Resumo 3 Imunologia

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Resumo Imunologia
Aula 3
Imunoensaios de aglutinação
Teste utilizado para detectar a presença de Ag ou AC em amostras de fluidos corporais; 
 A formação do complexo (Ag-Ac) permite a visualização de aglutinação do teste;
Um dos componentes (Ag ou Ac) é apresentado na forma insolúvel em suspensão, de forma natural em células, ou adsorvido artificialmente a micropartículas ou células.
  O teste de aglutinação ocorre quando há a formação de agregados suficientemente grande de micropartículas ou células com múltiplos epítopos (ou anticorpos), interligados por pontes moleculares de anticorpos (ou antígenos). Esses agregados facilitam a visualização do imunocomplexo, que se forma em minutos ou algumas horas, a olho nu ou com auxílio de uma lupa.
Assim como nos ensaios de precipitação, a proporção ideal de anticorpo e de antígeno é fator interferente no teste de aglutinação.
A execução da técnica pode ser feita em tubos, lâminas ou em placa de microcavidades, sempre com o envolvimento de diferentes fatores na formação dos agregados, tais como: 
· Classe do anticorpo envolvido;
· Tempo e temperatura; Concentração iônica e pH do meio;
· Padronização adequada de suspensão de micropartículas ou células;
· Concentração ótima do antígeno ou do anticorpo a ser fixado nas micropartículas ou células;
 Vantagens:
· Elevada sensibilidade e Baixo custo; 
· Leitura visual e Facilidade de execução;
Desvantagens:
· Reprodutibilidade dos lotes de reagentes;
· Acessibilidade molecular para a interação Ag-Ac; 
· Estabilidadeda ligação do Ag-Ac no suporte.
superadas pelos fabricantes pelo uso de Ag recombinantes e Ac monoclonais e pela qualidade química das micropartículas.
TIPOS
Aglutinação Direta (ativa) 
O Antígeno faz parte naturalmente da célula (hemácias, bactérias, protozoários...), e haverá aglutinação dessas células promovida por anticorpos contra esses antígenos.
Ex: Leptospirose, brucelose e salmonelose.
· Os testes de aglutinação direta são feitos em tubos, placas ou lâminas incubando amostras de soro em diluições seriadas diante da concentração constante de suspensão de células (antígeno) e observa-se formação de agregados visíveis.
· Tipagem de grupos sangüíneos do Sistema ABO e Rh (Ags específicos) teste de aglutinação para o diagnóstico de Salmonelose, Brucelose e Leptospirose.
· Alguns antígenos virais (Hemaglutinina) aglutinam espontaneamente determinados tipos de hemácias.
· O ensaio é útil para identificar a presença de anticorpos que são inibidores dessa aglutinação e estão presentes no soro do paciente com a infecção.
· Detecção de anticorpos contra o vírus da rubéola, sarampo, influenza e enterovírus, entre outros.
Aglutinação indireta (passiva) ou Floculação
Emprega a adsorção de anticorpos ou de antígenos solúveis protéicos ou polissacarídeos na superfície de micropartículas inertes (suporte) que não interferem na interação antígenoanticorpo, como plásticos, poliestireno (látex), gelatina, carvão e hemácias formalizadas e taninizadas de aves e carneiro.
Ex: Pesquisa de anticorpos específicos utilizam suporte com antígeno adsorvido, enquanto o teste com suporte revestido de anticorpos (aglutinação reversa), é empregado, por exemplo, na determinação semiquantitativa da proteína C reativa, pesquisa de antígenos bacterianos no LCR, na detecção de HCG na urina e de antígenos virais nas fezes.
· Ocorre quando a interação direta de anticorpos específicos com o antígeno leva à formação de imunocomplexos em meio líquido, detectáveis com o auxílio de lupa ou microscopia óptica. 
· VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) que utiliza uma suspensão antigênica alcoólica de cardiolipina, cristais de colesterol e lecitina, preparada em salina tamponada, e é empregada para a pesquisa de anticorpos anticardiolipina frequentes na Sífilis. 
· Os anticorpos anticardiolipina (amostra) interagem com a cardiolipina (suspensão antigênica) e os imunocomplexos depositam-se sobre os cristais de colesterol, que é refringente, formando grumos visíveis ao microscópio óptico.
Hemaglutinação
Hemácias de aves são utilizadas preferencialmente por serem nucleadas, reduzindo o tempo do ensaio, sedimentando rapidamente. 
Os Ags polissacarídeos aderem prontamente às hemácias, enquanto os Ags protéicos, necessitam de pré-tratamento com ácido tânico (este altera a superfície quanto às cargas, aumentando a quantidade de proteína adsorvida).
