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UNIVERSIDADE LUTERANA DO BRASIL Disciplina: Biologia Molecular Básica Exercícios 1. Liste as definições comuns encontradas em dicionário para os termos “replicação”, “transcrição”, “tradução”. Ao lado de cada definição, liste o significado específico de cada um desses termos aplicado a células vivas. Defina também o termo “transcrição reversa”. Faça um esquema incluindo os termos acima no “dogma central da biologia molecular”. 2. O “dogma central” da biologia postula que a informação flui unidirecionalmente no sentido do DNA para o RNA, e do RNA para a proteína. Entretanto, são conhecidas atualmente algumas exceções a esse dogma. Assinale verdadeiro ou falso e, caso a afirmativa seja falsa, descreva o que está incorreto. ( ) Plasmídeos bacterianos produzem proteína diretamente a partir de DNA. ( ) Em alguns vírus, como o que causa poliomielite, o RNA é sintetizado a partir de RNA. ( ) Nos retrovírus, o DNA é sintetizado a partir de RNA pela enzima RNA polimerase. 3. Em seu trabalho com bactérias que causavam pneumonia em camundongos, Griffith descobriu que a) o revestimento proteico das células patogênicas foi capaz de transformar células não patogênicas. b) células patogênicas mortas pelo calor causam pneumonia. c) uma substância a partir de células patogênicas foi transferida para células não patogênicas, tornando-as patogênicas. d) o revestimento de polissacarídeo de bactérias causou pneumonia. e) bacteriófagos injetam DNA em bactérias. 4. O que o envolve o processo de transformação em bactérias? a) a criação de uma cadeia de DNA a partir de uma molécula de RNA b) a criação de uma cadeia de RNA a partir de uma molécula de DNA c) a infecção das células por uma molécula de DNA de fago d) a replicação semiconservativa mostrada pelo DNA e) a assimilação de DNA externo por uma célula 5. A afirmação a seguir é verdadeira ou falsa? Por quê? “O fluxo da informação genética na célula é sempre DNA RNA proteína.” 6. No modelo abaixo, elaborado por Francis Crick, em 1956, relativo ao fluxo da informação genética, é mostrada a possibilidade de o DNA formar diretamente proteínas e de uma molécula de RNA dar origem a outra molécula de DNA. Estas duas hipóteses mostraram ser verdadeiras? Justifique sua resposta. 7. O genoma do feijoeiro (Phaseolus vulgaris) é constituído de 27% da base nitrogenada adenina. Qual a porcentagem das bases T, C e G? Justifique a resposta. 8. A anemia infecciosa das galinhas é causada pelo CAV (Chicken Anemia Virus). Este vírus possui genoma de DNA simples fita, sendo que 33% de seu genoma é constituído da base nitrogenada citosina. Qual a porcentagem das bases A, T e G? Justifique a resposta. 9. O rotavírus possui um genoma de ácido ribonucleico, fita dupla, de aproximadamente 9.000 nucleotídeos sendo que 35% de suas bases nitrogenadas correspondem à adenina. Qual a porcentagem das demais bases nitrogenadas? Justifique a resposta. 10. Diferencie, mostrando três diferenças e três semelhanças, DNA e RNA. 11. Em 1921 Griffith realizou um experimento inoculando cepas de Pneumococcus em camundongos como esquematizado na tabela abaixo: Se cepas patogênicas mortas (tratamento 3) e as cepas não patogênicas vivas (experimento 2) não foram capazes de causar a morte de camundongos, como você explicaria os resultados do tratamento 4? Qual o nome deste fenômeno descrito por Griffith? 12. Na década de 1950 Alfred Hershey e Marta Chase demonstraram que os genes de bacteriófagos eram feitos de DNA. Eles observaram estes resultados: a) marcando o DNA com 32P, pois o DNA possui fosfato em sua composição. b) marcando o DNA com 35S, pois o DNA possui enxofre em sua composição. c) marcando proteínas do capsídeo com 32P, pois proteínas possuem aminoácidos com fosfato em sua composição. d) usando bactérias patogênicas e não patogênicas, marcadas, respectivamente, com 32P e 35S. e) mostrando que a transformação de bactérias não patogênicas em patogênicas era devido ao DNA dos bateriófagos. 13. Identifique no DNA: a) sequência regulatória; b) éxons; c) íntrons; d) fita codificadora; e, e) fita molde. 5’-TCATATAATT...TCTGTGATGCTGATGCTAGCTAGCTGACGGCCGGGATGATTACTACGCTTGGCGCAATTTGGGGGTGACTT-3’ 3'-AGTATATTAA...AGACACTACGACTACGATCGATCTACTGCCGGCCCTACTAATGATGCGAACCGCGTTAAACCCCCACTGAA-5' pré-mRNA 5'- GACGGCCGGGAUGAUUACUACGCUUGGCGCAAUUUGGGGGUGACUU-3' mRNA 5'- GACGGCCGGGAUGAUUACUGGCGCAGGGUGACUUAAAAAAAAAAAA-3' 14. Faça a transcrição e tradução da sequência de DNA abaixo. -10 +1 5´TCATATAATCGGTTCCACGCTAGCATGAGGCCTTCGCATGTTTATCGGGCGAGCTGGTGACA3´ 3´AGTATATTAGCCAAGGTGCGATCGTACTCCGGAAGCGTACAAATAGCCCGCTCGACCACTGT5´ 15. Faça o pré-mRNA, o mRNA e a proteína correspondentes a esta fita molde. Os íntrons estão sublinhados. DNA 3'- TACGGCCAATCATATTATGATGCGAATCTACCGCTTTAAACCACCCTAGTATC-5' Tratamento Injeção em camundongos Observação camundongos 1 Cepas patogênicas vivas Morte 2 Cepas não patogênicas vivas Vida 3 Cepas patogênicas mortas Vida 4 Cepas patogênicas mortas + cepas não patogênicas Morte 16. Qual será o resultado quando fagos infectam bactérias e produzem novos vírus na presença de enxofre radioativo? a) O DNA viral será radioativo. b) As proteínas virais serão radioativas. c) O DNA bacteriano será radioativo. d) As alternativas A e B estão corretas. e) As alternativas A e C estão corretas. 17. Assinale a alternativa que apresenta a sequência capaz de fazer pareamento em solução com a seguinte sequência de DNA: 5ʹ-A-G-C-T-G-3’: a) 5’-T-C-G-A-C-3’ b) 3’-T-C-G-A-C-5’ c) 5’-A-G-C-T-G-3’ d) 3’-A-G-C-T-G-3’ e) Nenhuma das alternativas anteriores. 18. Qual a localização celular dos processos de replicação, transcrição e tradução em uma célula eucariótica? E em uma célula procariótica? 19. Use o código genético para completar o quadro abaixo. Suponha que a leitura é feita da esquerda para a direita e que as colunas representam alinhamentos transcricionais e traducionais. Marque as extremidades 5’ e 3’ do DNA e RNA. T G A Dupla hélice de DNA C C A U mRNA transcrito G C A Anticódon apropriado de tRNA Trp Aminoácido incorporado à proteína Atenção: Para responder às questões de números 20 a 22 considere o texto abaixo. João trabalha em uma confeitaria cujo proprietário é alemão. Todas as manhãs este deixa, sobre a mesa da cozinha, uma receita em português e os ingredientes de um bolo que João deve preparar. A receita original, escrita em alemão, fica guardada no escritório da confeitaria. Somente o patrão de João pode abrir o escritório e escrever, em português, a receita a ser utilizada naquele dia. 20. Para explicar a leigos o funcionamento de uma célula, fazendo uma analogia com o texto, o bolo, seus ingredientes, a receita em português e a receita em alemão corresponderão, respectivamente, a a) aminoácido, nucleotídeos, DNA e RNA. b) nucleotídeo, aminoácidos, RNA e DNA. c) polipeptídeo, aminoácidos, RNA e DNA. d) DNA, RNA, polipeptídeo e aminoácido. e) DNA, aminoácidos, nucleotídeo e polipeptídeo. 