Estudo de estados redox mitocondriais com NADH e NADPH autofluorescentes

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Estudo de estados redox 
mitocondriais utilizando NADH e 
NADPH autofluorescentes.
Introdução NADH
• Dinucleotídeo de nicotinamida e adenina
• NAD+ (oxidado) <--> NADH (reduzido)
• Transporte de elétrons em reações metabólicas redox
• Produção de energia para célula
•
Fosforilação oxidativa: NADH
Introdução NADPH
• Fosfato de dinucleotídeo de nicotinamida e adenina
• NADP+ (oxidado) <--> NADPH (reduzido)
• Síntese de ácidos graxos e glicerol
Fluorescência em NAD(P)H
• Útil para monitorar função mitocondrial;
• Sensível às mudanças no ambiente;
• Permite separação das contribuições de NADH E NADPH em células.
O papel central do NAD na energia de 
tradução da mitocôndria
Fundamentos bioquímicos em medidas da fluorescência 
de NAD(P)H
• Gama de patologias
• Câncer
• neurodegeneração por diabetes
Fundamentos bioquímicos em medidas da fluorescência 
de NAD(P)H
• Absorção no azul 340nm
• Tempo de vida 0,3ns e 0,7ns
Fluorescência intrínseca da redução do NADH e NADPH 
Aplicações de fluorescência NAD(P)H em células vivas
Separando NADH e NADPH utilizando fluorecência 
• A largura da mitocôndria está 
entre 500 e 1000nm 
Utilização de autofluorescência NAD(P)H
• Detectar presença de NADH e NADPH em diferentes tipos de células;
• Pesquisas na área da biomedicina visando a melhora no diagnóstico;
• Novo método para diagnóstico celular: SyncRGB-FLIM.
Referências
1. BLACKER, Thomas S.; DUCHEN, Michael R.. Investigating mitochondrial 
redox state using NADH and NADPH autofluorescence. Free Radical 
Biology And Medicine, London, v. 100, p.53-65, nov. 2016. Elsevier BV. 
http://dx.doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2016.08.010.
2. Bartolomé F., Abramov A.Y. (2015) Measurement of Mitochondrial NADH 
and FAD Autofluorescence in Live Cells. In: Weissig V., Edeas M. (eds) 
Mitochondrial Medicine. Methods in Molecular Biology, vol 1264. 
Humana Press, New York, NY
3. BASTIAENS, P. Fluorescence lifetime imaging microscopy: spatial 
resolution of biochemical processes in the cell. Trends In Cell Biology, v. 
9, n. 2, p.48-52, 1 fev. 1999. Elsevier BV.
http://dx.doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2016.08.010
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