Questões respondidas de Flavonoides

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Questões de Flavonoides – Teórica 
 
1. Identifique as subclasses dos flavonoides abaixo ilustrados e destaque as 
vias biossintética: 
 
 
A ​� Subclasse dos flavonóis (O-heterosídeo). Biossíntese mista (via do 
chiquimato- C6C3 e via do acetato) 
B ​� Subclasse das chalconas. Biossíntese mista (via do chiquimato- C6C3 e via 
do acetato) 
 
2. Cite três funções dos flavonoides nas plantas. 
- Atividade antioxidante ​� atuam na captura e neutralização de espécies 
oxidantes como o ânion superóxido (O²⁻), radical hidroxila ou radical peróxido; 
- Atividade anti-inflamatória ​� inibição dos óxidos nítrico-sintases reduzida, 
cicloxigenase, redução da permeabilidade vascular, produção de óxido nítrico 
etc.; 
- Atividade antitumoral ​� utilizados na quimioterapia preventiva do câncer, 
alguns flavonoides demonstram capacidade de interagir sobre a gênese do 
câncer. 
- Atividade hormonal ​� regulam os níveis de estrógenos e de androgênio nos 
humanos, além de regular também os níveis de progesterona. São utilizados para 
a reposição hormonal ou para o tratamento e prevenção da osteoporose, 
diminuindo a liberação de cálcio ósseo e a reabsorção óssea. 
 
3. Os três flavonoides ilustrados abaixo foram analisados por CCD utilizando 
sílica gel como fase estacionária. Proponha em ordem crescente o Rf destas 
substâncias. Descreva qual(is) revelador(es) poderiam ser aplicados nesta 
caracterização e qual a característica da fase móvel. Justifique sua resposta. 
 
Quando se observa a estrutura química das moléculas e o LogP é possível 
observar a ordem de polaridade desses flavonoides. A rutina é a molécula mais 
polar, uma vez que possui como substituintes duas glicoses, conferindo-a maior 
polaridade e, portanto, maior solubilidade. A quercetrina é a segunda molécula 
mais polar, uma vez que possui como substituinte apenas uma molécula de 
glicose, conferindo uma polaridade média. Por fim, a luteolina é a molécula 
menos polar, uma vez que ela não possui na sua estrutura substituintes que 
promovam maior polaridade a molécula. A sílica gel é uma fase estacionária 
muito polar, dessa forma, ela retém mais fortemente substâncias polares, ou seja, 
quanto mais polar a molécula mais interação com a fase estacionária e menor a 
distância percorrida na placa (menor o fator de retenção- Rf). Diante disso, a 
ordem crescente do fator de retenção é: Rf rutina < Rf quercetrina < Rf luteolina. 
O método de caracterização empregado foi um ensaio cromatográfico utilizando 
a técnica de cromatografia em camada delgada (CCD), onde pode-se utilizar 
como reveladores o reagente AlCl₃ para a detecção de flavonoides, onde 
obtém-se uma intensificação da coloração e fluorescência no UV devido a 
formação do complexo flavonoide-Al​³⁺​. Entretanto o Reagente Natural A 
(difenilboriloxietilamina a 1% em metanol) é o reagente mais utilizado para a 
detecção de flavonoides, onde obtém-se uma coloração laranja, amarela ou verde 
e essa fluorescência é importante para o reconhecimento do núcleo flavonoídico. 
A característica da fase móvel deve ser um eluente de polaridade moderada, uma 
vez que se a fase móvel for muito polar toda a amostra ficará no topo da placa e 
se a fase móvel for muito apolar, toda a amostra ficará na base da placa, dessa 
forma acaba dificultando a separação da amostra. Diante disso, a característica 
na fase móvel deve ser de polaridade moderada, como, por exemplo, o eluente 
acetato de etila-ácido fórmico-água utilizado para a eluição de 
flavonoides-heterosídeos. 
 