21. Continuando a analogia, o escritório, a cozinha e João corresponderão, respectivamente, aos seguintes componentes de uma célula de eucarioto: a) citoplasma, núcleo e cromossomo. b) núcleo, citoplasma e ribossomo. c) citoplasma, núcleo e membrana nuclear. d) núcleo, citoplasma e cromossomo. e) cromossomo, membrana nuclear e citoplasma. 22. Alguns bolos são servidos assim que saem do forno, enquanto outros recebem acabamento especial. Na analogia considerada, o local da confeitaria onde os bolos recebem recheio e cobertura, corresponde a) à mitocôndria. b) ao retículo endoplasmático rugoso. c) ao peroxissomo. d) ao lisossomo. e) ao complexo de Golgi. 23. Como ocorre o início e o término da síntese de proteínas? 24. O que é código genético? 25. Em um mundo extraterrestre, o código genético é baseado em códons de2 nucleotídeos. Quantos aminoácidos podem ser determinados com este código genético? 26. Para um determinado gene eucariótico, quais as diferenças entre fita codificadora, pré-mRNA e mRNA? 27. Qual dos produtos abaixo é transcrito e traduzido? a) tRNA b) 18S rRNA c) 28S rRNA d) intron e) mRNA 28. Qual a importância do fator sigma da RNA polimerase para a transcrição em procariotos? Existe uma proteína análoga a ela em eucariotos? 29. Todas as moléculas de tRNA possuem na extremidade 3’-OH uma sequência C-C-A. Essa sequência é comum em todos os tRNAs por ser: a) sítio de ligação à subunidade maior do ribossomo. b) anti-códon. c) região constituída por bases exóticas. d) importante para a estrutura terciária da molécula. e) local de ligação covalente dos aminoácidos. 30. Transcrição é o processo pelo qual: a) forma-se nova fita de DNA. b) são produzidas moléculas de rRNA, mRNA e tRNA. c) modifica-se o RNA para ser traduzido. d) são produzidas proteínas. e) adicionam-se açúcares às proteínas. 31. Assinale verdadeiro ou falso. Caso a afirmativa seja falsa, destaque o que está incorreto. ( ) Nos ribossomos também ocorre a síntese de ácidos nucleicos. ( ) Cada ribossomo é composto de duas subunidades, sendo as subunidades compostas de proteínas e RNA ribossômico (RNAr). ( ) Nos ribossomos é feita a ligação fosfodiéster entre os aminoácidos que constituirão a proteína, conforme as instruções contidas no RNAm. ( ) Os códons de terminação são reconhecidos por RNAs transportadores (RNAt) o que resulta no término da síntese proteica. 32. Cite os tipos de RNA presentes numa célula eucariótica e suas respectivas funções. 33. Em 1956 foi demonstrado por George Emil Palade e Albert Claude que os ribossomos são partículas ribonucleoprotéicas, isto é, constituídas de proteínas e ácido ribonucléico. Esta observação estava correta? Justifique sua resposta. 34. Liste ou desenhe, sequencialmente, os passos envolvidos na síntese proteica. Inicie com o DNA no núcleo e tente terminar, em dez passos, com um polipeptídeo. 35. Liste ou desenhe, sequencialmente, os passos envolvidos no processo de transcrição em uma célula eucariota. Inicie com o reconhecimento do gene a ser transcrito e termine, em dez passos, com o RNA mensageiro maduro. 36. Se os ribossomos de uma célula forem destruídos, qual o efeito mais provável que ocorrerá nesta célula? a) haverá estimulação da divisão celular b) a célula será incapaz de sintetizar RNA c) ocorrerá desenvolvimento de características hereditárias anormais d) aumentará a absorção de proteínas através da membrana plasmática e) a célula será incapaz de sintetizar proteínas 37. Durante muito tempo verificou-se que os RNAs sintetizados nos núcleos de células humanas eram maiores do que os RNAs mensageiros encontrados nos citoplasmas das células. Hoje está claro que os RNAs mensageiros transcritos são processados, gerando RNAs menores. Durante esse processamento ocorre a) modificação nas extremidades dos RNAs, com a retirada de éxons, gerando moléculas menores formadas pelos íntrons. b) eliminação de sequências internas dos RNAs, os íntrons, gerando moléculas menores formadas pelos éxons. c) modificação das sequências internas, os íntrons, por nucleases codificadas pelos éxons, gerando moléculas menores. d) eliminação de sequências internas dos RNAs, os íntrons, que deverão se ligar aos éxons posteriormente, gerando moléculas menores. e) expressão de moléculas menores, os íntrons, por meio de sequências promotoras conhecidas como éxons. 38. Assinale a alternativa que apresenta a característica que determina mais intimamente a forma de uma proteína possui: a) quantidade de energia disponível na síntese da proteína b) tipo e sequência de aminoácidos na proteína c) tipo e número de moléculas de DNA na célula d) mutações que ocorrem quando o DNA é copiado e) presença de CAP e poli-A no RNA mensageiro 39. Duas proteínas em uma mesma célula realizam funções diferentes. Isto ocorre porque as duas proteínas são compostas de: a) cadeias dobradas da mesma maneira e com a mesma sequência de monossacarídeos b) cadeias dobradas do mesmo modo e com a mesma sequência de aminoácidos c) cadeias dobradas de modo diferente e com uma sequência diferente de monossacarídeos d) cadeias dobradas de modo diferente e com uma sequência diferente de aminoácidos e) cadeias dobradas da modo diferente e com uma sequência diferente de nucleotídeos 40. A hemoglobina, que transporta oxigênio na circulação sanguínea, é formada por duas cópias da subunidade alfa-globina e duas subunidades de beta-globina. Cada uma das quatro cadeias polipeptídicas contém um grupo heme, sítio de ligação do oxigênio. Qual nível de estrutura conformacional das proteínas está relacionado com a união das subunidades que formam a hemoglobina? a) estrutura primária b) estrutura secundária c) estrutura terciária d) estrutura quaternária e) estrutura em dupla hélice 41. Defina os termos: a) gene estrutural b) gene regulador c) promotor d) operador e) cAMP f) proteína repressora 42. Os exemplos mais simples e mais completamente entendidos de regulação gênica ocorrem em bactérias. Entre estes exemplos está a regulação de operon (unidade de transcrição que inclui um conjunto de genes estruturais, um promotor e um operador). Indique na sequência do operon abaixo representado os locais de ligação da RNA polimerase e da proteína repressora. 