Técnicas de Biologia Molecular

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isc.: PLATAFORMAS MOLECULARES PARA AS ATIV. BIOLÓGICAS   
	Aluno(a): 
	
	Acertos: 8,0 de 10,0
	
		1a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	Identifique as principais etapas do protocolo de extração de ácidos nucleicos:
		
	 
	Lise celular, Purificação, Precipitação e Hidratação;
	
	Precipitação, lise celular, purificação e Hidratação.
	
	Hidratação, Purificação, Lise celular e Precipitação.
	
	Lise celular, Hidratação, Precipitação e Purificação;
	
	Hidratação, Lise celular, Purificação e Precipitação;
	Respondido em 26/10/2020 22:24:51
	
	Explicação:
A extração de ácidos nucleicos envolve etapas sequenciais de ruptura celular e exposição do ácido nucleico, seguida da purificação do material de interesse com a remoção de contaminantes. Em seguida, realiza-se a precipitação do alvo e consequente hidratação do mesmo.
	
		2a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Fiocruz, 2006): São elementos necessários na técnica de amplificação de DNA através da reação da polimerase em cadeia (PCR):
		
	 
	DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs e termociclador;
	
	DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs e endonucleases;
	
	DNA molde, DNA polimerase, primers, dNTPs, endonucleases e termociclador;
	
	DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs, endonucleases e termociclador;
	
	DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs, etanol e termociclador;
	Respondido em 26/10/2020 22:37:39
	
	Explicação:
As endonucleases são enzimas de restrição utilizadas nas técnicas de clonagem molecular. O etanol é utilizado no processo de extração de ácido nucleico, antes da técnica de PCR. DNA polimerase ou Taq DNA polimerase são a mesma enzima.
	
		3a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Polícia Científica, PE, 2016): A respeito de eletroforese, uma metodologia amplamente empregada para separação, isolamento, análise e manipulação dos ácidos nucleicos, assinale a opção correta:
		
	
	A identificação dos fragmentos amplificados de DNA não pode ser realizada em gel de poliacrilamida;
	 
	A quantificação de DNA em gel de agarose é uma técnica de menor precisão, comparada a eletroforese em acrilamida, sendo utilizada como instrumento para averiguação de êxito na etapa de extração;
	
	A eletroforese consiste na migração das partículas de uma solução coloidal sob a influência de um campo magnético onde a polaridade negativa atrai as moléculas;
	
	A eletroforese em gel de agarose é usada para separar proteínas de tamanhos diferentes, que podem ser detectadas por fluorescência;
	
	Os ácidos nucleicos possuem uma carga geral total positiva, devido aos seus grupamentos fosfato do arcabouço e, consequentemente, quando aplicados em um gel de agarose ou poliacrilamida, migram em direção ao ânodo.
	Respondido em 26/10/2020 22:30:59
	
	Explicação:
A eletroforese em gel de agarose destina-se apenas a ácidos nucleicos, enquanto a eletroforese em gel de poliacrilamida pode ser empregada para ácidos nucleicos e proteínas. Na técnica de eletroforese, graças à aplicação de campo elétrico, as partículas são induzidas a migrar no polímero. O movimento das partículas é determinado em função da repulsão do pólo negativo uma vez que, em função dos seus respectivos grupamentos fosfato, o DNA possui cargas semelhante.
	
		4a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Fiocruz, 2010) - Assinale a afirmativa incorreta:
		
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, quanto maior for a quantidade de DNA alvo presente em uma dada amostra um menor número de ciclos de PCR será necessário para se obter uma quantidade de fluorescência a partir desta dada amostra acima do ruído de fundo do aparelho (Ct);
	 
	A metodologia de PCR em Tempo - Real é a única metodologia de PCR quantitativo existente;
	
	A técnica de PCR em Tempo - Real é mais sensível que a técnica de PCR convencional.
	
	É a curva de dissociação obtida ao final da corrida de PCR em Tempo - Real que permite a verificação da especificidade da amplificação obtida;
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, a utilização de sondas marcadas com fluoróforos permite a realização de reações multiplex;
	Respondido em 26/10/2020 22:44:33
	
	Explicação:
A metodologia de PCR digital corresponde a um avanço da metodologia de PCR em tempo real, permitindo a quantificação de ácidos nucleicos com grande sensibilidade e dispensando a necessidade de curva-padrão.
	
