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Disciplina: Relações Microrganismos e Hospedeiros 
 
BACTERIOSCOPIA 
Na aula passada começamos a discutir alguns pontos relacionados a 
bacterioscopia. Lembram? Definimos a bacterioscopia como a microscopia do 
material biológico com intuito de identificar bactérias ali presentes. Pois bem, 
bactérias em amostras biológicas quando analisadas no microscópio não 
apresentam nenhum padrão de cor que permita identificá-las. Como podemos 
otimizar então as análises bacterioscópicas com intuito de agilizar a emissão de 
resultados no setor de microbiologia? 
O objetivo desta aula é justamente apresentar a técnica mais utilizada no 
laboratório de microbiologia e que facilita a visualização das bactérias nas mais 
distintas amostras como sague, urina, escarro, aspirado de ferida e outras mais. 
Como a mais conhecida de todas, temos a técnica de Gram. Porém, existem 
inúmeras outras formas de se corar uma amostra, e, além do Gram, como a 
coloração de Ziehl-Neelsen. Vamos lá? 
 
COLORAÇÃO DE GRAM 
Hans Christian Gram nasceu em 1853 na cidade de 
Copenhague, Dinamarca. Atuava em várias vertentes no 
mundo da ciência, foi professor, médico, bacterioloogista e 
farmacologista. Em 1884, por acidente, enquanto examinava 
o tecido do pulmão de pacientes que haviam morrido em 
decorrência de pneumonia, observou que sendo submetidas 
aos mesmos corantes algumas bactérias se apresentavam 
coloração roxa e outras rosadas. Assim, Hans Christian Gram 
desenvolveu um método de coloração de bactérias que permitia sua separação 
em dois grupos distintos, as Gram positivas (que se coravam em roxo) e as Gram 
negativas (que se coravam em vermelho). 
A partir do advento da microscopia eletrônica e do aperfeiçoamento das 
técnicas de análise bioquímica dos diferentes componentes celulares, foi 
verificado que esta diferença entre as bactérias Gram positivas e Gram negativas 
era, provavelmente, devida às diferenças de composição e estrutura das 
paredes celulares. Em suma, o procedimento de coloração de Gram permite que 
as bactérias retenham a cor com base nas diferenças nas propriedades químicas 
e físicas da parede celular. De fato, o uso dos corantes permite aumentar o 
contraste e evidenciar a estrutura bacteriana. A coloração envolve 4 etapas 
principais: 
 Coloração com violeta de cristal; 
 Precipitação com solução de lugol; 
Figura 1 - Hans Christian Gram 
Fonte: Wikipedia (acesso 14/08/20) 
 
 A descoloração; 
 A contra-coloração. 
A princípio, há diferentes graus de permeabilidade na parede dos 
microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos. As bactérias Gram-positivas 
retêm o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de 
peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam 
uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em 
suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa. Já as bactérias Gram-
negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina que não retém o 
cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor vermelha no 
processo de coloração final. 
A microscopia eletrônica de varredura revelou outras diferenças entre 
estes dois grupos de organismos. As Gram positivas exibiam a superfície mais 
lisa e homogênea, enquanto as Gram negativas apresentavam-se com maior 
complexidade superficial. 
 
 
Figura 2 – Composição dos componentes externos à membrana plasmática de bactérias gram-
negativas e gram-positivas. A bactéria gram-negativa possui como camada mais externa a 
membrana externa, conhecida também como lipopolissacarídeo (LPS), a parede celular é 
formada por uma fina camada de peptideoglicano e logo abaixo se encontra a membrana 
plasmática. A bactéria gram-positiva não possui membrana externa, mas possui uma parede 
celular com muitas camadas de peptideoglicano e logo abaixo a membrana plasmática. 
 
Gram-negativa 
 
Gram-positiva 
 
Membrana 
 externa 
Parede 
celular 
Membrana 
citoplasmá
tica 
Membrana 
Plasmática 
Parede 
Celular Parede 
Celular 
Membrana 
Plasmática 
LPS 
Levando em consideração a prática realizada na aula de hoje, complete a 
figura abaixo com os corantes utilizados na coloração de Gram e os demais 
detalhes como suas funções e tempo de cada etapa. Na sequência explique com 
suas palavras quais características morfológicas permitem que as bactérias 
sejam diferenciadas por esta técnica e em que etapas está diferenciação ocorre. 
 
 
Referências 
OPLUSTIL, C. P.; ZOCCOLI, C. M.; TOBOUTI, N. R.; SINTO, S. I. 
Procedimentos básicos em microbiologia clínica. 3.ed. São Paulo: Sarvier, 2010.