43. A bactéria Escherichia coli pode utilizar diferentes açúcares como substratos para obtenção de energia. Glicose e lactose estão entre os açúcares que podem ser utilizados por E. coli. Estes glicídios controlam o início da transcrição do operon lac através dos seus efeitos sobre a proteína repressora e a proteína ativadora do catabolismo (CAP). Preencha o quadro abaixo, mostrando como estará o operon lac (ativo/inativo) em cada situação referente à presença ou ausência de glicose e lactose no meio de cultura. Glicose Lactose Operon lac (ativo/inativo) Presente Presente Presente Ausente Ausente Ausente Ausente Presente 44. Os exemplos mais simples e mais completamente entendidos de regulação gênica ocorrem em bactérias. Entre estes exemplos estão a regulação do operon Lac e do operon trp da bactéria Escherichia coli. Podemos afirmar que operon corresponde a: a) uma proteína repressora que inibe a utilização da lactose como fonte de energia b) um conjunto de genes que é transcrito em um único mRNA. c) um conjunto de éxons e introns, constituindo um gene. d) proteínas repressoras ou ativadoras que atuam nos promotores dos genes. e) uma sequência de nucleotídeos do promotor na qual se ligam proteínas de regulação gênica. 45. O operon trp permite que a bactéria E. coli produza as proteínas necessárias para sintetizar o seu próprio suprimento de: a) ATP b) triptofano c) lactose d) repressor e) AMP cíclico 46. Compare os operons trp e lac mostrando duas diferenças e duas semelhanças. 47. Você está estudando a síntese do aminoácido triptofano em bactérias. As enzimas TrpA, TrpB, TrpC, TrpD e TrpE são essenciais para a síntese desse aminoácido. Bactérias do tipo selvagem não sintetizam nenhuma dessas proteínas na presença do triptofano; entretanto, na ausência do triptofano todas as enzimas são sintetizadas em grandes quantidades. Por intermédio de uma análise mutacional, você identifica duas regiões do DNA que são importantes na regulação da síntese do triptofano. A primeira dessas duas regiões, trpR, é um gene que codifica a proteína de ligação ao DNA. A segunda região, chamada de trpO, é uma sequência de DNA à qual a proteína codificada pelo gene trpR se liga. Análises de três cepas de bactérias com genótipos diferentes nos locos trpR e trpO fornecem os seguintes resultados: Cepa* Meio de crescimento níveis de mRNAs de trpA, trpB, trpC, trpD e trpE trpR+ trpO+ com triptofano0,1% sem triptofano 100% trpR– trpO+ com triptofano 100% sem triptofano 100% trpR+ trpO– com triptofano 100% sem triptofano 100% * gene + → gene normal (selvagem); gene – → gene mutado com função alterada a) Explique os resultados observados com relação aos níveis dos mRNAs de trpA, trpB, trpC, trpD e trpE na cepa trpR– trpO+. b) O controle da síntese do triptofano é um exemplo de regulação positiva ou negativa? Justifique. 48. Os esquemas abaixo indicam uma mistura de compostos presentes em diferentes tubos de ensaio e os produtos obtidos para cada reação. Indique qual a enzima que catalisa cada uma das reações. Reação 1: 3´-AATCGGCATCGA–5´+ Nucleotídeos + ENZIMA 5’-TTAGCCGTAGCT–3’ 3’-AAUCGGCAUCGA–5’ Reação 2: 3´-AATCGGCATCGA–5´+ 5´-TTAGC-3´(Primer) + Nucleotídeos + ENZIMA 5’-TTAGCCGTAGCT–3’ 3’-AATCGGCATCGA–5’ Reação 3: 3´-AAUCGGCAUCGA–5´+ 5´-TTAGC-3´(Primer) + Nucleotídeos + ENZIMA 5’-TTAGCCGTAGCT–3’ 3’-AAUCGGCAUCGA–5’ Reação 4: 5’-TTAGGCCTAGCT–3’ 5’-TTAGG-3’ 5’-CCTAGCT–3’ 3’-AATCCGGATCGA–5’ + ENZIMA 3’-AATCC–5’ 3’-GGATCGA–5’ 49. Quantas moléculas de DNA existem no núcleo de uma célula do corpo humano? 50. Ordene os seguintes termos a partir do mais geral, que envolve todos os elementos, para o mais simples: códons cromossomos éxons genes genoma nucleotídeos 51. Com relação ao ciclo celular de uma célula somática humana, é correto afirmar que existem a) 23 moléculas de DNA em G1. b) 23 moléculas de DNA em S. c) 92 moléculas de DNA em G2. d) 46 moléculas de DNA na prófase de M. e) 23 moléculas de DNA na telófase de M. 52. Qual a relação entre divisão celular e duplicação do DNA? 53. Compare a duplicação do DNA com a transcrição, mostrando três semelhanças e três diferenças. 54. Compare a DNA polimerase e a RNA polimerase, mostrando três semelhanças e três diferenças. 55. Cite as enzimas e proteínas necessárias para a duplicação de DNA in vivo. Descreva a função de cada uma delas. 56. Responda se a afirmação é verdadeira ou falsa. Caso a afirmativa seja falsa, indique e justifique o que está incorreto. a. ( ) O mecanismo básico de reparo de DNA envolve três etapas: excisão, ressíntese e ligação. b. ( ) A depurinação e a desaminação são as reações químicas mais raras que provocam danos ao DNA nas células. c. ( ) O sistema celular de reparo do DNA é capaz de remover erros da replicação (malpareamento de bases), mas é incapaz de corrigir quebras na dupla fita. 57. As figuras abaixo são uma representação esquemática de uma dupla fita de DNA, mostrando uma origem de replicação (ORI). Na origem de replicação é onde será iniciada a replicação bidirecional da molécula de DNA. Mostre como ocorre a síntese de forma contínua e descontínua. Mostre o sentido de cada uma destas fitas. 5’ 3’ 3’ 5’ ORI 58. Por que é mais importante que o DNA seja replicado mais fielmente do que transcrito com precisão? 59. Meselson e Stahl realizaram experimentos para testar hipóteses sobre a replicação do DNA. Eles cultivaram bactérias em meio de cultura que continha ‘nitrogênio pesado’ (15N) por diversas gerações e depois as transferiram para um meio de cultura que continha ‘nitrogênio leve’ (14N). Esquematize na figura abaixo quais seriam os padrões esperados no experimento de Meselson e Stahl se a duplicação do DNA fosse conservativa. G1, G2 e G3 representam respectivamente a primeira, segunda e terceira gerações após a transferência das bactérias para o meio contendo 14N. Os primeiros tubos representam os padrões de referência obtidos de bactérias cultivadas em meios contendo 15N e 14N. 60. O gráfico representa as mudanças (quantitativas) no conteúdo do DNA nuclear durante eventos envolvendo divisão celular e fecundação em camundongos. Os intervalos C-D, L-M e P-Q correspondem, respectivamente, a fases em que ocorrem a a) replicação, meiose II e mitose. b) meiose I, meiose II e replicação. c) mitose, meiose I e fecundação. d) mitose, meiose I e meiose II. e) mitose, meiose II e fecundação. Referências 61. Analise as seguintes informações: I. A renovação dos tecidos requer um controle complexo para coordenar o comportamento de células individuais