4. Os flavonoides são conhecidos devido a sua vasta aplicação terapêutica 
(antioxidantes, anti-inflamatórios, antitumorais, antitrombóticos etc.). Cite 
duas plantas utilizadas na terapêutica e explique suas atividades 
farmacológicas. 
A folha do Gingo, cujo nome científico é ​Ginkgo biloba ​L., contém flavonoides 
que possuem propriedades farmacológicas. A atividade farmacológica 
relacionada aos flavonoides nessa planta, é atribuída à capacidade de capturar 
radicais livres, ou seja, possui uma atividade antioxidante. 
As folhas e partes aéreas do maracujá, cujo nome científico é ​Passiflora ​spp., 
contém flavonoides que possuem propriedades farmacológicas. As atividades 
farmacológicas relacionadas aos flavonoides nessa planta são atividades 
antioxidantes. Além disso, devido a presença de frações flavonoídicas o 
maracujá age como depressor inespecífico do SNC, resultado numa ação 
sedativa, ansiolítica e antiespasmódica da musculatura lisa. 
 
5. Identifique quais as subclasses dos flavonoides ilustrados abaixo. 
 
 
A ​�​ flavonas 
B ​�​ Flavanonas 
C ​�​ Chalconas 
D ​�​ Catequinas 
E ​�​ Di- hidroflavonóis 
F ​�​ Antocianinas 
G ​�​ Flavonóis 
H ​�​ Auronas 
I ​�​ Isoflavonóides (Isoflavona) 
J ​�​ Isoflavonóides (Rotenóides) 
K ​�​ Isoflavonóides (Pterocarpano) 
 
6. O medicamento Daflon é utilizado para insuficiência venosa crônica e é 
composto pela mistura dos flavonoides diosmina e hesperidina. Proponha 
uma metodologia para a extração desses componentes a partir da droga 
vegetal, bem como seu controle de qualidade. Justifique sua resposta. 
 
 
A diosmina e a hesperidina são flavonoides glicosilados (O-heterosídeo), dessa 
forma são componentes com uma polaridade alta. Uma das formas mais usuais 
de extração de flavonoides é a utilização de solventes com polaridade crescente. 
Dessa forma, na primeira extração, a partir da droga vegetal, seria utilizado um 
solvente apolar para retirar óleos, gorduras, esteróis e pigmentos, facilitando a 
extração posterior dos flavonoides. Na segunda extração seria utilizado um de 
média polaridade (como o clorofórmio, acetato de etila, diclorometano, ou éter 
etílico) para extrair agliconas livres pouco polares. Na terceira extração, seria 
utilizado solventes com polaridade elevada (n-butanol, acetona, metanol e água) 
para extrair as agliconas poli-hidroxiladas, flavonas e flavonóis mais polares, 
chalconas e flavonoides glicosilados (diosmina e hesperidina). 
Em seguida no controle de qualidade, seria confirmado a presença desses 
flavonoides através da dosagem colorimétrica. Para isso seria realizada uma 
reação de precipitação. Dessa forma, ao extrato seria adicionado cloreto de 
alumínio, em meio alcalino, promovendo a precipitação com a formação de um 
gel que adsorve os flavonoides. Em seguida esse gel seria purificado por 
lavagem e centrifugação. Esse precipitado seria dissolvido em ácido acético, 
adquirindo colorações próprias, promovendo a dosagem colorimétrica. Nessa 
reação, o íon alumínio Al​³⁺ complexa com as moléculas de flavonoides, 
formando um complexo estável com uma coloração cuja intensidade é 
proporcional à concentração de flavonoide presente na amostra. Essa 
complexação promove, na espectroscopia, um deslocamento batocrômico e 
intensificação das absorções, podendo ser quantificado. Além dessa técnica, 
poderia ser utilizado a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para 
avaliar o teor de flavonoides, uma vez que permite a separação e o doseamento 
de quantidades relativamente pequenas na amostra. Ainda, poderia ser utilizado 
o método de quantificação de flavonoides por espectrofotometria, devido às 
duplas ligações presentes nos anéis aromáticos, os flavonoidespodem ser 
analisados na região ultravioleta ou visível. 
 