		5a
          Questão
	Acerto: 0,0  / 1,0
	
	(Unesp, 2012): Um clone de cDNA para um gene humano que codifica uma proteína amilase foi marcado com radioatividade e utilizado em um experimento de Southern blotting. Nesse experimento, o DNA genômico de Ratos Wistar foi digerido com a enzima de restrição Eco RI e três fragmentos de DNA foram observados na análise de Southern blotting. Quando os pesquisadores realizaram os mesmos experimentos com outra linhagem de ratos, foi observada a ausência de fragmentos na análise de Western blotting, mesmo após estes experimentos terem sido repetidos três vezes. Podemos concluir corretamente que:
		
	 
	esses resultados demonstram que o DNA dos ratos Wistar contém dois ou mais sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos de tamanhos diferentes. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos fornece prova de que esses animais sofreram mutações na sequência de DNA que codifica a proteína amilase e essa sequência não é mais reconhecida pela enzima de restrição Eco RI, portanto não são observados fragmentos na análise de Southern blotting;
	
	os resultados da análise de Southern blotting com os ratos Wistar demonstram que há o reconhecimento de sítios de restrição pela enzima Eco RI na sequência de DNA do gene que codifica a proteína amilase. Entretanto, a ausência de fragmentos na outra linhagem de camundongo analisada é certamente resultado de erros metodológicos na aplicação dessas análises, pois este seria um resultado improvável;
	 
	na linhagem de ratos Wistar a região do DNA que codifica a proteína amilase contém dois sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos sugere que esses animais não têm a capacidade de produzir essa enzima amilase, pois essa sequência de DNA pode ter sido perdida ou deletada;
	
	esses resultados mostram que existem três sítios de restrição para a enzima Eco RI no DNA genômico dos ratos Wistar, gerando, portanto, três fragmentos de tamanhos diferentes na análise de Southern blotting. Na outra linhagem de ratos, a presença de apenas um sítio de restrição para essa enzima (Eco RI) gera um fragmento muito grande, o qual não é capaz de se hibridizar com o clone de cDNA e, portanto, não é possível ser detectado pela análise de Southern blotting;
	
	esses resultados demonstram que, na linhagem de ratos Wistar, existe um sítio de restrição para a enzima Eco RI na sequência da proteína amilase e, portanto, são observados três fragmentos com tamanhos diferentes que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos demonstra a falta de sítios de restrição para a enzima Eco RI na proteína amilase desses animais, indicando, portanto, que o gene da amilase está deletado por mutação no DNA desses animais.
	Respondido em 26/10/2020 22:47:21
	
	Explicação:
O número de sítios de restrição cliváveis pela enzima Eco RI para o gene analisado irá implicar na quantidade de fragmentos encontrados. Um sítio de restrição gera dois fragmentos, dois sítios de restrição gera três fragmentos e, assim sucessivamente. Na outra linhagem de ratos, a ausência de bandas no Western Blot sinaliza a ausência da proteína (amilase) que seria codificada pelo seu respectivo gene codificante.
	
		6a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Policia Cientifica, PR, 2017): A espectrometria de massa é uma técnica utilizada para o estudo de massasde átomos, moléculas ou fragmentos de moléculas, desde que estes estejam eletricamente carregados. A respeito desse assunto, julgue as afirmações.
 
I. Um espectrômetro de massas determina a massa de uma molécula ou átomo medindo a razão massa/carga dos íons gerados;
II. Os íons são gerados pela indução, perda ou ganho de carga por uma espécie eletricamente neutra;
III. Uma vez formados, os íons são direcionados, por forças eletrostáticas, para dentro do analisador de massas, separados de acordo com suas razões massa/carga e finalmente detectados.
 
Assinale a alternativa correta:
		
	
	Estão corretas apenas as afirmativas I e II;
	
	Está correta apenas a afirmativa I.
	
	Estão corretas apenas as afirmativas II e III;
	 
	Estão corretas todas as afirmativas;
	
	Estão corretas apenas as afirmativas I e III;
	Respondido em 26/10/2020 23:29:17
	
	Explicação:
Todas as alternativas estão corretas.
	
		7a
          Questão
	Acerto: 0,0  / 1,0
	
	Uma reação de sequenciamento de sanger se difere de uma de PCR principalmente por: 
		
	 
	A) utilizar um único iniciador (primer)
 
	
	 utilizar uma transcriptase.
	
	C) não utilizar tampão com magnésio.
	 
	D) utilizar didNTP(didesoxinucleotídeo) em substituição ao dNTP(desoxirribonucleotideo).  
	
	B) apresentar uma concentração maior de dNTP.
	Respondido em 26/10/2020 23:23:08
	
	Explicação:
No sequenciamento de sanger além do DNTP existem os DIDNTP que são importante para a paralização da reação de polimerização do DNA e para o desvendamento de qual base se encontra naquela posição. 
	