e as necessidades do organismo como um todo. As células devem dividir-se e conter a divisão, sobreviver e morrer, manter uma especialização característica apropriada e ocupar o lugar apropriado, sempre de acordo com as necessidades do organismo. Sabe-se que essas funções são geneticamente controladas. II. Em 2001 a indústria Shell do Brasil S.A. foi responsabilizada pela contaminação das áreas em torno de sua fábrica de agrotóxicos em Paulínia, SP, com resíduos de Endrin, Diedrin e Aldrin. Um aumento significativo no número de casos de câncer na região tem sido associado à exposição dos moradores a essas substâncias. a) Que relações podem ser estabelecidas entre as informações I e II? Inclua na sua resposta os conceitos de “mutação gênica”, “agentes mutagênicos”, “descontrole dos mecanismos de divisão celular” e “câncer”. b) Dê exemplos de um agente de natureza física e de um agente de natureza biológica que podem aumentar a taxa de mutações gênicas, aumentando assim a probabilidade de desenvolvimento de câncer. 62. Diferencie e exemplifique os seguintes tipos de mutação: (a) mutação silenciosa (b) mutação com troca de sentido (c) mutação sem sentido (d) mutação com mudança na fase de leitura 63. O que são mutações? Cite os principais mecanismos causadores de mutações. 64. Abaixo estão mostradas a sequência de DNA de um pequeno gene e as sequências do pré-mRNA, do mRNA selvagem e de 5 mRNAs mutantes. Faça a tradução destas sequências e indique qual o tipo de mutação mais provável que ocorreu no DNA para produzir cada um dos mutantes (mutação com sentido ou silenciosa; mutação com troca de sentido; mutação sem sentido; mudança na fase de leitura ou na matriz de leitura). 5’- TTCATATAATGGGGCAAGCCGGGATGATTACTACGCTTGGCGCAATTTGGGGGTGAGGG -3’ 3'- AAGTATATTACCCCGTTCGGCCCTACTAATGATGCGAACCGCGTTAAACCCCCACTCCC -5' pré-mRNA 5'- AGCCGGGAUGAUUACUACGCUUGGCGCAAUUUGGGGGUGAGGG-3' mRNA 5'- AUGAUUACUGGCGCAGGGUGAGGG-3' mRNA 1 5'- AUGAUUACUGGCGCAGGAUGAGGG-3' mRNA 2 5'- AUGAUUACUAGCGCAGGGUGAGGG-3' mRNA 3 5'- AUGAUGACUGGCGCAGGGUGAGGG-3' mRNA 4 5'- AUGAUUACUGGCGCCAGGGUGAGGG-3' mRNA 5 5'- AUGAUUACGGCGCAGGGUGAGGG-3' 65. O que são dímeros de pirimidina? Compare o mecanismo de reparo de dímeros de pirimidina em procariotos e eucariotos. 66. Informe quantos telômeros ocorrem em (a) uma célula bacteriana, (b) um espermatozóide da espécie humana, (c) uma humana célula somática humana com 2n=46. Justifique suas respostas. 67. Elabore uma pergunta cuja resposta poderia ser o parágrafo abaixo: “Células somáticas (já diferenciadas) dividem-se por 50-60 gerações e perdem seus telômeros gradualmente. Quando alguns desses terminais chegam a um limite mínimo de tamanho (característico para cada célula), isso sinaliza a parada das divisões celulares e o início do envelhecimento. Por outro lado, células germinativas (não diferenciadas) têm telômeros longos e multiplicam-se indeterminadamente.” 68. Um certo bacteriófago apresenta os genes F, G, H dispostos como mostra o esquema abaixo. H F G Os genes G e H estão parcialmente sobrepostos, porém os nucleotídeos que constituem o gene H são lidos numa fase de leitura diferente daquela em que são lidos os nucleotídeos do gene G. Aperda de um par de nucleotídeos, na região indicada pela seta, terá, como consequência: a) códons obrigatoriamente sem sentido no local da deficiência, tanto no gene G como no gene H. b) a troca de um aminoácido nas proteínas codificadas pelos genes G e H. c) uma alteração no quadro de leitura dos genes G, H e F. d) uma alteração no quadro de leitura em um dos genes, G ou H. e) uma mudança nos quadros de leitura dos genes G e H. 69. Identifique no cromossomo abaixo os itens indicados. 70. Assinale a alternativa que apresenta a fase do ciclo celular na qual pode ser observado o cromossomo acima representado: a) G1 b) S c) G2 d) interfase e) mitose 71. Responda se a afirmação é verdadeira ou falsa. Caso a afirmativa seja falsa, indique e justifique o que está incorreto. a. ( ) A enzima telomerase é formada por uma molécula de RNA e uma proteína. O componente protéico possui a atividade de DNA helicase e a molécula de RNA serve de molde para a síntese de DNA dos telômeros. b. ( ) A enzima telomerase não é encontrada em protozoários, pois estes organismos possuem cromossomos circulares. c. ( ) A maioria das células somáticas humanas apresenta normalmente pouca ou nenhuma atividade de telomerase. Isso significa que, embora essas células contenham o gene que codifica a enzima, ele está silencioso (inativo), não sendo capaz de produzi-la. d. ( ) Os cromossomos variam em tamanho, forma e número entre diferentes espécies e são compostos essencialmente de DNA e proteínas associadas. d. ( ) Durante a anáfase da mitose, os telômeros são os responsáveis pela migração correta dos cromossomos para os pólos da célula. e. ( ) Células somáticas humanas (já diferenciadas) podem dividir-se por 50-60 gerações e durante este processo aumentam gradualmente seus telômeros. f. ( ) A síntese de DNA realizada pela telomerase ocorre no sentido de 3’ para 5’. 72. A ovelha Dolly foi o primeiro mamífero a ser clonado, em 1997, usando células somáticas e o processo de transferência nuclear. As células somáticas foram obtidas a partir da glândula mamária de uma ovelha doadora. Então, Dolly é uma duplicata genética da ovelha doadora. Enquanto parecia normal ao nascer e apresentava um desenvolvimento normal até os 3 anos de idade, o exame dos cromossomos revelou que seus telômeros eram mais curtos do que se esperava para uma ovelha de sua idade cronológica. Na verdade, observou-se que seus telômeros eram, em média, do tamanho dos esperados para uma ovelha de 6 anos de idade – a idade da ovelha a partir da qual as células de Dolly foram clonadas. Dolly morreu a) b) de uma doença pulmonar aos 6 anos de idade, levando alguns cientistas a acreditar que sua idade biológica ainda era maior do que sua idade cronológica. Com relação à análise dos telômeros da ovelha Dolly pode-se afirmar que: a) Os resultados são inesperados, pois a enzima telomerase deveria estar ativa nas células da glândula mamária. b) Se a clonagem tivesse sido realizada com uma célula do sistema nervoso, o encurtamento dos telômeros não seria observado. c) Devido ao encurtamento dos telômeros, era mais provável que a ovelha Dolly morresse por algum tipo de câncer, pois neste tipo de doença se evidencia telômeros curtos. d) Gêmeos idênticos, por serem uma forma de clone, apresentam telômeros mais curtos, assim como a Dolly. e) Nas células-tronco e células germinativas da ovelha Dolly a enzima telomerase estava ativa. 