Potencial do óleo de microalga para a produção de biodiesel

•

UNIVIÇOSA

mayana chaves mendes

07/06/2020

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Química Orgânica Experimental II

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UNIÃO DE ENSINO SUPERIOR DE VIÇOSA
FACULDADE DE CIÊNCIAS E TECNOLOGIA DE VIÇOSA
CURSO DE ENGENHARIA QUÍMICA

MAYANA CHAVES MENDES

POTENCIAL DO ÓLEO DE MICROALGAS PARA PRODUÇÃO
DE BIODIESEL

VIÇOSA – MG
2019

MAYANA CHAVES MENDES

POTENCIAL DO ÓLEO DE MICROALGAS PARA PRODUÇÃO
DE BIODIESEL

Trabalho apresentado à banca examinadora, do
curso de Engenharia Química da UNIVIÇOSA,
como parte integrante das exigências da disciplina
Trabalho de Conclusão de Curso, e como requisito
parcial para obtenção do título de Engenheira
Química.

Orientadora: Svetlana Fialho Sória Galvarro
Co-orientadora: Manoela Maciel S. Dias

VIÇOSA – MG
2019

iii

MAYANA CHAVES MENDES

POTENCIAL DO ÓLEO DE MICROALGAS PARA PRODUÇÃO
DE BIODIESEL

Orientadora: Svetlana Fialho Sória Galvarro
Co-orientadora: Manoela Maciel S. Dias

APROVADA EM: ___ /___ /___

_________________________________
Prof. Márcio Arêdes Martins
Convidado

_________________________________
Profª. Manoela Maciel S. Dias
Co-orientadora

_________________________________
Profª. Svetlana Fialho Sória Galvarro
Orientadora

VIÇOSA – MG
2019

“Talvez eu não tenha conseguido fazer o melhor, mas lutei para que o
melhor fosse feito. Não sou o que deveria ser, mas graças a Deus, não sou o
que era antes. ”
Marthin Luther King

AGRADECIMENTOS
Agradeço primeiramente a Deus, por toda proteção e sempre renovando a
minha fé.
Aos meus pais, por sempre acreditarem em mim e em meus sonhos, ao
amado irmão por todo apoio durante essa jornada.
Ao meu namorado Mateus, por estar ao meu lado em todos os momentos,
por ser meu porto seguro e sempre me acalmar diante das tempestades.
Ao meu amado e precioso filho Antônio, você foi o combustível essencial para
a realização desse sonho, te amo filhão!
Aos meus amigos, por dividirem comigo sonhos, angustias e felicidades em
especial as minhas Friendizinhas, que era meu grupo de estudo e hoje são amigas
para a vida toda.
Aos meus professores por todo conhecimento passado, em especial a minha
orientadora Svetlana, por sempre me apoiar e embarcar comigo nesse tema de TCC
tão difícil, obrigada pelos conselhos dado, por não ser somente minha professora,
por ser minha amiga e muitas vezes confidente, como sempre falo a você, você é
muito especial para mim e para meu filho Antônio. A minha co-orientadora Manoela,
por me sempre me incentivar, por não deixar eu desanimar diante das dificuldades
que encontrei em ser mãe e aluna, obrigada por ser minha amiga e professora, você
também é muito especial para nós.
Ao professor Márcio Arêdes Martins, por ter aberto a porta do seu laboratório
e dispor do seu tempo para compartilhar seus conhecimentos e agregar mais valor
à minha formação.
Aos técnicos do Laboratório de Biocombustíveis da UFV, Mauricio e Dilson,
pela paciência e ensinamentos, vocês são um máximo, aos meus colegas do
laboratório cada um contribuiu para a realização desse trabalho, muito obrigada!

RESUMO
MENDES, Mayana Chaves. Potencial do Óleo de Microalgas para Produção de
Biodiesel. 2019. 26 f. TCC (Graduação) – Curso de Engenharia Química,
Faculdade de Ciências e Tecnologia de Viçosa, Viçosa, Ano. Orientadora: Svetlana
Fialho Sória Galvarro. Co-orientadora: Manoela Maciel S. Dias.
Uma alternativa para a produção do biodiesel é a extração de óleos microbianos,
como de microalgas, pois estudos apontam que as algas verdes são as mais
favoráveis para a obtenção de biodiesel. No entanto, ressalta-se que as espécies
de microalgas que tem maiores eficiências na fixação de CO2, tratamento de
efluentes e biossíntese de lipídeos para obtenção de biodiesel são as Scenedesmus
e Chlorella. A produção lipídica da Scenedesmus sp. pode variar de 10 a 25% em
cultivo padrão, podendo aumentar esse rendimento em até 70 % em cultivos
adaptados. Dessa forma, o presente trabalho objetivou-se avaliar qualitativamente
e quantitativamente o óleo microbiano, quanto ao índice de acidez, índice de
saponificação e identificação de compostos lipídicos do óleo através da
cromatografia em camada fina (TLC), a fim de saber seu potencial para a produção
de biodiesel. O índice de acidez do óleo de microalga que mais se aproximou foi o
tratado com etanol a 90% obtendo um valor 94,8 mKOH/g, sendo esse bem acima
do exigido pela ANP que estabelece um índice de acidez menor do que 0,5%
mgKOH/g. O índice de saponificação do óleo de microalga que mais se aproximou
do exigido pela ANVISA que estabelece uma faixa de 177 a 195 mgKOH/g foi o
tratado com etanol a 50% no valor de 236,5 mgKOH,/g. Através da realização do
TLC, foi possivel verificar a presença dos principais lipídios (triglicerídeos, ácidos
graxos livres e lipídios polares) presentes nas amostras, indicando que mesmo com
o fracionamento através de hidratação com solvente (etanol e acetona) e o elevado
índices de acidez e saponificação, mostra que as amostras dos óleos de microalgas
contêm os lipídios necessários para produzir biodiesel. Os resultados obtidos para
os óleos de microalgas, indica a complexidade do mesmo. A TLC sugere que o óleo
de microalga é uma alternativa para a obtenção do biodiesel, pois existe em sua
composição os ácidos graxos essenciais para a produção do mesmo.

Palavras-Chave: Microalgas, Scenedesmus, Índice de Acidez, Índice de
Saponificação, Cromatografia de Camada Fina.

vii

ABSTRACT
MENDES, Mayana Chaves. Potential of Microalgae Oil for Biodiesel Production.
2019. 26 f. Chemical Engineering Course, Faculdade de Ciências e Tecnologia de
Viçosa, Viçosa. Advisor: Svetlana Fialho Sória Galvarro.

An alternative for the production of biodiesel is the extraction of microbial oils, such
as microalgae, because studies indicate that green algae are the most favorable for
obtaining biodiesel. However, it is noteworthy that the microalgae species that have
higher efficiencies in CO2 fixation, effluent treatment and lipid biosynthesis to obtain
biodiesel are Scenedesmus and Chlorella. The lipid production of Scenedesmus sp.
It can vary from 10 to 25% in standard crops and can increase this yield by up to
70% in adapted crops. Thus, the present work aimed to qualitatively and
quantitatively evaluate the microbial oil, regarding its acidity index, saponification
index and identification of oil lipid compounds through thin layer chromatography
(TLC), in order to know its potential for biodiesel production. The acidity index of the
closest microalgae oil was that treated with 90% ethanol to obtain a value of 94.8
mKOH / g, which is well above that required by the ANP which establishes an acidity
index of less than 0.5. % mgKOH / g. The saponification index of the microalgae oil
that most closely approximated that required by ANVISA establishing a range of 177
to 195 mgKOH / g was treated with 50% ethanol at 236.5 mgKOH / g. Through the
TLC, it was possible to verify the presence of the main lipids (triglycerides, free fatty
acids and polar lipids) present in the samples, indicating that even with fractionation
through hydration with solvent (ethanol and acetone) and the high acidity indices.
and saponification, shows that microalgae oil samples contain the lipids needed to
produce biodiesel. The results obtained for microalgae oils indicate its complexity.
TLC suggeststhat microalgae oil is an alternative for obtaining biodiesel, as its
essential fatty acids are present in its production.