7. Coloque os flavonoides em ordem crescente de atividade antioxidante e 
justifique. 
 
 
A ordem crescente de atividade antioxidante é: B< A < D < C. O flavonoide C 
(flavonol) é o que possui maior atividade antioxidante devido a presença de 
diversos (-OH), que atuam como doadores de próton aos radicais livre, 
diminuindo o estresse oxidativo e devido a presença da dupla ligação no anel C 
formando um sistema conjugado, que promove maior deslocalização eletrônica 
(ressonância). O flavonoide D (chalcona) não possui maior atividade 
antioxidante que o composto C devido menor número de radicais fenólicos, 
entretanto é o segundo composto com maior atividade devido a presença da 
dupla ligação no anel C formando um sistema conjugado, que promove maior 
deslocalização eletrônica. O composto A (flavona) não possui atividade 
antioxidante maior que os compostos C e D devido ao menor número de (-OH) 
na sua estrutura, que atuam como doadores de próton aos radicais livres, 
entretanto possui uma atividade antioxidante maior do que o composto B devido 
à presença da dupla ligação na sua estrutura, conferindo maior deslocalização 
eletrônica (ressonância).O flavonoide B (di-hidroflavonol) é o que possui menor 
atividade antioxidante devido à ausência da dupla ligação no anel C, dessa forma 
não se tem a deslocalização eletrônica (ressonância). 
 
 
Questões Flavonoides – Prática 
 
1) Os reagentes NP/PEG e AlCl3 são utilizados para caracterização de 
flavonoides. Explique os mecanismos e o que é esperado para os 
flavonoides. 
O NP/PEG (difenilboriloxietilamina/ polietilenoglicol) é um revelador 
específico muito utilizado durante a caracterização de flavonoides. Esse 
revelador é aplicado sobre a cromatoplaca eluída no sistema polar ácido para a 
caracterização de flavonoides, sob a luz UV de comprimento de onda de 365nm, 
observando-se uma coloração laranja/amarelo ou verde, devido intensificação de 
fluorescência com mudança de cor. Esse ganho de fluorescência após a 
aplicação do revelador é determinado pelo número e posição dos substituintes 
nos flavonoides, sendo que a presença da coloração amarela indica a presença de 
um substituinte no anel B, enquanto a coloração laranja indica a presença de 
dois substituintes no anel B. Esse revelador transforma os flavonoides em geral 
em antocianinas na sua forma ácida, por isso eles apresentam a coloração 
voltada para tons vermelhos e com suas variações (amarelo e laranja). No caso 
da prática, a Camomila apresentou uma leve coloração amarela alaranjado 
indicando presença de flavonoides com um substituinte no anel B, o Ginco 
apresentou uma coloração amarelo alaranjado indicando a presença de 
flavonoides com um substituinte no anel B e flavonoides com dois substituintes 
e a Macela apresentou uma coloração alaranjada intensa indicando a presença de 
flavonoides com dois substituintes no anel B. 
O AlCl₃ é um revelador utilizado para a caracterização de flavonoides. Os 
flavonoides são polifenóis, dessa forma, são capazes de complexar-se com 
metais pela presença de sítios quelantes. Com isso, o mecanismo desse revelador 
ocorre através da complexação de cátions Al⁺³ com as hidroxilas livre dos 
flavonoides (sítios quelantes dos polifenóis) formando um complexo estável 
flavonoide-Al⁺³, ocasionando extensão do sistema conjugado, promovendo um 
desvio batocrômico na espectroscopia, com consequente intensificação da 
fluorescência no UV, devido a intensificação das absorções (intensificação de 
fluorescência com mudança da cor). No caso da prática, tanto na Camomila 
quanto no Ginco e Macela foi visualizado uma intensificação da fluorescência 
com coloração azul esverdeada, podendo ser indicativo de presença de 
Flavanonas. 
 
2) Proponha as estruturas das antocianinas nos pHs neutro, básico e ácido, 
bem como suas colorações (com base na observação da aula prática) nesses 
pHs. 
 
 
 
 
3) No controle de qualidade de uma droga vegetal, contendo os seguintes 
flavonoides, foi realizada uma análise por CCD utilizando como fase 
estacionária sílica gel. Proponha quem são as substâncias 1, 2 e 3 na placa 
de CCD. Justifique sua resposta. 
 