		8a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(UFAM, 2016): A clonagem molecular é caracterizada pela produção de muitas cópias de um fragmento de DNA alvo (amplificação), por meio da tecnologia do DNA recombinante. Sobre essa técnica, são feitas as seguintes afirmativas:
I. Um vetor de clonagem molecular pode conter mais de um marcador de seleção;
II. A região do gene repórter deve conter sítios de restrição enzimática para clonagem;
III. Em uma placa de Petri, o número de clones recombinantes não excede o número de clones não recombinantes;
IV. Uma das características exigidas para a clonagem molecular é que as células utilizadas como hospedeiras sejam organismos não patogênicos;
Assinale a alternativa correta:
		
	
	Somente as afirmativas II e III estão corretas;
	
	Somente as afirmativas I e III estão corretas;
	
	Todas as afirmativas estão corretas.
	 
	Somente as afirmativas I,II e IV estão corretas;
	
	Somente as afirmativas I, II e III estão corretas;
	Respondido em 26/10/2020 23:22:59
	
	Explicação:
O processo de clonagem pressupõe a existência de falhas nos processos de clonagem em vetor e transformação em organismos competentes. Dessa forma, as concentrações de vetor com inserto e bactéria são otimizadas de forma a otimizar a produção de clones recombinantes.
	
		9a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(FUVEST, SP): "Teste de DNA confirma paternidade de bebê perdido no tsunami. Um casal do Sri Lanka que alegava ser os pais de um bebê encontrado após o tsunami que atingiu a Ásia, em dezembro, obteve a confirmação do fato através de um exame de DNA. O menino, que ficou conhecido como "Bebê 81" por ser o 81º sobrevivente a dar entrada no hospital de Kalmunai, era reivindicado por nove casais diferentes." Folha online, 14/02/2005 (adaptado).
 
Algumas regiões do DNA são seqüências curtas de bases nitrogenadas que se repetem no genoma, e o número de repetições dessas regiões varia entre as pessoas. Existem procedimentos que permitem visualizar essa variabilidade, revelando padrões de fragmentos de DNA que são ¿uma impressão digital molecular¿. Não existem duas pessoas com o mesmo padrão de fragmentos com exceção dos gêmeos monozigóticos. Metade dos fragmentos de DNA de uma pessoa é herdada de sua mãe e metade, de seu pai.
 
Com base nos padrões de fragmentos de DNA representados abaixo, qual dos casais pode ser considerado como pais biológicos do Bebê 81?
 
		
	
	Casal D;
 
	
	Casal B;
	
	Casal A;
	
	Casal E.
	 
	Casal C;
 
	Respondido em 26/10/2020 23:15:57
	
	Explicação:
Para todos os outros supostos casais, sempre encontraremos alguma banda no bebê 81 para a qual não haverá correspondência nem materna nem paterna.
	
		10a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Enade, 2016): Desenvolvida recentemente, a técnica de edição de genoma denominada CRISPR/Cas9 mostra-se bastante promissora nas áreas de Biotecnologia e Medicina. Por engenharia genética, é possível direcionar o sistema CRISPR/Cas9 para clivar o DNA em um ponto específico dos genomas de vírus, de plantas, de fungos e de animais, inclusive de embriões humanos, o que tem gerado discussões a respeito dos aspectos éticos de sua utilização.
(YANAGUI, K. Novas tecnologias, novos desafios. Ciência e Cultura, São Paulo, v. 68, n. 3, set. 2016 (adaptado)).
Em relação às questões bioéticas envolvidas na edição genética, avalie as afirmações a seguir.
I. No Brasil, não é permitido o uso de técnicas para a edição genética de embriões humanos; os estudos científicos nessa área devem ter como objetivo tratar e curar problemas de saúde e não alterar o genoma ou realizar clonagens;
II. A despeito do caráter promissor da edição genética no tratamento de doenças graves, as intervenções feitas por meio da técnica de CRISPR/Cas9 em embriões podem ser passadas às gerações futuras, por esse motivo, a prática é considerada eugenista, o que ensejou a proibição de estudos desse tipo em embriões humanos em alguns países;
III. Em alguns países, inclusive no Brasil, são permitidas por lei a manipulação e a modificação genética de embriões humanos para fins de pesquisa, entretanto, esses embriões devem ser descartados dentro do prazo de duas semanas.
É correto o que se afirma em:
		
	 
	I e II, apenas;
	
	III, apenas;
	
	I, apenas;
	
	I, II e III.
	
	II e III, apenas;
	Respondido em 26/10/2020 23:17:55
	
	Explicação:
No Brasil, a legislação veta qualquer experimento que envolva a manipulação genética de embriões humanos. A Lei de Biossegurança (11.105/2005) proíbe em seu artigo 6, inciso III, a ¿engenharia genética em célula germinal humana, zigoto humano e embrião humano¿.