Key-Words: Microalgae, Scenedesmus, Acidity Index, Saponification Index,
Thin Layer Chromatography.

viii

LISTA DE FIGURAS
Figura 1:Scenedesmus sp. ........................................................................ 17
Figura 2: Reação de Saponificação. .......................................................... 21
Figura 3: Exemplo de separação de lipídios neutros de microalga Pavlova
lutheri usando TLC unidimensional. No qual os Diacilgliceróis (DAG), ácidos graxos
livres (AGL), monoacilgliceróis (MAG), lipídios neutros (NL), pigmentos (Pig),
lipídios polares (PL), triacilgliceróis (TAG), lipídico total (TL).. .............................. 23
Figura 4: TLC do Óleo de Microalgas em diferentes amostras. ................. 31

LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Comparação de produtividade do óleo de microalga e oleaginosas
convencionais.. ...................................................................................................... 18
Tabela 2: Principias Ácidos Graxos das Microalgas .................................. 18
Tabela 3:Teor de Lipídeo em microalgas ................................................... 19
Tabela 4: Propriedades das Matérias da Produção de Biodiesel. .............. 22
Tabela 5: Parâmetro do Titulante do Índice de Acidez............................... 28
Tabela 6: Índice de Acidez do Óleo de Soja. ............................................. 28
Tabela 7: Índice de Acidez para fracionamento de óleo de microalgas ..... 28
Tabela 8: Parâmetros do Titulante do Índice de Saponificação. ................ 29
Tabela 9: Índice de Saponificação Óleo de Soja. ...................................... 29
Tabela 10: Índice de Saponificação para as condições de fracionamento do
óleo de Microalgas ................................................................................................ 30

LISTA DE EQUAÇÕES
Equação 1: Índice de Acidez: .................................................................... 26
Equação 2: Índice de Saponificação. ......................................................... 27

file:///C:/Users/Mayana/Desktop/TCC%20MAYANA.docx%23_Toc23179607
file:///C:/Users/Mayana/Desktop/TCC%20MAYANA.docx%23_Toc23179608

LISTA DE SÍMBOLOS E ABREVIAÇÕES
IS – Índice de Saponificação
IA – Índice de Acidez
ANVISA – Agência Nacional de Vigilância Sanitária
ANP – Agência Nacional do Petróleo, Gás Natural e Biocombustíveis
CO2 – Dioxido de Carbono
pH – Potencial Hidrogênico
HCl – Ácido Clorídrico
NaOH – Hidróxido de Sódio
C2H5OH – Etanol
KOH – Hidróxido de Potássio
SCO – Single Cell Oil
TAG – Triglicerídeos
DHA - Ácido Docosaexaenoico
EPA - Ácido Eicosapentaenoicos
LC-PUFA – Ácido Graxo Poliinsaturado de Cadeia Longa
NR – Norma Regulamentadora
UFV – Universidade Federal de Viçosa
mL – Mili Litros
TLC – Cromatografia de Camada Fina
RPM – Rotação por Minuto
g – Gramas
L – Litros
mg – Mili Gramas
BR – Branco
A – Acetona
E – Etanol
°C – Graus Celsius
Nº - Número
% - Porcentagem
f - Fator de Correção
Rf – Fator de Retenção

xii

SUMÁRIO
1. INTRODUÇÃO ...................................................................................... 13
2. OBJETIVO ............................................................................................ 15
2.1. Objetivo Geral ................................................................................. 15
2.2. Objetivos Específicos .................................................................... 15
3. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA .................................................................. 16
3.1. Microalgas ...................................................................................... 16
3.2. Biomassa e Óleo de Microalgas ................................................... 17
3.4. Métodos de Extração de Lipídeos ................................................ 19
3.5. Análise Quantitativa do Óleo ........................................................ 20
3.5.1. Índice de Acidez ...................................................................... 20
3.6. Análise Qualitativa do Óleo ........................................................... 22
3.6.1. Cromatografia de Camada Fina (TLC) ................................... 22
3.7. Biodiesel ......................................................................................... 23
4. MATERIAIS E MÉTODOS .................................................................... 25
4.1. Tipo de Pesquisa .......................................................................... 25
4.2. Extração do Óleo de Microalgas ................................................. 25
4.3. Análise Quantitativa e Qualitativa ............................................... 26
4.3.1. Índice de Acidez ...................................................................... 26
4.3.2. Índice de Saponificação ......................................................... 26
4.3.3. Cromatografia de Camada Fina (TLC) ................................... 27
5. RESULTADOS E DISCUSSÕES .......................................................... 27
5.1. Análise Quantitativa e Qualitativa do Óleo ................................ 27
5.1.1. Índice de Acidez ...................................................................... 27
5.1.2. Índice de Saponificação ......................................................... 29
5.1.3. Cromatografia em Camada Fina (TLC) .................................. 30
6. CONCLUSÃO ....................................................................................... 32
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...................................................... 33

1. INTRODUÇÃO
O crescimento populacional verificado nos últimos anos aliado ao
desenvolvimento industrial tem aumentado a demanda e a dependência por
combustíveis fósseis, que além de não serem renováveis, tem preços susceptíveis
à ordem política vigente. Esse contexto tem propiciado maior interesse por fontes
alternativas de combustíveis (RAMOS et.al, 2016). Entre as fontes alternativas mais
atraentes tanto do aspecto econômico quanto de viabilidade de produção, destaca-
se o etanol e o biodiesel.
O álcool etílico ou também conhecido como etanol, é um álcool de forma
molecular C2H5OH gerado, principalmente, pela fermentação de açúcares
(AGÊNCIA NACIONAL DO PETRÓLEO, GÁS NATURAL E BIOCOMBUSTIVEL,
2016). A utilização do etanol é bem ampla tendo várias aplicabilidades no dia a dia
dos brasileiros; nas indústrias pode ser utilizado como solventes, já no cotidiano
como antisséptico, conservante, desinfetante, além de estar presente também em
bebidas como cervejas e destilados. No entanto, sua forma mais viável
economicamente é como fonte energética, servindo de combustível para motores a
explosão, substituindo a gasolina, de origem fóssil (CHIEPPE JÚNIOR, 2012).
Outra fonte renovável energética é o biodiesel, sendo um substituto ao diesel
de petróleo, pois suas fontes são naturais e renováveis. A principal produção do
mesmo ocorre pela quebra do triglicerol dos óleos vegetais ou gordura animais, na
presença de um álcool de cadeia curta ocorre a reação conhecida como
transesterificação (RAMOS; SILVA; MANGRICH; CORDEIRO; 2011).
Uma das problemáticas para a produção da matéria-prima do biodiesel
vegetal é à disposição de enorme espaço para o cultivo agrícola e o longo período
de espera para a colheita do vegetal (DÍAZ, 2015). A soja é a matéria-prima mais
utilizada na produção de biodieselno Brasil; o problema é sua baixa produtividade
de óleo e a disputa por terras cultiváveis. A demanda crescente por biodiesel vem
propiciando o surgimento de novas linhas de pesquisas para fontes de produção
alternativas (HADI, 2015). Uma dessas alternativas para a produção do biodiesel é
a extração de óleos microbianos, como de microalgas, sendo uma fonte atraente
como matéria-prima para a produção de biocombustível (DIÁZ, 2015). As
microalgas são capazes de concluir seu ciclo de crescimento em menos tempo, e

portanto, é o microrganismo unicelular que se desenvolve mais rápido em
comparação aos demais (VIDAL JUNIOR, 2015).
Os óleos conhecidos mundialmente como Single Cell Oil (SCO) são os óleos
provenientes dos microrganismos que podem servir como matéria-prima para
obtenção do biodiesel. A descoberta do SCO ocorreu em meados do século XX
(DIÁZ, 2015) e possuem características químicas e físico-químicas semelhantes
aos dos óleos vegetais, além de terem boa composição de ácidos graxos, que é o
principal subproduto para a produção do mesmo (CARDOSO; VIEIRA; MARQUES,
2011). Dessa forma, o presente trabalho objetivou-se avaliar qualitativamente e
quantitativamente o óleo microbiano, a fim de caracterizar o óleo quanto ao índice
de acidez, índice de saponificação e identificação de compostos lipídicos do óleo
através da cromatografia em camada fina (TLC), a fim de determinar seu potencial
para a produção de biodiesel.

2. OBJETIVO
2.1. Objetivo Geral
Caracterizar qualitativa e quantitativa o óleo microbiano produzido a partir de
microalgas para obtenção de biodiesel.
2.2. Objetivos Específicos
 Caracterizar quantitativamente o óleo microbiano por meio do índice
de acidez e índice de saponificação;
 Caracterizar qualitativamente o óleo microbiano por meio de
cromatografia em camada fina (TLC), avaliando seu potencial para a produção de
biodiesel.

3. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

3.1. Microalgas
As microalgas são microrganismos eucariontes, contém um núcleo bem
definido e separado da membrana citoplasmática (DIÁZ, 2015). Possui duas
classificações para seu desenvolvimento, sendo autotróficas as que precisam de
luz para se desenvolver ou heterotróficas as que precisam de um composto
orgânico para seu crescimento (FRANCO, et al., 2013). São microrganismos
capazes de realizar fotossíntese, denominados como talófitos, não possuem folhas,
caule, raízes, embriões e sistema vascular. As suas células podem variar os
tamanhos entre 2 a 200 μm (MUTANDA, 2011).
Esses microrganismos são considerados essenciais para a preservação da
vida na Terra, sendo que participam juntamente com as macrófitas aquáticas na
geração da maior parte do gás oxigênio da atmosfera (MONÇÃO, 2015). Estão
presentes em meios aquáticos e/ou úmidos podendo viver em forma de colônias.
Além disso, podem ser cultivadas em vários ambientes podendo ser de águas
salgadas, salobras ou residuárias, ou em solos considerados pobres, tendo sua
colheita independente de situações sazonais (BRASIL; GARCIA, 2016).
As microalgas são divididas em três classes predominantes, sendo elas as
diatomáceas (Bacillariophyceae), as algas douradas (Chrysophyceae) e as algas
verdes (Chlorophyceae) (DEMIBRAS &DEMIBRAS, 2010).
Estudos apontam que as algas verdes são as mais favoráveis para a
obtenção de biodiesel. As mais utilizadas são dos gêneros Chlorella,
Chlamydomonas e Dunaliella (ROSENBERG et al., 2008). No entanto, ressalta-se
que as espécies de microalgas que tem maiores eficiências na fixação de CO2,
tratamento de efluentes e na biossíntese de lipídeos para obtenção de biodiesel são
as do gêneros Scenedesmus e Chlorella (BLERSCH et al., 2013; TANG et al., 2012;
XIN et al., 2010).
Scenedesmus sp.
São microrganismos clorofilados possuem coloração esverdeada,
unicelulares e possuem apenas um núcleo, da família Scenedesmaceae e pertence
o gênero Scenedesmus sp., ordem Chlorococcales, classe Chlorophyceae e divisão
Chlorophyta (OLIVEIRA, 2013; LEE et al., 2008). Essa espécie é mais comum em
plâncton de águas doces, é um microrganismo de fácil adaptação as variações

climáticas (SCHROEDER, 2013). Possuem forma de elipsóide, formam colônias
com duas a oito células, podendo ser encontrada com apenas uma célula ou em
situações extremas com dezesseis a trinta e duas células. O teor de lipídeos de
Scenedesmus sp. pode variar de 10 a 25% em cultivo padrão, podendo aumentar
esse rendimento em até 70 % em cultivos adaptados (OLIVEIRA, 2013). A
porcentagem lipídica da espécie faz com que seja atrativa para produção de
biocombustíveis (LEE et al., 2008).

Figura 1:Scenedesmus sp.
Fonte: Soares, (2018).

3.2. Biomassa e Óleo de Microalgas
As microalgas são capazes de produzir vários subprodutos comercialmente
interessantes tais como: gorduras, óleos, açúcares e compostos bioativos
funcionais (OILGAE, 2007). Tem alto potencial biotecnológico para fonte energética,
podendo ser usado na produção de biocombustíveis e constituído de biocomposto
que auxilia na fertilização do solo (SOUTO et al., 2014).
As microalgas apresentam alta produtividade lipídica, tornando-se vantajosas
em comparações com os vegetais, por possuírem uma produtividade elevada de 10
a 100 vezes superior, como descrito na Tabela 1 (BRASIL; GARCIA, 2016).

Tabela 1: Comparação de produtividade do óleo de microalga e oleaginosas convencionais. Fonte:
VEIGAS, (2010), (editada).
Oleaginosa Óleo (%)
Rend. De
óleo(L óleo/ha ano)
Produtividade
de biodiesel (kg de
biodiesel/ha ano)
Soja 18 636 562
Palma 36 5366 4747
Microalga (baixo
teor de óleo)
30 58700 51927
Microalga (médio
teor de óleo)
50 97800 86515
Microalga (alto
teor de óleo)
70 136900 121104

Segundo Guihéneuf; Schmid; Stengel, (2015), as microalgas produzem
grandes quantidades de ácidos graxos poliinsaturados de cadeia longa (LC-PUFA),
como ácido eicosapentaenóico (EPA, 20: 5 n-3) e docosahexaenóico (DHA, 22: 6
n-3). Os principais ácidos graxos presentes nas microalgas estão relacionados na
Tabela 2.
Tabela 2: Principias Ácidos Graxos das Microalgas
Nome Descritivo Nome sistemático Átomos de Carbono
Láurico Dodecanóico 12
Mirístico Tetradecanóico 14
Palmítico Hexadecanóico 16
Palmitoléico Hecadecanóico 16
Esteárico Octadecanóico 18
Oleico Octadecanóico 18
Linoleico Octadecanóico 18
Alfa-Linoleico Octadecanóico 18
Gama-Linoleico Octadecanóico 18
Homo Gama-
Linoleico
Eicosatrienóico 20
Araquidônico Eicosatrienóico 20
EPA Eicosatrienóico 20
DHA Decosahexaenóico 22

Com substâncias importantes para aplicações nutricionais e farmacêuticas,
as microalgas podem também acumular óleo em forma de trigliceróis (TAG),
importante matéria-prima para produção de biodiesel. Os triglicerídeos são
formados por um mol de glicerol e três moles de ácidos graxos, sendo esses os
principais grupos constitutivos. O tipo de ácido graxo interfere significativamente na
qualidade do biodiesel, pois interfere em várias outras características essenciais
para a composição do mesmo, como o número de cetano (CN), que é o indicador
de qualidade de ignições dos motores a explosão. O CN está relacionado com o

tamanho da cadeia carbônica dos ácidos graxos, quanto maior a cadeia carbônica
maior o CN, o que é interessante para uma melhor explosão dos motores a cadeia
carbônica não pode ser curta (CHEM; et al., 2018).
Óleos microbianos são conhecidos mundialmente como Single Cell Oil, que
significa óleo de célula única, produzidos por microrganismos oleaginosos que tem
a capacidade de estocar de 20% a 80% de lipídeos sendo estes presentes
intracelulares. Essa porcentagem de lipídeos refere-se à biomassa seca
(OCHSENREITHERet.al., 2016).
Na Tabela 2 estão apresentados os teores de lipídeos de algumas espécies
de microalgas (VIDAL JUNIOR, 2014).
Tabela 3:Teor de Lipídeo em microalgas
Espécie de Microalgas % m/m de Óleo
Ankistrodesmus TR-87 28-40
Botyococcus braunii 29-75
Chlorella sp 29
Chlorella protothecoides
(autotrófica/heterotrófica)
15-55
Cyclotella DI-35 42
Dunaliella Tertiolecta 36-42
Hantzschia DI-160 66
Nannochloris 31
Nitzschia TR-114 46
Phaeodactylum tricornutum 28-50
Scenedesmus TR-84 31
Stichococcus 45
Tetraselmis suecica 15-32
Thalassiosira pseudonana 21-31
Fonte: Vidal Junior, (2014).
Para aumentar o número de biomassa e o teor lipídico da microalga deve-se
analisar o meio de cultura e adicionar o nutriente necessário para o desenvolvimento
da espécie (ROCHA et al., 2018). Quando as microalgas crescem em ambientes
em escassez de nutrientes, a falta de luminosidade adequada e quantidade de CO2
principal fonte de carbono para as microalgas autotróficas, pH e variação nas
temperaturas afetam o crescimento e a composição química (SCHNEIDER, 2006;
CHISTI, 2007).
3.4. Métodos de Extração de Lipídeos
A extração de lipídeos é um fator importante em pesquisas e estudos
bioquímicos e fisiológicos, por isso esse processo deve ser realizado
minuciosamente. Várias espécies precisam de máximo cuidado para obtenção do
óleo, pois alguns fatores no processo de extração como frações não lipídicas e

oxidações podem influenciar na qualidade do produto final da extração, fazendo
com que a extração em escala comercial seja um desafio (HALIM et al., 2011;
BRUM, 2004).
Para boa extração lipídica devem-se conhecer todos seus constituintes, a fim
de obter uma extração mais confiável e com maior rendimento, no qual a escolha
do método varia de acordo com as características do óleo que será extraído
(VIÊGAS, 2010).
Um dos métodos clássicos para extração de lipídeos foi criado por Soxhlet
em 1879, que consiste em um aparelho de vidro (soxhlet) sobre refluxo de solvente.
Esse processo demanda muito tempo para extração, e processos de extração de
lipídeos demorados devem ser evitados, pois proporciona reações indesejadas
como a de hidrólise e peroxidação (KATES, 1972). Um dos procedimentos mais
eficazes e variados em questões de solventes é o método de Bligh e Dyer sendo
esse método idealizado por Folch et al. em 1957, em que consiste na utilização de
uma mistura de clorofórmio e metanol (BRUM, 2004).
Todos os métodos utilizados para extração do óleo de microalga são à base
de solventes orgânicos, mas devem analisar o tipo de solvente que será utilizado,
levando em consideração a toxidade do solvente, a fração lipídica que se quer
extrair, volatilidade, a capacidade de formar fase com água para facilitar a retirada
da parte não lipídica, entre outros fatores (BRUM, 2004).
3.5. Análise Quantitativa do Óleo
3.5.1. Índice de Acidez
O controle da acidez no óleo é um fator quantitativo, sendo proveniente da
hidrólise que ocorre em condições de grande umidade, com aparecimentos de
ácidos graxos livres e pode mostrar também o estado de conservação do óleo.
Quando o óleo é refinado, o índice de acidez serve como controle de qualidade do
mesmo (LOBO; FERREIRA; CRUZ, 2009).
Esse índice mostra o valor gasto em mg de base necessário para neutralizar
os ácidos graxos livres em 1g de amostra (TOFANINI, 2004).
O valor estabelecido pela ANP (2014), para o índice de acidez para óleo
vegetal deve ser menor que 0,5%, para a produção de biodiesel pela nota de
transesterificação.
O índice de acidez influência na produção de biodiesel. Um alto índice de
acidez mostra que existem ácidos graxos livres superior ao desejado. Isso pode ser