73. Deseja-se clonar um gene que confere resistência à ampicilina (ampr) em um plasmídeo que possui o gene de resistência de canamicina (canr) como marca de seleção. Os mapas de restrição são dados abaixo. Para obter clones positivos, digere-se o DNA genômico e de plasmídeo com certa enzima e, em seguida, utiliza-se um antibiótico para seleção. Qual a enzima e o antibiótico apropriados para obter dos clones? Justifique a resposta. 74. Os alimentos transgênicos resultam de um processo de modificação molecular por meio das técnicas de engenharia genética. A obtenção de plantas transgênicas passa por três etapas: obtenção do gene que deve ser incorporado em um vetor para se processar a transformação; introdução do gene na planta receptora; e regeneração da célula em uma nova planta, por meio da cultura de tecidos. Disponível em: Acesso em: 9 jul. 2016 (adaptado). A respeito dos vetores utilizados na engenharia genética, avalie as afirmações a seguir. I. Os plasmídeos bacterianos são utilizados como vetores de clonagem do gene de interesse para a transformação genética em plantas. II. Os plasmídeos são dependentes do DNA cromossômico para replicação, sendo frequentemente manipulados no processo de transformação gênica. III. Para ser um bom vetor de clonagem, um plasmídeo deve possuir origem de replicação, sítios de clivagem para endonucleases de restrição e um gene que codifique resistência a um antibiótico. É correto o que se afirma em a) I, apenas. b) II, apenas. c) I e III, apenas. d) II e III, apenas. e) I, II e III. 75. Se você substituir a sequência 3’ não-traduzida (3’-UTR, do inglês untranslated region) de um mRNA com meia vida de 20 minutos por uma 3’-UTR de um mRNA com meia vida de 10 horas, então o mRNA resultante terá uma meia-vida de a) 10 minutos b) 20 minutos c) 5 horas e 10 minutos d) 10 horas e) 10 horas e 20 minutos 76. O funcionamento dos “enhancers” é um exemplo de: a) controle transcricional da expressão gênica b) um mecanismo pós-transcricional através do processamento do mRNA c) estimulação da tradução d) controle pós-traducional e) um mecanismo eucariótico equivalente ao funcionamento de promotor procariótico 77. Embora as bactérias e eucariotos tenham muito da lógica da regulação gênica em comum, existem algumas diferenças fundamentais nos mecanismos subjacentes e maquinaria. A diferença mais importante é que o DNA eucariótico é compactado em nucleossomos, formando cromatina, enquanto o DNA bacteriano não tem nucleossomos. Nos eucariotos, a estrutura da cromatina é dinâmica e é um ingrediente essencial na regulação gênica. As afirmações acima estão corretas? Justifique sua resposta. 78. Qual o papel da acetilação das histonas e da metilação do DNA na regulação da expressão gênica de eucariotos? 79. As diferenças fenotípicas que distinguem os vários tipos celulares em eucariotos superiores são devidas, principalmente, a diferenças na expressão de genes que codificam para proteínas. Em princípio, a expressão destes genes pode ser regulada em algum de vários estágios. Quais são os principais pontos de controle? Para a maioria dos genes, qual é o principal ponto de controle da expressão e quais mudanças estão envolvidas? 80. Cromatina que é ativa transcricionalmente (eucromatina) tem estrutura dispersa, enquanto cromatina que é inativa (heterocromatina) é compacta. Quando núcleos de células de galinha produzindo globina foram tratados brevemente com DNase pancreática, os genes de globina de adultos foram seletivamente destruídos, mas os genes para globina embrionária e ovalbumina permaneceram intactos. Quando os núcleos de células de oviduto foram tratadas com DNase, os genes de ovalbumina foram destruídos. Explique estes resultados. 81. Um pesquisador está estudando o genoma de dois organismos: o puma (Felis concolor) e uma bactéria (Mycobacterium tuberculosis) que causa tuberculose nestes felinos. Cite três diferenças e três semelhanças entre os genomas destes organismos. 82. Qual dos processos listados abaixo não se acredita contribuir para a evolução de novos genes? a) Duplicação de genes para criar cópias extras que podem adquirir novas funções. b) Formação de genes novos de novo a partir de DNA não-codificante no genoma. c) Transferência horizontal de DNA entre células de diferentes espécies. d) Mutação de genes existentes para criar novas funções. e) Embaralhamento de domíniosde genes por rearranjos gênicos. 83. A revista Veja publicou, em sua edição de 29.07.2009, a reportagem “Não há motivo para alarme” onde cita dados do Ministério da Saúde mostrando que a gripe comum matou, no mesmo período em 2008, 4.500 pessoas, contra 33 mortes causadas pelo vírus H1N1 em 2009. A mesma reportagem mostra que um estudo realizado com ratos comprovou que o vírus H1N1 tem dez vezes mais capacidade de infectar o tecido pulmonar do que o vírus da gripe comum. Desta forma, o problema maior da gripe causada por este vírus é sua habilidade em “conquistar hospedeiros” e não sua letalidade. a) Quais são as principais atitudes individuais a serem tomadas para se evitar o contágio, amplamente veiculadas pelo Ministério da Saúde? b) Sobre a reprodução do H1N1 no interior das células foi feita a seguinte afirmação: “Sendo o H1N1 um vírus de RNA, a duplicação do genoma viral ocorre pela ação de uma enzima, a RNA polimerase, que catalisa a síntese de RNA a partir do DNA da célula hospedeira para a produção de novos vírus”. Avalie se esta informação está correta ou não, justificando a sua resposta. 84. O zika virus é um vírus com genoma de RNA fita simples senso positivo. Qual o significado de ‘senso positivo’? a) Que o RNA do genoma viral serve de molde para a síntese de DNA. b) Que o RNA do genoma viral está orientado no sentido 5’→3’. c) Que o vírus possui sua própria RNA polimerase. d) Que o RNA do genoma possui o mesmo sentido do mRNA viral. e) Que o vírus apresenta ribose no seu material genético. 85. O quadro abaixo apresenta uma estimativa do número de pares de base do genoma haplóide de diferentes espécies. ESPÉCIE PARES DE BASE (em milhões) Mosca-das-frutas (Drosophila melanogaster) 180 Jibóia (Boa constrictor) 2 100 Homem (Homo sapiens) 3 300 Gafanhoto (Schistocerca gregaria) 9 900 Cebola (Allium cepa) 18 000 Peixe pulmonado (Protopterus aethiopicus) 140 000 Salamandra (Phioglossum petiolatum) 160 000 Ameba (Amoeba dubia) 670 000 Esses dados confirmam que: a) há uma correlação direta entre número de pares de base e complexidade estrutural e funcional do organismo. b) há uma correlação direta entre número de pares de base e número de genes do organismo. c) o DNA é composto por muitas sequências de pares de bases que não codificam proteínas. d) em relação aos outros organismos, as amebas codificam e sintetizam um maior número de tipos de proteínas. e) o gafanhoto tem cerca de 3 vezes mais genes que o homem. 