 
As substâncias 1, 2 e 3 na placa de CCD são B, C e A, respectivamente. Isso 
porque a sílica gel é uma fase estacionária muito polar, dessa forma ela retém 
mais fortemente substâncias polares. O flavonoide B é o mais polar, dessa forma 
ele interage fortemente com a sílica (por meio das ligações de hidrogênio, 
devido às diversas hidroxilas presentes na estrutura) ficando mais retido na 
cromatoplaca, ou seja, eluindo menos, sendo representado pela substância 1. O 
flavonoide C é o segundo mais polar, dessa forma ele interage menos fortemente 
com a sílica do que o flavonoide B e interage mais fortemente com a fase 
estacionária do que o flavonoide A, com isso ele fica retido na cromatoplaca 
entre a substância 1 e 3, sendo representado pela substância 2. Por fim, o 
flavonoide A é o menos polar, dessa forma ele vai interagir pouco com a fase 
estacionária, sendo deslocado com maior facilidade pelo eluente e, portanto, 
eluindo mais. Com isso, esse flavonoide A é representado pela substância 3. 
 
4) O que aconteceria caso a análise descrita no exercício 3 fosse realizada em 
placas de CCD com fase estacionária de C18? Justifique sua resposta. 
A sílica C18 é uma fase estacionária chamada de fase reversa, ou seja, essa fase 
estacionária possui uma polaridade menor que a fase móvel. Com isso, 
substâncias com maior polaridade eluem mais sobre a placa, enquanto 
substâncias com menor polaridade ficam mais retidas com a fase estacionária 
C18. Dessa forma, se fosse utilizar a fase estacionária C18 no exercício 3, as 
substâncias 1, 2 e 3 na placa de CCD seriam os flavonoides A, C e B, 
respectivamente. O flavonoide A, como é o com menor polaridade, iria interagir 
mais fortemente com a fase estacionária uma vez que a sílica C18 possui 
características apolares, ficando mais retido, com isso seria representado pela 
substância 1. O flavonoide C, iria interagir menos fortemente com a fase 
estacionária C18 do que o flavonoide A e interagiria mais fortemente com a fase 
estacionária C18 do que o flavonoide C, com isso ele ficaria retido na 
cromatoplaca entre a substância 1 e 3, sendo representado pela substância 2. Por 
fim, como o flavonoide B é o mais polar, ele iria interagir pouco com a fase 
estacionária C18, sendo deslocado com maior facilidade pelo eluente e, portanto, 
eluindo mais. Com isso, esse flavonoide B seria representado pela substância 3. 
 
5) O que você esperaria na revelação química com NP/PEG da placa de CCD 
ilustrada no exercício 3? 
O revelador NP-PEG é muito utilizado durante o controle de qualidade, sendo 
que é um revelador específico para os flavonoides e Fenilpropanóides. Esse 
revelador, quando aplicado sobre a cromatoplaca eluída no sistema polar ácido 
para a caracterização de flavonoides, sob a luz UV de comprimento de onda de 
365nm, observa-se uma coloração laranja/amarelo ou verde, devido acapacidade desse revelador de intensificar a fluorescência com mudança de cor. 
O NP-PEG torna os flavonoides fluorescentes, apresentando uma coloração 
amarela a laranja intenso que é relativo a substituições no anel B do flavonoide, 
ou seja, quando se tem uma substituição no anel B geralmente apresenta uma 
coloração amarela. Quando se tem 2 substituições no anel B, apresenta uma 
coloração mais alaranjada. Diante disso é possível verificar se a estrutura é um 
flavonoide e obter informações sobre a sua estrutura. 
No exercício 3 os compostos A, B e C são flavonoides, quando se utilizar o 
revelador químico NP-PEG é esperado que os compostos B e C, quando 
visualizado no UV, apresentem uma coloração amarelo alaranjado devido a 
presença de flavonoides com 2 substituintes no anel B. Enquanto o composto A, 
quando visualizado no UV, apresenta uma coloração amarelada devido a 
presença de flavonoides com apenas 1 substituinte no anel B.