proveniente da hidrólise dos glicerídeos, mostrando que há quebra na cadeia
lipídica, a qual há liberação dos seus principais componentes, no qual reduz o
rendimento na produção de biodiesel (VIEIRA; et al., 2017).
Garcia, et al. (2015), realizaram experimento com a microalga Scenedesmus
accuminatus, e obtiveram um índice de acidez de 7,84 mg KOH/g, o processo de
extração foi realizado através de sucessivas lavagens com hexano, e a preparação
da amostra filtrada em carvão ativado de osso animal granulado.
Segundo Sharma et al. (2008), a transesterificação de amostras com índice
de acidez maior a 2,0 mg KOH/g deve utilizar catalisadores ácidos, evitando, assim,
pré-tratamentos para a diminuição da acidez.
3.5.2. Índice de Saponificação
Esse índice indica o valor de ácidos graxos de alto e baixo peso molecular
presente na amostra. É determinado pela quantidade de base necessária para
saponificar uma quantidade determinada de óleo, ou seja, a quantidade em mg de
álcali (hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio) gasto para saponificar 1g de óleo
(TOFANINI, 2004).
A reação de saponificação está representada na Figura 2:

Figura 2: Reação de Saponificação.
Fonte: TOFANINI, (2004) (editada)

De acordo com Chen et al. (2018), o índice de saponificação mostra o
tamanho da cadeia de triglicerídeos, quanto maior a cadeia menor o índice de
saponificação.
Fazendo uma comparação da matéria prima em relação a suas propriedades,
é possível observar a semelhança das características do óleo de microalga com os
óleos de semente de plantas e gordura animal (CHEN, et al., 2018), conforme a
Tabela 2.

Tabela 4: Propriedades das Matérias da Produção de Biodiesel. Fonte: Chen, et al. (adaptado)
Matéria
Prima
Nível de
Saturação %
Ácido Graxo
Livres %
IS.
(mgKOH/g)
Óleo de Soja 15,34 0,07 195,3
Óleo de
Girassol
9,34 0,04 193,14
Gorduras de
Aves
29,69 1,7 188,08
Óleo de
Microalgas
12 -21 0,45-1,75 160,6 - 185,82
O índice de saponificação estabelecido pela ANVISA (1999) para óleos
vegetais deve estar na faixa de 177 a 195 mg KOH/g. Valores fora dessa faixa
proporciona dificuldades na conversão para biodiesel, pois dificultam a separação
das fases.
3.6. Análise Qualitativa do Óleo
3.6.1. Cromatografia de Camada Fina (TLC)
A cromatografia em camada fina (TLC, thin-layer chromatography) é um
método simples, rápido e acessível de se obter uma resposta rápida quanto à
composição química de uma substância. As placas de TLC podem ser folhas de
vidro, metal ou plástico, revestida por uma fina camada de um adsorvente sólido,
geralmente sílica ou óxido de alumínio. A placa de TLC então é colocada em um
recipiente de vidro contendo eluente (fase móvel) que são os solventes. Esse
solvente (ou mistura de solventes) se desloca ao longo da placa até atingir um
equilíbrio, esse equilíbrio já é definido para cada componente da amostra analisada.
Assim que o eluente chega ao topo da placa, a mesma é removida da câmara de
desenvolvimento, então o solvente é evaporado e os componentes separados são
visualizados (RODRIGUES, 2015).
Segundo Rodrigues (2015), se os compostos obtiverem cor, a visualização
pode ser feita a olho nu, mas geralmente os compostos não são corados, sendo
analisados sob luz UV, pois a placa contém compostos que ficam visível na
presença dessa luz.
Segundo Guihéneuf; Schmid; Stengel, (2015), os lipídios neutros e os polares
são submetidos a TLC, para separação da classe lipídica. Os lipídios neutros são
separados através da utilização de solventes contendo éter de petróleo, éter etílico

e ácido acético. Os lipídios polares são separados com outros tipos de solventes
que são a mistura de clorofórmio, acetona, metanol, ácido acético e água, essa
separação pode ser visualizada pela Figura 3. Os principais lipídios neutros são
ácidos graxos, colesterol, ésteres de colesterol e triacilgliceróis e os principais
lipídios polares são glicerofosfolipídeos, os esfingolipídeos e os glicolipídeos
(BRUM; ARRUDA; REGITANO – d’ ACRE, 2009).

Figura 3: Exemplo de separação de lipídios neutros de microalga Pavlova lutheri usandoTLC
unidimensional. No qual os Diacilgliceróis (DAG), ácidos graxos livres (AGL), monoacilgliceróis (MAG), lipídios
neutros (NL), pigmentos (Pig), lipídios polares (PL), triacilgliceróis (TAG), lipídico total (TL). Fonte: Guihéneuf;
Schmid; Stengel, 2015.

3.7. Biodiesel
O biodiesel é denominado como um mono-alquil éster de ácidos graxos
derivado de fontes renováveis, sendo elas de origem vegetal e animal. A matéria-
prima vegetal se dá pela extração do óleo de alguns vegetais como: soja, mamona,
canola, palma, girassol, pinhão, amendoim, entre outros. A matéria-prima animal é
derivada de gorduras obtidas a partir do sebo bovino, suíno e de aves, podendo ser
produzido também a partir dos óleos utilizados em frituras (SEBRAE, 2007).
A Lei Nº 11.097 de 13 de janeiro de 2005, define o biodiesel da seguinte
maneira:
Biodiesel: biocombustível derivado de biomassa renovável para uso em
motores a combustão interna com ignição por compressão ou, conforme
regulamento, para geração de outro tipo de energia, que possa substituir
parcial ou totalmente combustíveis de origem fóssil. (NR)

O biodiesel é parecido com o óleo diesel mineral em relação suas
características físico-químicas, sendo miscível, em qualquer proporção podendo ser
usado puro ou misturado com o diesel mineral em qualquer quantidade em motores
de combustão (TOFANINI, 2004).
A escolha da matéria prima para a obtenção do biodiesel é de grande
importância, pois agrega grande impacto no custo da produção em escala industrial,
pois o consumo de energia para a conversão é relativamente alto, gastos com
catalizadores e álcool somam mais de 10% para produção em grande escala
(RAMOS, et al., 2017).
Neste contexto, a matéria prima mais utilizada para produção do biodiesel é
o óleo de soja, onde sua produção em nível comercial se dá nas regiões Centro-
Oeste, Sul e Sudeste. No entanto, a relação de rendimento de óleo por área
plantada não é alta e mesmo assim é a oleaginosa mais importante para o
agronegócio. O Brasil é um dos maiores exportadores do mundo, sendo a soja muito
promissora para o programa nacional de biocombustíveis PARENTE, (2003).
Uma problemática na produção de biodiesel a partir do óleo de soja é seu
cultivo, conforme citado anteriormente por (PARENTE, 2003), sendo que a mesma
depende de situações sazonais, impossibilitando a colheita da matéria prima em
determinada época do ano. Em contrapartida, a microalga tem o rendimento de óleo
bem maior se comparado a mesma área cultivada da soja, podendo também ser
convertido em biocombustíveis (RAMOS et at., 2017).
O biodiesel derivado de algas tem sido objeto de pesquisa por diversos
laboratórios e empresas do mundo (SILVA; BACHOLSKY; JERÔNIMO, 2015). Os
biodieseis produzidos através do óleo extraído a partir das microalgas não se
diferem muito em relação aos produzidos da forma tradicional, mas destacam-se
algumas diferenças (GUVEIA, 2008):
 As microalgas produzem alta quantidade de ácido graxo da forma
poliinsaturada, o que acarreta problemas de instabilidade do biodiesel. No entanto,
um fator importante do ácido graxo poliinsaturado em comparação com os ácidos
graxos monoinsaturados, é que o ponto de congelamento do poliinsaturado é menor
do que os monoinsaturados, tornando uma propriedade adequada para regiões
frias, no qual o biodiesel produzido por oleaginosa não apresenta essa propriedade,
tornando-o um biodiesel inadequado para esse tipo de região.