86. A charge abaixo trata do genoma humano, assunto abordado recentemente pela imprensa, dado o término do projeto de sequenciamento do mesmo. O termo genoma foi criado em 1920 por Hans Winkler e é definido como toda informação hereditária de um organismo que está codificada em seu DNA (ou, no caso de alguns vírus, no RNA). Isto inclui tanto os genes como também as sequências não-codificadoras (conhecidas como DNA-lixo, ou junk DNA). Além do homem (genoma diplóide de aproximadamente 6,7 bilhões de nucleotídeos com 25-30 mil genes), outro organismo que teve seu genoma amplamente estudado foi a bactéria Escherichia coli (genoma de aproximadamente 4,5 milhões de nucleotídeos e 6 mil genes). Laerte (Disponível em: http://www2.uol.com.br/laerte) Assinale verdadeiro ou falso. Caso a afirmativa seja falsa, destaque o que está incorreto. ( ) Os dados comprovam que o código genético humano é o mais evoluído do planeta. ( ) A maior parte do genoma humano é composta por regiões não codificadoras como sequências repetitivas, pseudogenes e sequências endógenas virais. ( ) Os genes da Escherichia coli, organizados na forma de operons, são constituídos de introns e exons. 87. Descreva o que são os processos de transferência horizontal de genes e de embaralhamento de éxons e como a ocorrência destes processos pode gerar diversidade genética. 88. A análise comparativa dos genomas de camundongos e humanos mostrou que 99% dos genes humanos têm uma versão correspondente nesses roedores. No entanto, apesar dessa similaridade nos genes funcionais e na estrutura genética geral, apenas uma fração dos pseudogenes humanos conhecidos tem um correspondente claro em camundongos. Cite ao menos uma possível explicação para isso. 89. A figura abaixo mostra a distribuição de famílias de genes relacionados no genoma da bactéria Bacillus subtilis. Pode-se observar que quase a metade dos genes desta espécie pertence a famílias gênicas. Assinale a alternativa que apresenta os principais processos responsáveis pela evolução de famílias gênicas: a) duplicação gênica e mutação b) reprodução sexuada e deriva genética c) seleção natural e divisão celular d) deleção gênica e transcrição reversa e) isolamento reprodutivo e mutação 90. Faça uma comparação dos genomas de vírus, procariotos e eucariotos, quanto aos itens abaixo: Vírus Procariotos Eucariotos Tamanho relativo do genoma (pequeno, médio ou grande?) Tipo de material genético (DNA ou RNA?) Organização da maior parte do genoma (sequências únicas, repetidas ou ambas?) Origem de replicação (quantidade: uma ou várias) Forma dos cromossomos (circular ou linear?) Processamento dos transcritos (presente ou ausente? Se presente, qual tipo?) 91. Elementos genéticos móveis, ou transposons, podem se mover de um lugar a outro no genoma da célula hospedeira, sendo uma fonte de variação genética. Com relação aos transposons é correto afirmar que: a) não estão presentes em bactérias, sendo exclusivos de eucariotos. b) podem se mover através de um intermediário de RNA, sendo chamados de retrotransposons. c) são raros no genoma humano, mas abundantes no genoma de outros mamíferos. d) podem se mover no genoma somente através de transposição replicativa. e) os transposons humanos são caracterizados por apresentarem código genético diferente do genoma humano. 92. A figura abaixo mostra o ciclo vital de um vírus. Com base na figura são feitas as seguintes afirmativas: I. o vírus mostrado é um retrovírus, pois produziu RNA. II. a liberação das novas partículas virais não afetou a viabilidade da célula. III. para a formação de novas partículas virais é necessário fazer replicação, transcrição e tradução. IV. o vírus infectou uma célula eucariota, pois produziu capsídeo. Assinale a alternativa que apresenta as afirmativas verdadeiras: a) somente II está correta b) somente III está correta c) I e III estão corretas d) II e IV estão corretas e) I, II e IV estão corretas 93. Embora existam muitas semelhanças entre vírus de bactérias e de eucariotos, uma classe importante de vírus –os retrovírus – é encontrada apenas em células eucarióticas. Esta classe de vírus é caracterizada pela presença de uma enzima catalisa uma reação crucial no seu ciclo vital. A enzima que catalisa essa reação é a: a) RNase. b) DNA ligase. c) DNA polimerase I. d) transcriptase reversa. e) enzima de restrição. 94. Represente no gel os fragmentos de DNA abaixo relacionados. 95. Os adenovírus são um grupo de vírus muito comuns de genoma de DNA dupla fita. Estes vírus são compostos de um nucleocapsídio, mas não apresentam uma bicamada externa lipídica (não envelopados). Há mais de 55 sorotipos descritos em humanos e a infecção por um sorotipo não dá imunidade contra os outros. São responsáveis por cerca de 5-10% das infecções respiratórias em crianças. Um pesquisador extraiu amostras de DNA de diferentes pacientes e aplicou as amostras em um gel de agarose. Após a elefroforese ele observou os resultados abaixo: Sabe-se que diferentes tipos de adenovírus apresentam diferentes tamanhos de genoma, constituindo diferentes linhagens genômicas conforme a tabela abaixo: Linhagem genômica Tamanho do genoma (em Kpb) A 41,3 B 37,2 C 45,4 D 30,1 E 25,0 F 22,9 G 28,3 Com base nestes dados, é possível afirmar qual a linhagem genômica de adenovírusque infectou os pacientes? Em caso afirmativo, identifique a linhagem que infectou cada paciente. Canaleta 1: fragmento de 80 pb Canaleta 2: fragmentos de 50 e 100 pb Canaleta 3: fragmento de 48 pb PM= marcador de peso molecular 25pb Canaleta 1: amostra paciente LFK Canaleta 2: amostra do paciente NB Canaleta 3: amostra do paciente CVG PM= marcador de peso molecular 5 Kpb 96. Compare a duplicação do DNA in vivo com a reação em cadeia da polimerase (PCR), mostrando duas semelhanças. 97. Considerando a sequência abaixo, desenhe um par de primers de 15 bases, indicando orientação dos mesmos (5' e 3') e o tamanho esperado (bp) do fragmento amplificado através da reação em cadeia da polimerase (PCR). 