aula 5 quim clinica Espectrofotometria

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Aula - 5 
Espectrofotometria de absorção no UV-Visível 
A espectrofotometria pode ser definida como toda técnica analítica que usa a luz para medir as 
concentrações das soluções, através da interação da luz com a matéria. 
A palavra espectro de origem grega foi empregada para nomear raios luminosos em virtude de na 
antiguidade as pessoas sepultarem seus mortos em covas rasas, e o simples fato de alguém desavisado 
pisar em cima, de uma dessas sepulturas fazia com que o gás metano fosse expelido, visto que corpos 
em decomposição liberam diversos gases, entre eles o metano, que apresenta uma propriedade de auto 
inflamar-se apresentando um aspecto luminoso intenso. Quando alguém era surpreendido por uma bola 
gasosa dessa ficava assustado e dizia estar sendo assustado por um fantasma que em grego é espectro. 
 
 
 
Lei de Lambert-Beer 
A “força vital” da espectrofotometria está fundamentada na lei de Lambert-Beer, que estabelece: 
“A absorbância é diretamente proporcional a concentração da solução de amostra.” 
 
Ou: 
Log(I/I0)=εcl 
A= εcl 
http://www.infoescola.com/quimica/solucoes/
http://www.infoescola.com/wp-content/uploads/2011/06/lambert-beer.jpg
Onde : 
A é a absorbância, 
ε é o coeficinte de extinção molar e 
l é o comprimento da cubeta. 
Os componentes principais de um espectrofotômetro são apresentados e suas respectivas funções: 
Fonte de Luz: é composta por uma lâmpada de deutério e uma lâmpada de tungstênio (semelhante à 
lâmpada de carro). A lâmpada de deutério emite radiação UV e a de tungstênio emite luz visível. 
Monocromador: alguns espectrofotômetros ainda possuem um prisma como monocromador, porém os 
mais modernos possuem dispositivos eletrônicos que transformam a luz incidida em vários 
comprimentos de onda, em um só comprimento, ou seja, a luz monocromática. 
 
 
Cubetas utilizadas em espectrofotometria. Geralmente usa-se cubeta de 1 cm, a fim de facilitar os 
cálculos da Lei de Lambert-Beer. 
Cubeta: é o recipiente propício para conter a amostra que será utilizada na análise, as cubetas podem ser 
de quartzo, vidro e acrílico, porém recomenda-se que seja usada uma cubeta de quartzo por que o vidro 
e o plástico absorvem UV e causa a reflexão da luz visível. 
Detector: o detector é um dispositivo que detecta a fração de luz que passou pela amostra e transfere 
para o visor e para o computador acoplado ao aparelho. 
Nem todas as reações colorimétricas seguem a lei de Lambert-Beer, sendo esta válida para 
condições restritas, em que: 
• A luz utilizada é aproximadamente monocromática; 
• As soluções a serem analisadas estejam diluídas (baixas concentrações); 
• Não devem estar presentes na mesma solução mais de uma substância absorvente de luz; 
O aumento da concentração da substância analisada não altera as caracteristicas químicas do meio. 
A principal causa de desvios da lei é a utilização de soluções concentradas. Essa observação pode ser 
ilustrada pelo gráfico da Figura 1.6, no qual o aumento na concentração é acompanhado pelo aumento 
crescente e proporcional de A, até um ponto limite. A partir deste ponto (soluções concentradas), deixa 
de existir a proporcionalidade linear entre os valores (ver Figura 1.6). 
http://www.infoescola.com/materiais-de-laboratorio/espectrofotometro/
http://www.infoescola.com/elementos-quimicos/tungstenio/
http://www.infoescola.com/wp-content/uploads/2011/06/cubeta.jpg
Limite de linearidade representa o limite de concentração para a qual a lei de Lambert-Beer é 
válida. 
Para concentrações superiores ao limite de linearidade observado no desvio da lei de Lambert-Beer, 
deixa de existir a proporcionalidade linear entre concentração e absorbância. 
 
Limite de linearidade representa o limite de concentração para a qual a lei de Lambert-Beer é 
válida. 
Para concentrações superiores ao limite de linearidade observado no desvio da lei de Lambert-Beer, 
deixa de existir a proporcionalidade linear entre concentração e absorbância.