FARA 74 - MO Patogenicos e Indicadores de cont PF e C (1)

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UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA – UFBA
FACULADADE DE FARMÁCIA - DEPARTAMENTO DO MEDICAMENTO
FARA 74 – MICROBIOLOGIA APLICADA À FARMÁCIA
Microrganismos Patogênicos e 
Indicadores de Contaminação em
Produtos Farmacêuticos e 
Cosméticos
Prof.: Ricardo Bizogne Souto
Email: ricardo.rs.sm@gmail.com
Cosméticos
Salvador - BA, 24 de outubro de 2019
Referências bibliográficas:
- Brasil. Farmacopeia Brasileira. ANVISA: Brasília, 2019. 2 v. 
- Controle biológico de qualidade de produtos farmacêuticos, - Controle biológico de qualidade de produtos farmacêuticos, 
correlatos e cosméticos. TEREZINHA DE JESUS A. PINTO, 
TELMA M. KANEKO, ANTÔNIO F. PINTO. Editora Atheneu. 4ª 
edição. 2015.
- BRASIL. MINISTÉRIO DA SAÚDE. Agência Nacional de Vigilância 
Sanitária. Resolução RDC nº 301 de 21 de agosto de 2019. Boas 
Práticas para Fabricação de Medicamentos. Brasília, 2019. 
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MICROBIOLOGIA APLICADA À FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
QUALIDADE DE PRODUTOS 
FARMACÊUTICOS E FARMACÊUTICOS E 
COSMÉTICOS
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
QUALIDADE MICROBIOLÓGICA
LIMITES MICROBIANOSLIMITES MICROBIANOS
Carga Microbiana
Presença de Microrganismos Patogênicos
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
CARGA MICROBIANA
Quantidade de microrganismos Quantidade de microrganismos 
totais contaminantes nos produtos
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
PRESENÇA DE PATÓGENOS
PRIMÁRIOS
Microrganismos potencialmente patogênicos,Microrganismos potencialmente patogênicos,
capazes de desenvolver enfermidades
OPORTUNISTAS
Geralmente inofensivos em seu habitat normal, 
podem se tornar patogênicos em determinadas 
condições apresentadas pelo hospedeiro
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
ENTEROBACTÉRIAS – bastonetes G-
A maioria habita o trato intestinal do homem e de 
animais, porém podem ser encontradas na natureza
Algumas espécies constituem flora permanenteAlgumas espécies constituem flora permanente
Outras estão presentes transitoriamente ou como agentes 
de enfermidades
A maioria fermenta glicose, lactose e outros carboidratos
Ex.: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Hafnia, 
Morganella, Proteus, Providencia, Salmonella, Serratia, Shigella, Yersinia
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
Classificação Gênero/Espécie Média (UFC/g)
Primários Bacteroides
Lactobacillus
Escherichia coli
Enterococcus
1010
109
108
108
FLORA FECAL HUMANA
Enterococcus 108
Secundários Citrobacter
Klebsiella
Enterobacter
Clostridium
Staphylococcus
Bacillus
Leveduras
Bolores
104 a 106
104 a 105
104 a 105
105 a 106
105 a 106
104 a 105
104 a 105
104 a 105
Raros Proteus / Providencia
Pseudomonas aeruginosa
102 a 103
102 a 103
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
Espécies Média (UFC/g)
Bactérias aeróbicas Gram - E. coli
Citrobacter
Klebsiella
Enterobacter
4 x 108
1 x 106
5 x 104
1 x 105
FLORA FECAL HUMANA
Bactérias aeróbicas Gram + Enterococcus
Staphylococcus
Bacillus
2 x 108
8 x 106
3 x 104
Bactérias anaeróbicas Gram - Bacteroides
Lactobacillus
1 x 1010
1 x 109
Bactérias anaeróbicas Gram + Clostridium 4 x 106
Leveduras 5 x 104
Bolores 4 x 104
Total de bactérias 1,5 x1011
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
COLIFORMES TOTAIS
 Bastonetes G-(-) aeróbicos ou anaeróbicos facultativos, não 
esporulados, capazes de crescer na presença de sais biliares ou 
agentes tensoativos e de fermentar lactose a 35-37°C, com 
produção de ácido, gás e aldeído em 48 hprodução de ácido, gás e aldeído em 48 h
 Podem ocorrer no meio ambiente, em águas com alto teor de 
material orgânico, solo ou vegetação em decomposição
 Considerados não patogênicos em condições normais, embora 
algumas cepas causem diarréia e infecções oportunistas no trato 
urinário
 São considerados coliformes totais as bactérias que produzem a 
enzima β- galactosidase que promove a quebra da lactose em 
glicose e galactose
 São detectáveis através do substrato ο-nitrofenil-β-D-
galactopiranosídeo (ONPG - amarelado)
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
COLIFORMES FECAIS OU 
TERMOTOLERANTES
Micro-organismos do grupo coliforme, capazes de fermentar a 
lactose a 44-45°C
 São representados principalmente pela E. coli e algumas 
bactérias dos gêneros Klebsiella, Enterobacter e Citrobacter
 Só a E. coli é de origem exclusivamente fecal
 E. coli é o único coliforme produtor da enzima β-glicuronidase
 É detectável através do substrato 4- metilumbeliferil-β-D-
glicuronídeo (MUG – azul fluorescente)
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
MUG ONPG
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
CARACTERÍSTICAS DE UM INDICADOR DE 
CONTAMINAÇÃO FECAL
Ser um microrganismo ou grupo de microrganismos 
presente em grandes quantidades nas fezes de 
Ser um microrganismo ou grupo de microrganismos 
presente em grandes quantidades nas fezes de 
humanos e animais de sangue quente.