3’-TGCTGATCGTGGGCTATTATGGCCCCGCTTATATCGGCTTATCG-5’ 5’-ACGACTAGCACCCGATAATACCGGGGCGAATATAGCCGAATAGC-3’ 98. Responda se a afirmação é verdadeira ou falsa. Caso a afirmativa seja falsa, indique e justifique o que está incorreto. a. ( ) A PCR utiliza uma DNA polimerase termoestável porque para cada ciclo de amplificação, o DNA dupla-fita deve ser desnaturado por calor. b. ( ) Após 4 ciclos da PCR são produzidas 4 vezes mais cadeias de DNA em relação à quantidade inicial presente na reação. c. ( ) O molde original para a PCR pode ser de DNA ou RNA. Se o molde for de RNA é necessária uma etapa inicial envolvendo transcrição reversa. 99. Podemos dizer que o processo de PCR assemelha-se à replicação de DNA in vivo quanto aos seguintes itens: I. Utilização de uma enzima do tipo DNA polimerase. II. Utilização de ribonucleotídeos. III. Síntese de sequências no sentido 5´ 3´. IV. Necessidade de primers para iniciação do processo de síntese. V. Necessidade de altas temperaturas para desnaturar o DNA. Assinale a alternativa que apresenta os itens com as afirmações corretas: a) I, II e IV b) I, II e V c) I, III e IV d) II, III e IV e) II, IV e V 100. A técnica conhecida como reação em cadeia da polimerase (PCR) é um dos métodos de biologia molecular mais difundidos tendo aplicações em testes diagnósticos e prognósticos, medicina forense, estudos evolutivos, entre outros. Assinale a alternativa que apresenta a enzima utiliza na PCR: a) enzima de restrição b) DNA ligase c) DNA polimerase d) transcriptase reversa e) RNA polimerase 101. A técnica de PCR é realizada em ciclos de amplificação. Assinale a alternativa que apresenta as etapas que constituem cada ciclo: a) desnaturação, anelamento e extensão b) replicação, transcrição e tradução c) síntese e reparo do DNA d) transcrição reversa e desnaturação e) replicação e clivagem 102. Na técnica de PCR são utilizados iniciadores sintéticos que direcionam a amplificação do pedaço de DNA desejado. Na replicação do DNA que ocorre em células humanas, qual a enzima que produz os iniciadores: a) DNA polimerase b) telomerase c) DNA ligase d) primase e) DNA girase 103. Em exames clínicos a técnica de amplificação de DNA pela PCR é muito utilizada. No diagnóstico de infecção de um paciente por um determinado vírus, por exemplo, a técnica permite a amplificação específica de material genético do vírus. A especificidade da reação é garantida a) pela DNA polimerase do próprio vírus, que amplifica a sequência do DNA viral. b) pelos sais e nucleotídeos fosforilados do tampão empregado, que reconhecem o DNA viral. c) pelas temperaturas usadas na reação, que permitem a amplificação apenas do DNA viral. d) pela coloração final da reação, que indicará a presença do DNA viral. e) pelos oligonucleotídeos iniciadores, complementares à sequência do DNA viral. Para responder as questões de 104 a 107 considere a sequência de DNA do papilomavírus humano (HPV) abaixo: 5’-TTCATATAATCGGTTCCACGAGCATGAGGCCTGCGCATGTTTATCGGGCGAGCTGGTGAC-3’ 3’-AAGTATATTAGCCAAGGTGCTCGTACTCCGGACGCGTACAAATAGCCCGCTCGACCACTG-5’ 104. Identifique quais dos “primers” (oligonucleotídeos iniciadores) descritos abaixo podem ser utilizados em uma reação em cadeia da polimerase (PCR) para amplificar o HPV. Justifique a resposta. a) 5’-TTCATATAATCGGTTCCA-3’ b) 3’-TTCATATAATCGGTTCCA-5’ c) 5’-AAGTATATTAGCCAAGGT-3’ d) 3’-AAGTATATTAGCCAAGGT-5’ e) 5’-ATCGGGCGAGCTGGTGAC-3’ f) 3’-ATCGGGCGAGCTGGTGAC-5’ g) 5’-TAGCCCGCTCGACCACTG-3’ h) 3’-TAGCCCGCTCGACCACTG-5’ 105. Baseados nos “primers” da questão anterior, o tamanho esperado do amplicon (fragmento amplificado) será de 68 pares de bases (pb). A afirmação está correta? Justifique a resposta. 106. A figura abaixo representa um gel com DNAs de um padrão de peso molecular (PM, de 20 pb) e produtos de PCRs para detecção de HPV (utilizando “primers” da questão anterior). Foram corridos no gel um controle positivo (C+, amostra positiva para o HPV), um controle negativo (C-, amostra negativa para o HPV) e seis amostras de pacientes (canaletas 1 a 6). Quais pacientes estão infectados com o HPV? Justifique sua resposta. 107. Abaixo são mostradas três enzimas de restrição e as sequências de nucleotídeos que elas reconhecem (a barra “/” refere-se ao sítio de clivagem). Alu I 5´AG/CT 3´ Hae III 5´GG/CC 3´ Nla III 5´CATG/ 3´ 3´TC/GA 5´ 3´CC/GG 5´ 3´GTAC/ 5´ Quais são os tamanhos dos fragmentos gerados após a clivagem do DNA, separadamente, com estas enzimas de restrição? 1 2 3 4 5 6 C+ C- PM 140 pb 120 pb 100 pb 80 pb 60 pb 40 pb 20 pb 108. A síndrome respiratória aguda severa (SARS) é causada por um coronavírus, cujo genoma é de RNA simples-fita e tem cerca de 30.000 bases. Tornou-se necessária a obtenção de uma técnica rápida para diagnóstico, o que pôde ser feito por RT-PCR (Polymerase Chain Reaction com transcriptase reversa). Para isso, pode ser utilizado um dos genes desse vírus, como por exemplo aquele que codifica a glicoproteína S do envelope. O esquema abaixo indica sequências de regiões desse gene, a partir das quais foram desenhados os iniciadores I e II (16 nucleotídeos indicados pelo tamanho da seta) utilizados na PCR após a reação com a transcriptase reversa. ... ...... As sequências corretas desses iniciadores, de modo a garantir a amplificação por PCR, são: (A) Iniciador-I 5'-TATTTTGCTGCCACAG-3' e Iniciador-II 5'-ACATACTATGATAAAC-3' (B) Iniciador-I 5'-TATTTTGCTGCCACAG-3' e Iniciador-II 5'-TGTATGATACTATAAG-3' (C) Iniciador-I 5'-TATTTTGCTGCCACAG-3' e Iniciador-II 5'-GAATATCATAGTATGT-3' (D) Iniciador-I 5'-CTGTGGCAGCAAAATA-3' e Iniciador-II 5'-TGTATGATACTATAAG-3' (E) Iniciador-I 5'-CTGTGGCAGCAAAATA-3' e Iniciador-II 5'-ACATACTATGATATTC-3' 109. É possível desnaturar a fita dupla do DNA pelo calor. A temperatura em que a metade das cadeias está desnaturada é denominada ponto de fusão (Tm). O DNA contendo A = T = G = C tem aproximadamente Tm = 89,8°C. O ponto de fusão do DNA de uma bactéria é Tm = 91,7 °C. Portanto, esse DNA tem a) A + T > G + C b) A > T > G > C c) A + T < G + C d) A < T < G < C e) A + G < T + C 110. Compare a reação em cadeia da polimerase (PCR) com a reação de sequenciamento, mostrando duas semelhanças e duas diferenças. 111. Abaixo estão autorradiografias que representam o sequenciamento da mesma região genômica de dois indivíduos. A) Escreva a sequência de DNA observada do indivíduo 1, indicando as extremidades 5’ e 3’. B) Indique qual indivíduo é heterozigoto, qual é homozigoto e qual o nome da base nitrogenada mutada. Indivíduo 1 Indivíduo 2 112. Na Argentina, durante a ditadura militar iniciada em 1976, muitas crianças foram sequestradas com seus pais ou nasceram em centros clandestinos de detenção. Essas crianças foram adotadas, vendidas ou abandonadas em orfanatos. A Associação Civil "Avós da Praça de Maio" tem buscado localizar essas crianças com a finalidade de restituí-las a suas famílias legítimas, empregandopara isso testes de identificação genética, que são possíveis, atualmente, mesmo na ausência dos pais. A comparação entre os DNAs mitocondriais de possíveis netos e avós tem sido um dos testes utilizados nesses processos de identificação de parentesco. Justifique a escolha do DNA mitocondrial para esta análise. 