 É praticamente isento de enxofre em sua composição. O biodiesel
provindo das microalgas, aumenta a vida útil dos equipamentos de injeção, pois
diminui o desgaste no sistema de combustível e contém maior propriedade solvente
se comparado com o diesel (MATA et al., 2010);
 Possui massa específica inferior à do diesel em torno de 5 a 8%, mas
compensa em relação à maior eficiência de combustão, melhor desempenho na
capacidade de lubrificação (MIAO; WU; 2005).
Existem também alguns pontos negativos para a produção do biodiesel a
partir do óleo da microalga, entre eles podemos citar: ajuste de uma espécie
acumuladora de óleo em condições externas exposta ao ambiente para uma
produção em larga escala; desenvolvimento de um método de extração no qual
reduz o gasto com energia, uma forma eficiente de colheita da biomassa do meio
de cultivo (ANDRADE; COSTA, 2008).
4. MATERIAIS E MÉTODOS
O presente trabalho foi desenvolvido em parceria com o Laboratório de
Biocombustível da Universidade Federal de Viçosa (UFV), no Departamento de
Engenharia Agrícola no campus da cidade de Viçosa – MG.
4.1. Tipo de Pesquisa
A pesquisa experimental é de natureza qualitativa e quantitativa, pois tem a
finalidade de analisar o óleo de microalgas como alternativa para a produção de
biodiesel.
4.2. Extração do Óleo de Microalgas
O óleo analisado foi extraído da microalga Scenedesmus sp. pela equipe do
Laboratório de Biocombustíveis da UFV, através do método de extração por
solventes sendo eles Acetato de Etila e Hexano em proporção de (1:1) em volume.
Para a realização dos experimentos, as amostras do óleo cru de microalgas
passaram por um processo de purificação por fracionamento através de hidratação
por solventes, para a preparação das amostras adicionou-se Hexano e Acetato de
Etila em proporções 1:1 (v/v) e posteriormente adicionou-se Água, Acetona e Etanol
em porcentagens experimentais de 90%, 70% e 50%. Para comparação dos
resultados obtidos, utilizou-se o óleo de soja comercial como referência, o qual é
considerado viável para a produção do biodiesel.

4.3. Análise Quantitativa e Qualitativa
Os índices de acidez e saponificação, foram realizados e adaptados de
acordo com a metodologia do Instituto Adolfo Lutz (2008). As análises foram
realizadas em triplicatas e foi utilizado o óleo de soja comercial como material de
referência, por ser um óleo utilizado para a produção de biodiesel. A TLC foi
realizada e adaptada de acordo com a metodologia do Guihéneuf; Schmid; Stengel,
(2015).
4.3.1. Índice de Acidez
Para medir o índice de acidez presente nas amostras fracionadas, pesou-se
uma massa que varia de 0,1 a 0,3 g do óleo da microalga em um Erlenmeyer de
125 mL, preparou-se uma solução alcoólica contendo álcool etílico e éter etílico em
uma proporção de 2:1 correspondente ao volume. Em seguida, adicionou-se 25 mL
da solução alcóolica em um recipiente com 5 gostas de fenolftaleína. Após adicionar
a solução alcoólica foi realizado a titulação da solução de hidróxido de sódio (NaOH)
com molaridade de 0,1(INSTITUTO ADOLFO LUTZ, 2008). O índice de acidez foi
obtido a partir da equação 1:

𝑰𝑨 =
(𝑩−𝑨)𝒙 𝒇𝒙 𝟓,𝟔𝟏
𝒎ó𝒍𝒆𝒐
(1)

Em que:
f: é o fator de correção,
B: volume gasto mL na titulação do branco,
A: volume gasto mL de KOH na titulação do óleo.
m: massa do óleo pesado para realização da titulação.
4.3.2. Índice de Saponificação
Foram pesados entre 0,1 a 0,3g de óleo fracionado de microalgas em um
Erlenmeyer de 50mL e depois transferido para balão volumétrico onde foi
acrescentado 25mL de solução de KOH. O balão volumétrico contendo o material
foi colocado em uma chapa de aquecimento com agitador magnético da marca IKA
C-MAG modelo HS7, conectado ao um banho termostatizado da marca TECNAL e
modelo TE-2005, em um tempo padronizado de 2 horas. Após esse período de
tempo, foi realizada a titulação com ácido clorídrico (HCl) à 1 molar, sendo usadas
Equação 1: Índice de Acidez:

5 gotas de fenolftaleína como indicador (INSTITUTO ADOLFO LUTZ, 2008). O
índice de saponificação foi obtido a partir da equação 2

IS =
𝟓𝟔,𝟏 𝒙 (𝑩−𝑨)
𝒎 ó𝒍𝒆𝒐
(2)

Em que:
B: volume de HCL a 1 M gasto na titulação do branco
A: volume de HCL a 1 M gasto na titulação da amostra
m: massa do óleo em gramas
4.3.3. Cromatografia de Camada Fina (TLC)
As análisespor cromatografia em camada fina (TLC) das frações lipídicas
extraídas das biomassas, foram realizadas com a utilização de placas de alumínio
ALUGRAM Xtra SIL G de 20x20cm, mas a corrida foi realizada em placa 10x10cm
de dimensões da marca MACHEREY – NAGEL. Para determinar os fatores de
retenção (Rfs), foram utilizados como padrão de Trioleína, Oleico e Monoleína. O
mesmo foi colocado sobre as placas cromatográficas, juntamente com as amostras
lipídicas da microalga e posteriormente, a placa foi colocada em uma cuba de vidro
alta vertical (66x 60x100mm) com tampa, já saturada pelo o eluente hexano/éter
etílico/ácido acético (70:30:1), por 30 minutos. Após o um período de 1 hora, as
placas cromatográficas foram expostas a um vapor de iodo para revelar os
componentes restantes (GUIHÉNEUF; SCHMID; STENGEL, 2015).
5. RESULTADOS E DISCUSSÕES
5.1. Análise Quantitativa e Qualitativa do Óleo
5.1.1. Índice de Acidez
Forma realizados os índices de acidez para todas as amostras fracionada
através de hidratação por solventes, e analisou qual mais se aproximou do índice
de acidez do óleo de soja de acordo com ANP (2014) que estabelece que índice de
acidez para óleo vegetal para produção de biodiesel seja menor do que 0,5%
mgKOH/g de óleo, viabilizando sua utilização na produção do biodiesel. Os
resultados de cada análise estão apresentados nas tabelas 3 a 5, sendo os
resultados do índice de acidez uma média das triplicatas realizadas em cada
amostragem.

Equação 2: Índice de Saponificação.

Tabela 5: Parâmetro do Titulante do Índice de Acidez.
.

Os parâmetros da solução titulante são necessários para a realização dos
cálculos, conforme a equação 1.
Tabela 6: Índice de Acidez do Óleo de Soja.

Pode-se concluir que o índice de acidez obtido está de acordo com os
parâmetros exigidos que é de acidez inferior a 0,5%. Esse resultado indica que o
óleo de soja possui padrões para a produção de biodiesel e a eficiência do método
adaptado de acordo com o Instituo Adolfo Lutz (2008).
Tabela 7: Índice de Acidez para fracionamento de óleo de microalgas

Com base nos resultados apresentados, pode-se aferir que o óleo que teve
o índice de acidez mais baixo foi com o tratamento etanol 90%, sendo esse valor
ainda superior ao encontrado por Garcia et al. (2015) e o exigido pela ANP (2014),
no qual o índice de acidez deve ser menor do que 0,5%, para produção do biodiesel.
O alto índice de acidez encontrado no presente trabalho, pode ter sofrido
interferência no modo de preparo da amostra, por se ter utilizado mais de um
solvente no processo de fracionamento, o que pode ter ocasionado hidrólise dos
glicerídeos, fazendo com que existissem elevado teor de ácidos graxos livres. Outro
fator que pode ter ocasionado esse alto índice é que por se tratar de um óleo de
caráter ácido e cheio de pigmentos o tipo de fracionamento não foi tão eficiente.
Ressalta-se que a metodologia aplicada para determinar o índice de acidez se
Parâmetros da Solução Titulante
Concentração (mol/L) 0,01
Fator de correção (f) 1,119
Massa Molar 56,1
ÍNDICE DE ACIDEZ
Amostra Valor médio (mg KOH)
Óleo de Soja 0,192
ÍNDICE DE ACIDEZ
Tratamento Valor médio (mg KOH)
Água 110,8
Etanol 90% 94,8
Etanol 70% 412,6
Etanol 50% 115,0
Acetona 90% 129,3
Acetona 70% 138,4
Acetona 50% 119,6

mostrou eficiente, pois a mesma funcionou para o óleo de soja. O resultado
apresentado por Garcia et al. (2015), apresentou um valor mais baixo do que o do
presente trabalho, mas ainda superior ao exigido pela ANP (2014), mostrando a
complexidade do óleo de microalga. O que pode ter ocasionado o menor índice de
acidez no trabalho do Garcia et al. (2015), foi a metodologia usada na extração, pois
o mesmo utilizou menor quantidade de solvente, usou um sistema de purificação
diferenciado do utilizado pela equipe do Laboratório de Biocombustíveis UFV e
também o tipo de microalga e seu cultivo.
De acordo com Sharma et al. (2008), dada as características do óleo de
microalgas encontradas, deve-se utilizar uma transesterificação com catalisadores
ácidos, para evitar os pré-tratamentos e, consequentemente, converter os ácidos
graxos livres a ésteres.
5.1.2. Índice de Saponificação
Os resultados do índice de saponificação do óleo da microalga foram
comparados com o índice de saponificação do óleo de soja comercial. Os resultados
da análise estão apresentados nas Tabelas de 6 a 8, sendo que os resultados são
as médias das triplicatas realizadas.
Tabela 8: Parâmetros do Titulante do Índice de Saponificação.