Apresentar persistência na água e resistência a 
desinfetantes semelhante aos micro-organismos 
patogênicos de veiculação hídrica.
Ser quantificável por métodos laboratoriais rápidos 
e simples.
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
BASTONETES GRAM-NEGATIVOS
Escherichia coli
 Não é considerado micro-organismo patogênico primário
 Algumas cepas produzem enterotoxinas Algumas cepas produzem enterotoxinas
 4 tipos são conhecidos como agentes etiológicos da diarréia humana: 
 E. coli enteropatogênica clássica
 E. coli enteroinvasora
 E. coli enterotoxigênica
 E. coli enterohemorrágica – citotoxina produzida pela E.coli O157: H7
 Indicador de contaminação fecal
 Causa comum de infecções do trato urinário
 Produz proteínas chamadas bacteriocinas que ajudam a manter o 
equilíbrio ecológico das bactérias intestinais
 Dose infectante: 106 - 109 microrganismos
Escherichia coli
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
ágar MacConkey
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
BASTONETES GRAM-NEGATIVOS
Salmonella sp.
Enterobactéria potencialmente patogênica
Habita o trato intestinal de gado bovino e aves domésticasHabita o trato intestinal de gado bovino e aves domésticas
O tempo de sobrevivência na água e esgoto pode alcançar 
até 60 dias à temperatura de 20 a 30°C
Possui cerca de 2.000 sorotipos
Agente de gastroenterites
Dose infectante: 103 - 105 micro-organismos
 Não constituem a flora normal humana
 Não fermenta lactose
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
Salmonella sp.
Ágar SS, e ágar XLD
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
BASTONETES GRAM-NEGATIVOS
Pseudomonas aeruginosa
 Infecta trato urinário, feridas e queimaduras
Causa abcessos, septicemia, otite, infecção ocular e Causa abcessos, septicemia, otite, infecção ocular e 
meningite
Bactéria comum no solo, água e ambientes naturais
Pode crescer em temperatura de refrigeração
Capaz de sintetizar grande número de enzimas
Habilidade para crescer em resíduos de sabão e 
antissépticos à base de quaternários de amônio
Resistente à maioria dos antibióticos
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
Pseudomonas aeruginosa
Ágar Cetrimida
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
ENDOTOXINAS BACTERIANAS
Lipopolissacarídeos (LPS) associados à membrana 
externa de bactérias Gram-(-)externa de bactérias Gram-(-)
1ng de endotoxina/Kg de peso por via endovenosa 
produz reação pirogênica no homem e em coelhos
Produtos injetáveis contaminados com endotoxinas
acima do limite estabelecido desencadeiam reação 
pirogênica e choque
MICROBIOLOGIA APLICADAA FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
COCOS GRAM-POSITIVOS 
Staphylococcus aureus
 Suporta alta pressão osmótica e baixa umidade
Cresce e sobrevive em secreções nasais Cresce e sobrevive em secreções nasais
 Produz coagulase, enzima que forma coágulos de 
fibrina no sangue
 Produz exotoxinas associadas a diversas síndromes 
 Desenvolve alta resistência a antimicrobianos
 Infecta feridas cirúrgicas 
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
COCOS GRAM-POSITIVOS 
Staphylococcus aureus
 TSCT - Síndrome do Choque Tóxico
Enterotoxina - Infecção Alimentar  Enterotoxina - Infecção Alimentar 
Toxina exfoliativa - Síndrome Exfoliativa da Pele 
Toxinas alfa e delta – destroem células humanas
Leucocidina - destrói leucócitos e fagócitos
 Coagulase - coagula o plasma
Foliculite
 Infecção hospitalar
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
Staphylococcus aureus
Sal Manitol, Baird Parker,
Vogel - Johnson
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
BASTONETES GRAM-POSITIVOS
Clostridium sp.
