resultados previstos para poder sugerir qual é a composição de cada frasco sem rótulo.
5. Qual é a relação entre a solubilidade de uma proteína e o seu pI? Quando uma proteína 
está dissolvida em uma solução cujo pH é igual ao seu pI, a sua conformação é alterada? E 
a sua estrutura primária?
6. Desenhe uma curva de titulação com NaOH (mostrando equivalentes no eixo x) de um 
aminoácido hipotético que se encontra totalmente protonado (apresentando carga líquida 
inicial igual a +2). Escreva (acima do gráfico) as estruturas hipotéticas com as cargas 
líquidas de cada uma das espécies, formadas durante a titulação e correlacione-as com o 
pH e com os equivalentes de base adicionados. Indique, no gráfico as regiões de pH 
tamponantes, a posição do ponto isoelétrico e, ainda, indique qual grupo químico que pode 
ser correlacionado ao radical. Dados: pKa – COOH = 2,0 pKa – NH3 + = 9,0 pKa – radical = 
10,0
7. Esquematize a curva de titulação da Arginina (estrutura abaixo), apresentando também a 
EQUAÇÃO DE DISSOCIAÇÃO COMPLETA DO AMINOÁCIDO. Dados: pK1= 2,17 pK2 = 
9,04 pKR = 12,48
8. Em uma eletroforese em gel de poliacrilamida-SDS, uma proteína de massa molecular 
90.000 Da move-se mais lentamente que outra de massa molecular 40.000 Da. Entretanto, 
em uma filtração em gel de Sephadex, a proteína de 90.000 Da é a que primeiro emerge da 
coluna. Como se explica tal fato?
9. As proteínas, quando tratadas com dodecil sulfato de sódio (SDS) tornam-se poliânions. 
Quando submetidas a uma eletroforese em gel de poliacrilamida em pH 7.0, migram em 
direção ao ânodo (pólo positivo). Comparando-se a distância de migração de uma proteína 
desconhecida com as distâncias de migração de proteínas cujas massas moleculares são 
conhecidas é possível se determinar a massa molecular da proteína desconhecida. 
Sabendo-se que a eletroforese foi efetuada em gel de poliacrilamida a 10% em tampão 
fosfato de sódio 0,2 mol/L pH 7,0 contendo SDS 0,2%, determinar a massa molecular da 
lisozima, soralbumina, pepsina e anidrase carbônica utilizando os valores da tabela. A 
corrida total foi de 85 mm. 
10. Determine a massa molecular em solução da proteína pura aplicada em uma coluna de 
filtração em gel com V0 = 35,1mL e com os seguintes volumes de eluição das proteínas 
padrões da tabela abaixo. Após essa determinação, observe o gel desnaturante de 
poliacrilamida em que esta proteína foi aplicada (figura abaixo) e discuta sobre a estrutura 
da proteína em solução.