AULA 5 - CÁLCULOS DE PCR

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PONTIFÍCIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE GOIÁS – PUCGO
DISCIPLINA: INSTRUMENTAÇÃO DE BIOLOGIA MOLECULAR
CÁLCULOS PARA REAGENTES DE PCR
	REAGENTES
	CONCENTRAÇÃO INCIAI (INDÚSTRIA)
	CONCENTRAÇÃO FINAL
	VOLUME INICIAL
	Mix para 07(Sete) reações
	Tampão TBE 
	10X
	1X
	
	
	Cloreto de Magnésio
	50milimolar
	2milimolar
	
	
	dNTP’s
	2millimolar
	0,2milimolar
	
	
	Primer 1
	2,5micromolar
	0,05micromolar
	
	
	Primer 2
	2,5micromolar
	0,05micromolar
	
	
	DNA molde
	25nanograna/
microlitro
	2nanograma/
microlitro
	
	
	Taq-polimerase
	5unidades/
microlitros
	0,2unidades/
microlitro
	
	
	Água mili-Q
	Qsp 25 µl
	
	
	TOTAL
	
	25 µl 
	
VOLUME PARA UMA REAÇÃO: C1.V1=C2.V2, onde C1(Concentração inicial), V1 (Volume inicial), C2 (Concentração final) e V2(Volume final).
O Mix é realizado com o intuito de não ocorrer desperdício de material/reagentes, sendo realizado anteriormente ao procedimento de PCR(custo elevado). Calcula-se o volume de uma reação e posteriormente multiplica-se pelo número de reações que será realizado no dia.
Neste caso, você irá calcular para 07 reações, onde temos 05 DNAs moldes, um controle positivo e um negativo, totalizando 07 reações. Lembrar que a água mili-Q servirá como complementação de volume e que cada DNA não poderá ser misturado no MIX. É como se fosse fazer empadas com recheios diferentes, os recheios são os DNAs que devem estar em cada empada (diferente uma da outra) e o mix é a nossa massa, que tem que ter o mesmo sabor e consistência em todas as forminhas.
Favor realizar a tabela acima e me enviar, ok?