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IDENTIFICAÇÃO DE CARBOIDRATOS 1 Roteiro da Aula Prática No capítulo 2 da apostila de Bioquímica Experimental estão descritos de forma detalhada os experimentos para a execução da prática de Identificação de Carboidratos. Os carboidratos utilizados nos testes são: arabinose, glicose, frutose, sacarose e amido. O objetivo da prática é identificar esses carboidratos através da realização de testes específicos (para um carboidrato) ou gerais (para um grupo de carboidratos). As etapas do trabalho prático foram executadas por mim e fotografadas para um melhor entendimento da identificação. Posteriormente vocês devem responder as perguntas relacionadas a esta prática na Atividade 4, que deve ser entregue no Campus Virtual até 30/01/2021 às 12 h. Bom trabalho!!! 2 Carboidratos testados na aula prática Arabinose Glicose Frutose Sacarose Amilose 3 As cinco soluções dos carboidratos foram rotuladas ao acaso como sendo A, B, C, D e E. Através da aplicação de testes específicos e gerais, vocês deverão identificar cada solução de carboidrato. 4 Testes específicos e gerais 5 Serão realizados cinco testes com cada um dos carboidratos utilizando as soluções acima. 1) Teste do Iodo Utilizado para identificar homopolissacarídeos. Estes polissacarídeos formam com o iodo um complexo colorido. 6 Cada solução de carboidrato foi pipetada e transferida para os tubos de ensaio. Foi adicionado o reagente de lugol (iodo) em cada tubo de ensaio. 7 - Apenas a solução de carboidrato D deu resultado positivo. 8 Carboidrato Teste do Iodo A - B - C - D + E - Para uma melhor identificação das soluções de carboidratos, iremos construir uma tabela com o resultado de cada teste. Sinal ( - ) significa que o resultado é negativo para o teste em análise e sinal ( + ) significa que o resultado é positivo para o teste em análise. 9 2) Teste de Molisch Identifica carboidratos com estruturas contendo 5 ou mais átomos de carbono. Neste teste se utiliza o ácido sulfúrico, que desidrata as pentoses formando furfurais e as hexoses formando hidroximetilfurfurais. Hexose e piranose Hexoses na presença de ácido sulfúrico são desidratadas a HIDROXIMETILFURFURAL 10 Pentoses na presença de ácido sulfúrico são desidratadas a FURFURAL Pentose e furanose Hexose e furanose 11 12 O reagente de Molisch contém a-naftol, que reage com os furfurais formando um produto roxo/marrom. Cada solução de carboidrato foi pipetada e transferida para os tubos de ensaio; Foi adicionado o reagente de Molish em cada tubo de ensaio; 13 Foi pipetado o ácido sulfúrico concentrado em cada tubo de ensaio. Todas as soluções de carboidrato deram resultado positivo; A intensidade da coloração variou em decorrência da concentração de carboidratos em cada solução. 14 Carboidrato Teste do Iodo Teste de Molisch A - + B - + C - + D + + E - + Completando a Tabela !!!!!!!! 15 3) Teste de Selivanof Utilizado para diferenciar cetohexoses de aldohexoses. As cetohexoses são rapidamente desidratadas a hidroximetilfurfural pela ação do ácido clorídrico (presente no reagente de Selivanof) durante a ebulição. O hidroximetilfurfural reage com o resorcinol (presente no reagente de Selivanof) formando um produto de condensação de cor vermelha. Cetohexose HCl Hidroximetilfurfural Resorcinol Furanose 16 HCl Piranose Reação lenta (não forma o hidroximetilfurfural) HCl Furanose Não reage com o reagente resorcinol 17 O ácido clorídrico só consegue desidratar carboidratos com estrutura furanosídica, tais como a frutose e arabinose, formando respectivamente, hidroximetilfurfural e furfural. O reagente resorcinol (teste de Selivanof) só consegue reagir com o hidroximetilfurfural. 18 Cada solução de carboidrato foi pipetada e transferida para os tubos de ensaio. Foi adicionado o reagente de Selivanof em cada tubo de ensaio; 19 Os tubos de ensaio foram levados em banho de água em ebulição por alguns minutos. Os tubos de ensaio contendo as soluções de carboidratos B e C deram positivo para o teste de Selivanof. 20 Carboidrato Teste do Iodo Teste de Molisch Teste de Selivanof A - + - B - + + C - + + D + + - E - + - Completando a Tabela !!!!!!!! 21 4) Teste de Bial As pentoses desidratam rapidamente transformando-se em furfural na presença de ácido clorídrico. Na presença do íon férrico, o orcinol (reagente do teste de Bial) e furfural condensam-se rapidamente dando um produto azul. O hidroximetilfurfural formado a partir das cetohexoses não reage adequadamente como os furfurais. As aldohexoses desidratam muito vagarosamente. 22 23 Cada solução de carboidrato foi pipetada e transferida para os tubos de ensaio. Foi adicionado o reagente de Bial em cada tubo de ensaio; Os tubos de ensaio foram levados em banho de água em ebulição por alguns minutos. 24 O tubo de ensaio contendo a solução de carboidrato E deu positivo para o teste de Bial. 25 Carboidrato Teste do Iodo Teste de Molisch Teste de Selivanof Teste de Bial A - + - - B - + + - C - + + - D + + - - E - + - + Completando a Tabela !!!!!!!! 26 5) Teste de Benedict Identifica carboidratos redutores. Os íons cúpricos estabilizados em solução por agentes complexantes (azul), são reduzidos a quente pelos grupos carbonilas das aldoses, formando um precipitado de óxido cuproso. A coloração do precipitado obtido será laranja a vermelho-tijolo. 27 Cada solução de carboidrato foi pipetada e transferida para os tubos de ensaio; Foi adicionado o reagente de Benedict em cada tubo de ensaio; Os tubos de ensaio foram levados em banho de água em ebulição por alguns minutos. 28 Os tubos de ensaios contendo as soluções de carboidratos A, B e E deram positivo para o teste de Benedict. 29 Carboidrato Teste do Iodo Teste de Molisch Teste de Selivanof Teste de Bial Teste de Benedict A - + - - + B - + + - + C - + + - - D + + - - - E - + - + + Completando a Tabela !!!!!!!! 30 Na Atividade 4, identifique cada solução de carboidrato, de acordo com a tabela preenchida.
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