 Anaeróbios obrigatórios
 Células de 3 a 8µ contendo endosporos
 Presentes no solo e trato intestinal do homem e 
animais domésticos
 Termorresistentes a 80° C
 Catalase – negativos
 Produzem toxinas extremamente potentes
Produzem colagenase
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
Clostridium perfringens
Infecta ferimentos profundos e tecidos necrosados
Produz a toxina alfa que destrói as células adjacentes no 
tecido infectado causando a GANGRENA GASOSAtecido infectado causando a GANGRENA GASOSA
 Produz uma enterotoxina responsável por intoxicação 
alimentar em adultos
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
BASTONETES GRAM-POSITIVOS
Clostridium tetani
Produz uma neurotoxina – Tetanospasmina
130µg de tetanospasmina pode levar um adulto a óbito
Atua no SNC inibindo o relaxamento muscular e causando a Atua no SNC inibindo o relaxamento muscular e causando a 
PARALISIA RÍGIDA
Clostridium botulinum
Produz neurotoxinas – Toxina Botulínica (substância natural 
mais tóxica conhecida) que atua na junção neuromuscular 
interrompendo a liberação de acetilcolina, inibindo a contração 
muscular: PARALISIA FLÁCIDA
 Enterotoxina responsável por intoxicação alimentar em adultos
PARALISIA RÍGIDA
PARALISIA FLÁCIDA
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
BOLORES E LEVEDURAS
Candida albicans
Fungo unicelular não filamentoso de células esféricas ou 
ovaladas
Fungo unicelular não filamentoso de células esféricas ou 
ovaladas
Se reproduz por brotamento e forma pseudohifas
Adere ao epitélio humano na forma de levedura e exige 
pseudohifas para invadir tecidos profundos
Habita a microbiota normal humana
Patógeno oportunista
Agente de infecções cutâneomucosas e sistêmicas
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
Candida albicans
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
MICOTOXINAS
 Metabólitos secundários da biossíntese fúngica, com elevada toxicidade 
para humanos e animais, em pequenas quantidades
 Associadas a fungos toxigênicos dos gêneros Aspergillus, Fusarium , 
PenicilliumPenicillium
 A presença de contaminação fúngica por longos períodos de estocagem, 
pode oferecer condições adequadas ao desenvolvimento do fungo e à 
produção de micotoxinas
 Vias de exposição à micotoxinas
 Ingestão de produtos contaminados
 Via dérmica
 Via inalatória
 A exposição a micotoxinas pode produzir efeitos carcinogênicos, 
mutagênicos, teratogênicos e imunossupressores 
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
MICOTOXINAS
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
MICOPLASMAS
Menores organismos procarióticos , considerados 
parasitas, com capacidade de autorreplicação
Bactérias sem parede celular, de formas e tamanhos 
variáveis ( 0,2 – 0,3µ), não se coram pelo Gramvariáveis ( 0,2 – 0,3µ), não se coram pelo Gram
Patogênicos para animais e plantas
No homem colonizam o revestimento epitelial dos tratos 
respiratório e urogenital
Contaminantes frequentes em culturas de células e 
tecidos
Sua presença não produz turbidez nos meios de cultura 
nem alterações celulares visíveis
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
MICOPLASMAS
Regulamentação brasileira para cosméticos (Resolução nº 
481/1999): 
• Tipo I: uso infantil, área dos olhos e mucosas:
• menos que 102 UFC/g(mL) de aeróbicos totais
• ausência de P. aeruginosa, S. aureus, coliformes totais e 
fecais em 1 g (mL)
Padrões de controle microbiano - histórico
fecais em 1 g (mL)
• talco: ausência de clostrídios sulfito-redutores em 1 g
•Tipo II: demais produtos susceptíveis à contaminação:
• menos que 103 UFC/g(mL) de aeróbicos totais
• ausência de P. aeruginosa, S. aureus, coliformes totais e 
fecais em 1 g (mL)
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
QUALIDADE MICROBIOLÓGICA
Técnicas Microbiológicas aplicadas Técnicas Microbiológicas aplicadas 
na verificação da qualidade de 
matérias-primas e produtos
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
QUANTIFICAÇÃO DE 
MICRORGANISMOS
Contagem em Placa
Tubos Múltiplos (NMP)
Filtração em Membrana
MICROBIOLOGIA APLICADA A FARMÁCIA
Produtos Farmacêuticos e Cosméticos
PESQUISA DE PATÓGENOS
 Semeadura em meios de enriquecimento não 
seletivos/seletivosseletivos/seletivos
 Isolamento em meios presuntivos/diferenciais
 Provas bioquímicas para identificação 
microbiana 
CALDO CASEÍNA SOJA 
35°C - 48 h
AMOSTRA
S. aureus P. aeruginosa E. coli Salmonella sp.
Agar Sal Manitol
Agar Baird parker
Agar Vogel Johnson
35ºC – 48 h
Agar Cetrimida
Agar Piocianina
Agar Fluoresceína
35ºC – 48 h
Agar EMB
Agar MacConkey
Agar Endo
Caldo Tetrationato
Caldo Selenito Cistina
35ºC – 24 h
Agar Sulfito de Bismuto
Agar Verde brilhante
Agar Xilose Lisina Desoxicolato
PESQUISA DE PATÓGENOS
Caldo 
MacConkey
35°C – 24h
Prova da Coagulase
Teste de Oxidase
Agar Endo
35ºC – 48 h
AVALIAÇÃO DAS CARACTERÍSTICAS MORFOCOLONIAIS E IDENTIFICAÇÃO
Provas Bioquímicas Provas Bioquímicas
Agar Xilose Lisina Desoxicolato
35ºC – 48 h
Provas Bioquímicas