113. Um casal deseja saber qual o risco de ter filhos com fibrose cística, uma doença autossômica recessiva. Testes genéticos foram realizados no casal e se obteve os genótipos abaixo. Sabe-se que o alelo mutante possui a sequência 5’- ATCTCGCAATCG -3’ e o alelo normal a sequência 5’- ATCTCGCCATCG -3’. Indivíduo Alelo 1 Alelo 2 Homem 5’-ATCTCGCCATCG-3’ 5’-ATCTCGCAATCG-3’ Mulher 5’-ATCTCGCCATCG-3’ 5’-ATCTCGCAATCG-3’ Foi realizado o sequenciamento do gene da fibrose cística no primeiro filho do casal e obteve-se o resultado abaixo. As quatro canaletas mostram os produtos das reações de sequenciamento que continham nucleotídeos modificados [didesoxinucleotídeos ddA (canaleta A), ddC (canaleta C), ddG (canaleta G) e ddT (canaleta T)]. canaletas A C G T (-) (+) Com bases nas informações fornecidas analise as seguintes afirmativas: 1. Os pais são homozigotos. 2. A chance do casal ter um filho com a doença é de 25%. 3. O genótipo do filho é o mesmo genótipo do pai. Quais as alternativas corretas? Justifique sua resposta. 114. Desenvolvida recentemente, a técnica de edição de genoma denominada CRISPR/Cas9 mostra-se bastante promissora nas áreas de Biotecnologia e Medicina. Por engenharia genética, é possível direcionar o sistema CRISPR/Cas9 para clivar o DNA em um ponto específico dos genomas de vírus, de plantas, de fungos e de animais, inclusive de embriões humanos, o que tem gerado discussões a respeito dos aspectos éticos de sua utilização. Yanagui K. Novas tecnologias, novos desafios. Ciência e Cultura, v. 68, n. 3, set. 2016 (adaptado). Em relação às questões bioéticas envolvidas na edição genética, avalie as afirmações a seguir. I. No Brasil, não é permitido o uso de técnicas para a edição genética de embriões humanos; os estudos científicos nessa área devem ter como objetivo tratar e curar problemas de saúde e não alterar o genoma ou realizar clonagens. II. A despeito do caráter promissor da edição genética no tratamento de doenças graves, as intervenções feitas por meio da técnica de CRISPR/Cas9 em embriões podem ser passadas às gerações futuras, por esse motivo, a prática é considerada eugenista, o que ensejou a proibição de estudos desse tipo em embriões humanos em alguns países. III. Em alguns países, inclusive no Brasil, são permitidas por lei a manipulação e a modificação genética de embriões humanos para fins de pesquisa, entretanto, esses embriões devem ser descartados dentro do prazo de duas semanas. É correto o que se afirma em a) I, apenas. b) III, apenas. c) I e II, apenas. d) II e III, apenas. e) I, II e III. 115. A hemocromatose é uma doença genética autossômica recessiva que causa sobrecarga de ferro nos tecidos e está associada a numerosas complicações clínicas (cirrose, artrite, cardiomiopatia, diabetes). Em indivíduos descendentes de caucasóides, a doença afeta 1 a cada 300. Existe uma forma de aparecimento tardio que pode ser prevenida através de transfusões regulares de sangue. O gene, HFE, foi identificado em 1996. Aproximadamente 80% dos indivíduos com Hemocromatose têm uma mutação de um nucleotídeo no códon 282 do gene. A mutação resulta na alteração de uma guanina (G) por uma adenina (A), criando um sítio de restrição, onde a enzima RsaI pode clivar. Assim, análises de RFLP podem ser usadas para determinar se um indivíduo tem a mutação descrita no gene HFE. Cinco indivíduos pediram para ser testados para a mutação em questão. O gel abaixo mostra o resultado da análise de uma PCR-RFLP com a enzima de restrição RsaI. Considerando que o fragmento amplificado já possui um sítio de restrição “natural” para essa enzima, determine a condição de cada indivíduo em relação ao gene HFE. Marcador (pb) Indivíduo 1 Indivíduo 2 Indivíduo 3 Indivíduo 4 Indivíduo 5 248 140 111 29 116. Um microssatélite do tipo tetranucleotídeo (repetição AGCA) foi amplificado pela PCR produzindo o fragmento abaixo. Esta amplificação se refere ao alelo com 7 repetições. Qual o tamanho do fragmento amplificado em pares de base? Qual seria o tamanho em pares de base dos alelos com 3, 6, e 10 repetições? 5’-AGTGGAGGTGAAAATTCCAGCAAGCAAGCAAGCAAGCAAGCAAGCATATTAAGAGCCAAAGCCCTT-3’ 3’-TCACCTCCACTTTTAAGGTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTATAATTCTCGGTTTCGGGAA-5’ 117. Um casal foi genotipado para um determinado microssatélite, sendo o genótipo do pai 8/15 e o genótipo da mãe 11/16. Dado os genótipos dos pais quais os genótipos possíveis para um filho deste casal? 118. Responda se a afirmação é verdadeira ou falsa. Caso a afirmativa seja falsa, indique e justifique o que está incorreto. a. ( ) As metodologias de clivagem com enzimas de restrição (RFLP) e PCR são fundamentadas no mesmo princípio e requerem a mesma quantidade de amostra, diferindo apenas quanto às enzimas utilizadas. b. ( ) Um casal que foi genotipado para um determinado microssatélite, sendo o genótipo do pai 8/11 e o genótipo da mãe 9/12, pode ter um filho com o mesmo genótipo do pai. 119. Seis araras azuis (identificadas pelos números de 1 a 6) foram apreendidas pela fiscalização e enviadas para o laboratório de um pesquisador para estudo, com o objetivo de implantar um programa de reprodução em cativeiro. Atualmente essas aves ocorrem em três áreas isoladas (Amazônia, Pantanal e Gerais) e não é possível distinguir o macho da fêmea pela aparência externa. Diferentes marcadores moleculares foram utilizados para caracterizar cada uma das araras apreendidas. Os resultados estão apresentados nos quadros abaixo. Com base nos resultados obtidos é aconselhável a realização de cruzamentos entre os animais a) 1 e 3; 2 e 4; 4 e 6 b) 1 e 3; 2 e 5; 4 e 6 c) 1 e 2; 3 e 4; 5 e 6 d) 2 e 5; 3 e 6; 4 e 5 e) 3 e 4; 3 e 5; 4 e 6 Código genético Asp Glu His Lys Met* Phe Trp Cys Tyr Gln Asn D E H K M F W C Y Q N GAC GAA CAC AAA AUG UUC UGG UGC UAC CAA AAC GAU GAG CAU AAG UUU UGU UAU CAG AAU Gly Ala Val Leu Ile Thr Arg Ser Pro stop G A V L I T R S P GGA GCA GUA UUA AUA ACA AGA AGC CCA UAA GGC GCC GUC UUG AUC ACC AGG AGU CCC UAG GGG GCG GUG CUA AUU ACG CGA UCA CCG UGA GGU GCU GUU CUC ACU CGC UCC CCU CUG CGG UCG CUU CGU UCU * códon de iniciação
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