Ex: detecção de Acs contra Trypanosoma cruzi, Treponema pallidum, Toxoplasma gondii,etc
GRUPOS SANGÜÍNEOS 
•O primeiro Sistema foi descrito em 1901 por Karl Landsteiner. Este observou que os eritrócitos de alguns indivíduos sofriam aglutinação quando misturados com o soro de outros indivíduos, mas não com o soro próprio. 
•Por aglutinação, Landsteiner classificou os eritrócitos em: A, B e O.
 •Sabemos hoje, que os tipos A e B são antígenos carboidratos expressos na superfície do eritrócito.
O Sistema ABO expressa antígenos carboidratos na superfície das hemácias e anticorpos naturais circulantes contra o antígeno ausente.
Anticorpos naturais e imunes
O Sistema ABO apresenta anticorpos naturais circulantes no plasma. 
Esses anticorpos foram identificados por Landsteiner e são chamados de aglutininas (no plasma) (IgM), os quais reconhecem aos antígenos nas hemácias chamadas de Aglutinogênio.
Um indivíduo do tipo A terá contato com antígenos dessas fontes exógenas semelhantes aos Ags A mas apenas produzirá o anticorpo anti-B. 
Essa resposta é do tipo T-independente, e assim basicamente IgM estará presente nessa produção.
Pode haver formação de anti-A e anti-B da classe IgG (anticorpos imunes) em função de estímulos com substâncias grupo-específicas A ou B nas seguintes situações: 
· heteroimunização por substâncias de origem animal ou bacteriana, como soroterapia anti-diftérica ou anti-tetânica;
· Aloimunização por gravidez ou por transfusão sangüínea incompatível.
Agentes eritrocitários
•Os determinantes antigênicos do Sistema ABO são carboidratos cuja especificidade reside nos açúcares terminais de um oligossacarídeo. A biossíntese dos antígenos A, B e O está diretamente ligada à existência de um gene H (alelos H e h). 
•O gene H codifica uma enzima chamada fucosil-transferase,, formando o antígeno H. 
•Nos indivíduos com o genótipo hh, o antígeno H estará ausente. Esse fenótipo é dito tipo Oh ou Bombay.
As hemácias dos indivíduos Bombay (hh) não aglutinam diante de Anti-A, Anti-B e Anti-AB, e assemelham aos indivíduos do grupo O. No entanto, são diferentes dos indivíduos tipo O pelo fato de as hemácias do indivíduo Bombay não aglutinam diante deAnti-H. 
•Portanto, os indivíduos Bombay não apresentam AgH, AgA e AgB, e no soro, apresenta manti-H, anti-A e anti-B. 
•Em transfusões, um indivíduo Bombay só poderá receber sangue de outro Bombay, pois, os anticorpos anti-H presentes em seu plasma, na presença do complemento, podem destruir as hemácias do grupo O.
SISTEMA Rh
•Descoberto em 1940 por Landsteiner e Wiener em experimentos utilizando hemácias dos macacos Rhesus inoculadas em coelhos.
 •O Sistema Rh é muito polimórfico e apresenta mais de 45 antígenos; no entanto, os principais são D, C, E, c, e. 
•Os indivíduos portadores do antígeno D são Rh positivos; os Rh negativos não possuem o antígeno D
VARIANTES DO ANTÍGENO D (Dfraco ou Du)
•Os indivíduos com a variante Dfraco apresentam menor quantidade de antígenos expressos nas hemácias, de modo que, na tipagem sangüínea do antígeno D, só ocorre aglutinação após a incubação a 37 ºC com IgG específica ou após a utilização do soro de Coombs (anti-IgG). 
•Os indivíduosDu são considerados Rh-positivo. 
•O Sistema Rh não possui anticorpos naturais correspondentes no soro. Portanto, anti-Rh em indivíduos Rh-negativos indica exposição prévia aos antígenos Rh (por transfusão ou gestação).
Eritroblastose fetal é uma doença hemolítica causada pela incompatibilidade do sistema Rh do sangue materno e fetal. Ela se manifesta, quando há incompatibilidade sanguínea referente ao Rh entre mãe e feto, ou seja, quando o fator Rh da mãe é negativo e o do feto, positivo.•Robin Coombs desenvolveu anticorpos anti-imunoglobulinas (inoculando IgG humana em coelhos. O soro do coelho, soro de Coombs, possui anti-IgG humana).
•TESTES DE COOMBS, usados para a pesquisa e a identificação de Acs contra Ags eritrocitários em caso de incompatibilidade sangüínea materno-fetal, anemias hemolíticas auto-imunes e nas provas de compatibilidade transfusionais.
O teste de Coombs pode ser: 
· Direto (detecta Acs previamente fixados às hemácias e revelados diretamente pela mistura do soro de Coombs à suspensão de hemácias lavadas); 
· Indireto (detecta Acs contra Ags eritrocitários, mediante a ligação desses Acs às hemácias, seguida da aglutinação pelo soro de Coombs).