Os parâmetros da solução titulante são necessários para a realização dos
cálculos conforme a equação 2.
Tabela 9: Índice de Saponificação Óleo de Soja.

Foi realizado o índice de saponificação do óleo de soja comercial, para
analisar se o mesmo se enquadra nos parâmetros exigidos pela ANVISA (1999) que
estabelece que para a produção de biodiesel que o índice de saponificação do óleo
vegetal deve estar entre os valores de 177 a 195 mgKOH/ g. Conclui-se que o valor
do índice de saponificação do óleo de soja está dentro dos padrões exigidos pela
Parâmetros da Solução Titulante
Concentração (mol/L) 1
Fator de correção (f) 1,003
Massa Molar 56,1
ÍNDICE DE SAPONIFICAÇÃO
Amostra Valor médio (mg KOH)
Óleo de Soja 186,110

ANVISA, e indica que o método utilizado foi eficiente para a análise de
saponificação.
Tabela 10: Índice de Saponificação para as condições de fracionamento do óleo de Microalgas

Chen, et al. (2015), encontrou um índice de saponificação para microalga
variando de 160,6 - 185,82 mg KOH/g, e o valor encontrado no experimento
realizado no presente trabalho mostra um índice de saponificação superior aos do
óleo de soja estabelecido pela ANVISA (1999), e o encontrado por Chen, et al.
(2015) para óleo de microalga conforme a Tabela 2.
O alto índice de saponificação do óleo de microalga varia de acordo com a
espécie de microalga, situação de cultivo, métodos de extração e purificação.
Pela análise dos resultados, pode-se perceber que o que mais se aproximou
do índice de saponificação foi o óleo tratado a Etanol 50%, mas mesmo assim
mantém uma diferença bem alta em relação ao índice de saponificação do óleo de
soja.
Todos as amostras mostram que a cadeia lipídica do óleo sofreu várias
hidrólises resultando em ácidos graxo com o menor peso molecular, dificultando a
conversão do biodiesel (CHEN, et al., 2015). Essa hidrólise que resultou no alto
índice de saponificação.
5.1.3. Cromatografia em Camada Fina (TLC)
As amostras dos fracionamentos do óleo de microalgas, foram comparados
com o padrão colocado na placa cromatográfica, pois no padrão existe a presença
de triglicerídeos (Trioleína), ácido graxos livres (ácido oleico) e lipídeos polares
(Manoleína), que são facilmente identificados pela afinidade com o eluente. Através
da realização da TLC, verificou-se e caracterizou-se os principais lipídios presente
no óleo de microalga, através da distância percorrida pelo eluente na placa, sendo
esta distância de acordo com a afinidade e polaridade dos solventes (eluentes)
utilizados.
ÍNDICE DE SAPONIFICAÇÃO
Tratamento Valor médio (mg KOH/g)
Água 90% 747,1
Etanol 90% 9564,0
Etanol 70% 357,1
Etanol 50% 236,5
Acetona 90% 4596,9
Acetona 70% 841,4
Acetona 50% 439,1

De acordo com Guihéneuf; Schmid; Stengel, (2015), o tipo de eluente (éter
de petróleo, éter etílico e ácido acético) colocado na cuba identificaria os lipídios
neutros.

Figura 4: TLC do Óleo de Microalgas em diferentes amostras, no qual: 1: Padrão, 2: Água, 3:
Acetona 50%, 4: Acetona 70%, 5: Acetona 90%, 6: Etanol 50%, 7: Etanol 70%, 8: Etanol 90%.

Por meio do resultado da cromatografia e do padrão colocado para
identificaçãodos lipídeos é possível verificar que o óleo de microalgas contém todos
os lipídios presentes em relação a amostra padrão utilizada na placa
cromatográfica. Os outros compostos identificados na placa, são uma suposição de
lipídio sugerido pela Figura 3, a cromatografia realizada por Guihéneuf; Schmid;
Stengel, (2015), no qual identificou Éster de ácido graxo na faixa em questão.

6. CONCLUSÃO
Conclui-se que:
 O melhor valor encontrado para o índice de acidez do óleo extraído foi
o tratado com etanol a 90% com um valor de 94,8 mgKOH/g, sendo um valor
elevado se comparado com o óleo de soja analisado que obteve um I.A. de 0,192
mgKOH/g e o exigido pela ANP (2014) que estabelece um valor menor do que 0,5%
de mgKOH/g. Esse resultado pode ser proveniente da elevada presença de ácidos
graxos livres ou devido ao fato de ser um óleo de caráter ácido e contendo alto teor
de pigmento como clorofilas que pode elevar o índice de acidez.
 O óleo tratado com etanol 50% teve o melhor valor 236,5 mgKOH/g,
sendo esse um valor superior do que foi encontrado no óleo de soja 186,11
mgKOh/g e do padrão da ANVISA (1999) que varia de 177 a 195 mgKOH/g. Esse
resultado sugere que houve hidrólise na cadeia lipídica fazendo com que exista
muitos ácidos graxos de menor peso molecular.
 Não houve relação entre os I.A e I.S do melhor fracionamento das
amostras, embora fosse esperado que os dois índices fossem melhores na mesma
amostragem.
 Utilizando a técnica de TLC foi possível comprovar que o óleo de
microalga é uma alternativa para a obtenção do biodiesel, pois existe em sua
composição os ácidos graxos essenciais para a produção do mesmo. Mesmo
apresentando índices de acidez e saponificação elevado.
Para trabalhos futuros, recomenda-se o estudo de uma melhor forma de
purificação das amostras dos óleos de microalgas utilizando menos variedades de
solventes.

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA. Resolução RDC nº 482,
de 23 de setembro de 1999. D.O.U. – Diário oficial da União; Poder Executivo, de
13 de outubro de 1999.
AGÊNCIA NACIONAL DO PETRÓLEO, GÁS NATURAL E
BIOCOMBUSTÍVEIS. Análise de conjuntura de biocombustíveis. Brasília, 2014.
Disponível em: <http://www.anp.gov.br>. Acesso em: 03 fev. 2019.

BARBOSA, Banny Silva et al. Aproveitamento do Óleo das Amêndoas de
Tucumã do Amazonas na Produção de Biodiesel. Acta Amaz., Manaus , v.
39, n. 2, p. 371-376, 2009 . Disponível em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0044-
59672009000200015&lng=en&nrm=iso>. Acessado em: 21 maio 2019.
BAUMGARDT, F. J. L. Extração de Óleo de Microalga com Fluido
Pressurizado e Avaliação de sua Conversão em Monoésteres Graxo. 2013. 97
folhas. Dissertação de Mestrado, Subárea de Química Orgânica. Universidade
Federal do Paraná. Curitiba.
BLIG, E. G. DYER, W. J. A Rapid Method of Total Lipid Extraction and
Purification. Canadian Journal of Biochemistrry and Physiology. Canadá, Agust,
1959. Disponível em :< https://www.nrcresearchpress.com/doi/10.1139/o59-
099#.XLo0jzBKjIU>. Acessado em: 19 de abril de 2019.
BRANCO, K. B. Z. F.; TREVISAN, E.; REIS, N. V. dos; ARROYO, P. A.;
"PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DO ÓLEO DA MICROALGA Scenedesmus
accuminatus VISANDO À PRODUÇÃO DE BIODIESEL", p. 936-943. In: Anais do
XX Congresso Brasileiro de Engenharia Química - COBEQ 2014. Blucher
Chemical Engineering Proceedings, v.1, n.2]. São Paulo: Blucher, 2015.
BRASIL, B. S. A. F. GARCIA, L. C. Alternativa Promissora para Indústria.
Microalgas. Edição 10. Brasília – DF: Embrapa Agroenergia, 2016. 60 páginas:
Microalgas, p. 6-11. Disponível em:
<https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/153095/1/Agroenergia-
Revista-microalgas-ed10-red.pdf>. Acessado em: 05 de abril 2019.
BRASIL. Congresso Nacional. Lei do Biodiesel. Lei Nº 11.097 de 13 de
janeiro de 2005. Dispões Sobre a Introdução do Biodiesel na Matriz Energética
Brasileira. Diário Oficial da União, Brasília – DF, janeiro de 2005. Disponível em:

< https://www2.camara.leg.br/legin/fed/lei/2005/lei-11097-13-janeiro-2005-535383-
norma-pl.html>. Acessado em: 06 de abril de 2019.
BRUM, A. A. S. ARRUDA, L. F. REGITANDO D’ ACRE, M. A. B. Método de
Extração e Qualidade da Fração Lipídica de Matérias-Primas de Origem
Vegetal e Animal, Piracicaba – São Paulo, v.32, n.4, 2009. Disponível em: <
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-
40422009000400005>. Acessado em 19 de abril de 2019.
CARDOSO, A. S. VIEIRA, G. E. G. MARQUES, A. K. O Uso de Microalgas
para Obtenção de Biocombustível. Revista Brasileira de Biociências, Porto
Alegre, v.9, n.4, out/dez., 2011. Disponível em: <
http://www.ufrgs.br/seerbio/ojs/index.php/rbb/article/view/1797>. Acessado em: 01
de março de 2019.
CARDOSO, W. A. et al. Comparação Entre o Método de Extração de Óleo
de Microalgas, Criciúma – SC, v.12, n.1, 2014. Disponível em:
<http://periodicos.unesc.net/index.php/iniciacaocientifica/article/download/1640/15
51>.Acessado em 26 de abril de 2019.
CHEM, J. et al. The potential of microalgae in biodiesel production.
Lincoln, Nebraska – USA. Department of Civil Engeering, University of Nebraska,
2018. Disponível em:< https://www.sciencedirect.com>. Acessado em: 17 de
outubro de 2019.
CHIEPPE JÚNIOR, J. B. Tecnologia e Fabricação do Álcool. Inhumas –
GO, 2012. Instituto Federal de Educação, Ciências e Tecnologia. Disponível em:
<http://redeetec.mec.gov.br/images/stories/pdf/eixo_prd_industr/tec_acucar_alcool
/161012_tec_fabric_alc.pdf>. Acessado em: 01 de março de 2019.
D’OCA, M. G. M. et al. Production of FAMEs from Several Microalgal Lipidic
Extracts and Direct Transesterification of the Chlorella Pyrenoidosa. Elsevier
Science Direct, Rio Grande do Sul, abril de 2011. Disponível em:< https://sci-
hub.tw/10.1016/j.biombioe.2010.12.047>. Acessado em: 28 de abril de 2019.
DEMIRBAS. A. Biodiesel fuels from vegetable oils via catalytic and non-
catalytic supercritical alcohol transesterifications and other methods: a survey.
Energy Conversion and Management. v. 44, p. 2093–2109, 2003.
DIÁZ, A. M. C. Produção de Óleo Microbiano por Levedura em Reator
Tipo Coluna de Bolhas. 2015. 55 folhas. Monografia (Bacharelado em Engenharia

Química). Escola de Engenharia de Lorena, Universidade de São Paulo. Lorena –
SP.
FARIAS, A.C.M. et al. Os Combustíveis Verdes do Brasil – Avaliação da
lubricidade do Biodiesel B5 e óleos de mamona e coco. Holos, Natal, v.3, ano 27,
2011.
FOLCH, J. et al. A Simple Method for the Isolation and Purification of Total
Lipides from Animal Tissues. Journal of Biological Chemistry. Boston –
Massachusetts, Agust 23, 1956. Disponível em: <
http://www.jbc.org/content/226/1/497.long>. Acessado em: 19 de abril de 2019.
FRANCO, A. L. C. et al. Avanços e Desafios. Biodiesel de Microalgas,
Brasília – DF, v.36, n.3, fev., 2012. Disponível em:
<http://submission.quimicanova.sbq.org.br/qn/qnol/2013/vol36n3/14-
RV12439.pdf>. Acessado em: 05 de abril de 2019.
FUKUDA, H. et al. Biodiesel Fuel Production by Transesterification of Oils.
Journal of Bioscience and Bioengineering, Japan, 7 due august 2001. Disponível
em:< https://sci-hub.tw/10.1016/S1389-1723(01)80288-7>. Acessado em: 28 de
abril de 2019.
GARCIA, C. M. Transesterificação de Óleos Vegetais. 2006. 136 folhas.
Dissertação de Mestrado – Instituto de Química, Universidade Federal de
Campinas. Campinas.
GARCIA, P. M.; CHAALA, A.; PANDEL, H.; KRETSCHMER, D.; ROY,C.
Characterization of bio-oils in chemical families, Biomass and Bioenergy. v. 31, n.
4, p. 222-242, 2007.

GEANKOPLIS, C. J. Transport processes and separations process
principles. 4th ed. New Jersey: Prentice Hall, 2003.
GERIS, R. et al. Biodiesel de soja – reação de transesterificação para aulaspráticas de química orgânica. Quim. Nova, Bahia, v. 30, n.5, maio 2017, p. 1369-
1373. Disponível em: <http://www.scielo.br/>. Acesso em: 21 de maio de 2019.
GOMES, M. G. Purificação de Biodiesel Utilizando Adsorventes
Naturais. 2015. 103 folhas. Dissertação de Mestrado, área de biocombustível.
Universidade Federal do Vale do Jequitinhonha e Mucuri. Uberlândia – MG.
GOUVEIA, L. OLIVEIRA, A. C. Microalgae as a Raw Material for Biofuels
Production. Centro de Informação de Biotecnologia, 2008. Disponível em:<

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18982369>. Acessado em: 10 de abril de
2019.
GUIHÉNEUF, F.; SCHMID, M.; STENGEL, D. D. Lipids and Fatty Acids in
Algae: Extraction, Fractionation Into Lipid Classes, and Analysis by Gas
Chromatography Coupled with Flame Ionization Detector (GC-FID). Methods in
Molecular Biology, v.1308, 2015.

HADI, S. S. I. I. A. Identificação Molecular e Criopreservação de
Microalgas Verdes (Chlorophyta) Isoladas de Águas Continentais Brasileiras.
2015. 84 folhas. Dissertação (Pós-Graduação em Biotecnologia). Campus
Universitário de Gurupi, Universidade Federal do Tocantins. Brasília – DF.
HALIM, R. DANQUAH, M. K.; WEBLEY, Paul. Extraction of oil from
microalgae for biodiesel production: A review. Biotechnology Advances, v. 30, n.
3, p.709-732, 2012. Elsevier BV.
http://dx.doi.org/10.1016/j.biotechadv.2012.01.001.

INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Métodos Químicos e Físicos para Análise de
Alimentos: Óleos e Gorduras. 5ª ed., Ed. São Paulo: São Paulo, 2008.

KATES, M. Techniques of Lipidology: Isolation, Analysis and Identification of
Lipids. Londres: Elsevier Applied Science, 1972. Cap.3, p.347-353: Lipid
Extraction Procedures.
LEE, B. D. et al. Calcium Carbonate Formation Synechococcus sp. Strain
PCC 8806 and Synechococcus sp. Strain PCC 8807. Bioresourse Technology,
n.97. p.2427-2434, 2008.
LEE, J. Y. et al. Comparison of Several Methods for Effective Lipid Extraction
from Microalgae. Bioresource Technology, v.101, n.1, SUPPL, p.242-247, 2010.
Elsevier LTD.
LOBO, I. P.; FERREIRA, S. L. C.; CRUZ, R. S. da. Biodiesel: parâmetros de
qualidade e métodos analíticos. Quím. Nova, São Paulo, v. 32, n. 6, p. 1596-1608,
2009. Disponível em: < http://www.scielo.br/>. Acesso em: 04 de maio de 2019.
MA, F.; HANNA, M.A. Biodiesel production: a review. Bioresource
Technology. v. 70, p.1-15, 1999.

MANFIO, G. P. Microrganismo. Campinas – SP. 2003. Disponível em:
<http://www.mma.gov.br/estruturas/chm/_arquivos/Aval_Conhec_Cap2.pdf>.
Acessado em: 08 de abril de 2019.
MATA, T. M. MARTINS, A. A. CAETANO, N.S. Microalgae for Biodiesel
Production and Other Applications: A Review. Renewable and Sustainable
Energy Reviews, Portugal, v.14, n.1, 2010. Disponível em:<
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1364032109001646>. Acessado
em: 19 de abril de 2019,
MERCER, P. ARMENTA, R. E. Developments in Oil Extraction from
Microalgae. Euroupen Journal of Lipdi Science and Technology, Europa, 2011.
Disponível em: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.1002/ejlt.201000455>.
Acessado em: 19 de abril de 2019.
MIAO, X. WU, Q. Biodiesel Production from Heterotrophic Microalgal Oil.
Bioresource Technology, China, v,97, n.6, june, 2005. Disponível em:<
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960852405002191>. Acessado
em: 19 de abril de 2019.
MICHELLON, E. SANTOS, A. A. L. RODRIGUES, J. R. A. Breve descrição
do Proálcool e Perspectiva Futuras para o Etanol Produzido no Brasil. Sober,
Maringá - PR, p. 1-16. Jul., 2008. Apresentação Oral no XLVI Congresso da
Sociedade Brasileira de Economia Administração e Sociologia Rural.
Disponível em: <http://www.sober.org.br/palestra/9/574.pdf>. Acessado em: 06 de
abril de 2019.
MONÇÃO, M. O Futuro Verde: Microalgas e Biotecnologia. Instituto de
Microbiologia Paulo Góes, 2015. Disponível em:
<http://www.microbiologia.ufrj.br/portal/index.php/pt/destaques/novidades-sobre-a-
micro/364-o-futuro-verde-microalgas-e-biotecnologia>. Acessado em: 05 de abril
2019.
MORETTO, E.; FETT, R. Tecnologia de óleos e gorduras vegetais na
indústria de alimentos. São Paulo: Varela, 1998.
MUTANDA, T. et al. “Bioprospecting for Huper-Lipid Producing Microalgal
Strains for Sustainable Biofuel Production”. Bioresoursce Technology, p.57-70.

NETO et al. Caracterização química e físico-química do óleo de coco
extra virgem (Cocos nucifera L.). Inn: ENCONTRO NORTE-NORDESTE DE
QUÍMICA, 5º, 2013. Rio Grande do Norte. Resumos...Rio Grande do Norte. 2013.
9p.
NETO et al. Produção de biocombustível alternativo ao óleo diesel através
da transesterificação de óleo de soja usado em frituras. Quím. Nova, Paraná, v. 23,
n.4, 2000, p. 531-537. Disponível em:< http://www.scielo.br/>. Acesso em: 04 de
maio de 2019.
OCHSENREITHER et.al. Estratégias de Produção e Aplicações de Óleos
de Células Únicas Microbiana. Alemanha, v.7, out, 2016. Disponível em:
<https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5050229/>. Acessado em: 08 de
abril de 2019.
OILGAE. O Recurso Global de Suporte a Informação para a Industria de
Produtos de Valor Agregado a Algas. Disponível em: <http://www.oilgae.com/>.
Acessado em 07 de abril de 2019.
OLIVEIRA et al. Obtenção de biodiesel por transesterificação em dois
estágios e sua caracterização por cromatografia gasosa: óleos e gorduras em
laboratório de Química Orgânica. Quim. Nova, Rio Grande do Sul, v.36, n.5, mar.
2013, p. 734-737. Disponível em: <http://www.scielo.br/>. Acesso em: 21 de maio
de 2019
OLIVEIRA, K. P. ARAÚJO, A. L. C. COSTA, M. Extração e Caracterização
do Óleo de Microalga de Lagoas de Estabilização. Revista Gestão e
Sustentabilidade Ambiental, Florianópolis –RS, v.7, n.3, 2017, p.320-349.
PARENTE, E. J. S. Uma Aventura Tecnológica Num País Engraçado.
Unigráfica, Fortaleza, 2003.
PELCZAR JUNIOR et al. Microbiologia. Conceitos e Aplicações. Edição 2ª.
São Paulo: Pearson, 2012.
PEREIRA et al. Biodiesel Renovável Derivados de Microalgas: Avanços e
Perspectivas Tecnológicas. São Paulo - SP. v.35, n.10, 2012. Disponível em: <
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-
40422012001000022>. Acessado em: 08 de abril de 2019.
PETKOW, G.; GARCIA, G. Which are fatty acids of the green alga Chlorella?
Biochemical Systematics and Ecology. v. 35, n. 5, p. 281-285, 2007.

PETOBRAS. Produtos e Serviços: Etanol. 1953. Disponível em:
<http://www.petrobras.com.br/pt/produtos-e-
servicos/produtos/automotivos/etanol/>. Acessado em: 01 de março de 2019.
RAMOS, L. P. et al. Biodiesel: Matérias-Primas, Tecnologias de Produção e
Propriedades Combustíveis. Revista Virtual de Química, Curitiba – PR, v.9, n. 1,
dez., 2016. Disponível em: < http://rvq.sbq.org.br/imagebank/pdf/v9n1a20.pdf>.
Acessado em: 01 de março de 2019.
RAMOS, L. P. SILVA, F. R. MANGRICH, A. S. CORDEIRO, C. S. Tecnologia
de Produção de Biodiesel. Revista Virtual de Química, Curitiba – PR, v.3, n. 4,
out., 2011. Disponível em: <
https://sistemas.eel.usp.br/docentes/arquivos/1285870/52/Tecnologiasdeproducao
debiodiesel.pdf>. Acessado em: 01 de março de 2019.
REGITANO – d’ ARCE, M. A. B. Extração do Óleo de Girassol com Etanol:
Cinética, Ácido Clorogênico, Fração Insaponificável. São Paulo, 1991. p.154.
Dissertação (Mestrado) Universidade de São Paulo.
ROCHA, R.P., Machado, M., Vaz, M.G.M.V., Vinson, C.C., Leite, M., Richard,
R., Mendes, L.B.B., Araujo, W.L., Caldana, C., Martins, M.A., Williams, T.C.R.,
Nunes-Nesi, A., 2017. Exploring the metabolic and physiological diversity of
native microalgal strains (Chlorophyta) isolated from tropical freshwater
reservoirs. Algal Res. 28, 139–150.
RODRIGUES FILHO, M.G Cardanol e Eugenol Modificados – Uso Como
Antioxidantes no Controle do Processo Oxidativo do Biodiesel Etílico de
Algodão. 2010 (Tese de Doutorado) Programa de Pós-graduação em Química,Universidade Federal de Paraíba. João Pessoa.

RODRIGUES, L. et al. Determinação do Ponto de Fulgor de Biodiesel
Derivado do Óleo de Palmiste (Elaeis guineenses) e Macaúba (Acrocomia
aculeata) e seus Destilados. Meio Ambiente, Poços de Águas Termais e Minerais.
Poços de Caldas – MG, 25 – 27 de set. 2017. Disponível em:<
http://www.meioambientepocos.com.br>. Acessado em: 04 de maio de 2019.
ROSENBERG J.; OYLER G.; WILKINSON L.; BETENBAUGH M. (2008). A
green light for engineered algae: redirecting metabolism to fuel a biotechnology
revolution. Biotechnology, v. 19, p. 430-436.

SECRETARIA DE AGRICULTURA FAMILIAR E COPERATIVISMO.
Programa Nacional de Produção e Uso do Biodiesel. Inclusão Social e
Desenvolvimento territorial. 2004. Disponível em:
<http://www.mda.gov.br/sitemda/sites/sitemda/files/user_arquivos_64/Biodiesel_Bo
ok_final_Low_Completo.pdf>. Acessado em 07 de abril de 2019.
SERVIÇO BRASILEIRO DE APOIO ÀS MICRO E PEQUENAS EMPRESAS
(SEBRAE). Biodiesel. 2007. Disponível em: <
https://www.agencia.cnptia.embrapa.br/Repositorio/NT00035116_000gihb7tn102w
x5ok05vadr1szzvy3n.pdf>. Acessado em: 06 de abril de 2019.
SHAHIDI, F. Quality Assurance of Fats and Oils In: SHAHIDI, F (Org.) Bailey’s
Industrial Oil & Fat Products. 6ª ed. v.1. John Wiley & Son. New York p.565-576,
2005.
SHARMA, Y. C., SINGH, B., UPADHYAY, S. N. Advancements in
development and characterization of biodiesel: A review. Fuel, 2008, v. 87, n. 12, p.
2355-2373.
SILVA, G. S. Extração do Óleo de Microalgas para a Produção de
Biodiesel. 2013. 101 folhas. Dissertação de Mestrado setor de Tecnologia de
Engenharia Química. Universidade Federal do Paraná. Curitiba.
SOUTO, A. R. et al. Microalgas de Águas Continentais. Potencialidade e
Desafio do Cultivo. Londrina – PR. Iapar, 2014.
TANG, D.; HAN, W.; LI, P.; MIAO, X.; ZHONG, J. CO2 Fixation and fatty acid
composition of Scenedesmus obliquus and Chorella pyrenoidosa in response to
different CO2 levels. Bioresource Technology, v. 102, p. 3071-3076. 2012.
VIDAL JUNIOR, E. A. Obtenção de Óleo Extraído da Microalga Chlorella
sp. 2014. 65 folhas. Monografia (Bacharelado em Engenharia Química). Escola de
Engenharia de Lorena, Universidade de São Paulo. Lorena – SP.
VIÊGAS, C. V. Extração e Caracterização dos Lipídeos da Microalga
Chlorella Pyrenoidosa Visando à Produção de Éxteres Graxos. 2010. 90 folhas.
Dissertação de Mestre em Química Tecnológica e Ambiental. Universidade Federal
do Rio Grande. Rio Grande- RS.
VIEIRA, B. B. Indicadores de rompimento mecânico de células visando
a extração de biocompostos de Scenedesmus obliquus. 2019. 169 f.
Dissertação (Mestrado) - Programa de Pós-graduação em Engenharia Química,
Departamento de Química, Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2019.

XIN, L.; YING, H.H.; KE, G.; XUE, S.Y.. Effects of different nitrogen and
phosphorus concentrations on the growth, nutrient uptake, and lipid accumulation of
a freshwater microalga Scenedesmus sp. Bioresource Technology, v. 101, p.
5494–5500. 2010.
XU, L. et al. Microalgal bioreactors. Challenges and Opportunities, Beijin
- China, v.9, n. 3, mês. May, 2009. Disponível em:
<https://onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.1002/elsc.200800111>. Acessado em:
01 de março de 2019.