Baixe o app para aproveitar ainda mais
Prévia do material em texto
INSTITUTO DE BIODIVERSIDADE E SUSTENTABILIDADE BEATRIZ DA CRUZ FARIAS AULA PRÁTICA- EXTRAÇÃO DE DNA Trabalho apresentado ao Professor Eldo Campos para a disciplina de Biologia Molecular, da Universidade Federal do Rio de Janeiro, UFRJ – NUPEM. Abril de 2021 1.Introdução As células dos organismos vivos possuem a característica importante de transferir e conservar a informação genética por meio de moléculas de ácidos nucleicos. A descoberta de um agente transformante através da experiência de Griffith inaugura as bases da biologia molecular. O agente transformante foi posteriormente chamado de DNA- ácido desoxirribonucleico. Suas principais funções são realizar a síntese de proteínas e guardar e repassar informações genéticas. A conformação da sua molécula ajuda na estabilização e propicia suas características. A estrutura da molécula de DNA aceita atualmente é o modelo de dupla hélice formulado por Watson e Crick em 1953. Este modelo descreve que o DNA é composto por dois filamentos que são unidos por ligações de fosfodiéster e nucleotídeos que se ligam por ligações de hidrogênio.Os nucleotídeos são partes fundamentais da molécula de DNA, e são compostos por três elementos químicos: fosfato, açúcar e bases nitrogenadas, que se dividem em púricas e pirimídicas. As Leis de Paridades descrevem o comportamento das ligações desses nucleotídeos nas moléculas. Com a evolução tecnológica e o surgimento da biologia molecular, diversas formas de extração do DNA se desenvolveram; esse procedimento de extração pode ser realizado em uma ampla gama de amostras, e o procedimento a ser utilizado dependerá da finalidade e do tipo de amostra. Essa extração tem por propósito separar o DNA de dentro das células dos outros componentes celulares para analisá- lo. Essa análise possui aplicabilidade para determinar a paternidade de indivíduos, investigar doenças, análises forenses e criação de hormônios sintéticos como a insulina. O presente relatório descreve o experimento prático de extração de material genético (DNA) a partir de mucosa bucal. No contexto da pandemia e a impossibilidade de realização de aulas presenciais, a aula prática foi realizada em casa através de roteiro disponibilizado no Youtube com o título “Como extrair DNA humano” de autoria de Gerson e produção da Multiverso Produções. 2.Materiais e métodos 3 copos do tipo americano 150ml de água filtrada 1 colher do tipo sobremesa 1 colher do tipo sopa Aproximadamente 10ml de detergente neutro Aproximadamente 10g de sal de cozinha Aproximadamente 100ml de álcool etílico (gelado) 1 Corante alimentício (opcional) 1 Conta gotas (opcional) 1 Palito de madeira Procedimento: 1.Colocar a água e o sal de cozinha em um dos copos e diluir com auxílio da colher de sopa. 2. Passar quatro colheres de sopa da mistura para o copo vazio. 3.Fazer um bochecho com a mistura existente no copo 2. 4.Colocar ½ colher de detergente na mistura de bocheco, mexer delicadamente e reservar. 5. Pegar o terceiro copo e encher de álcool até a metade 5.1.Aplicar duas gotas de corante e mexer delicadamente para diluir. (Passo opcional) 6.Derramar cuidadosamente pela lateral do copo com bochecho a mistura de álcool (e corante) feita no terceiro copo. 7.Misturar delicadamente com um palito de madeira. 8.Observar o precipitado. 3.Resultados e discussão O processo de extração consistiu em duas etapas principais, a primeira foi a extração do DNA através da neutralização propiciada pela mistura de água e sal e a ação física do bochecho; posteriormente houve o rompimento das membranas celulares propiciada pelo uso do detergente, que pela sua polaridade interfere nos lipídios das membranas plasmáticas e é capaz de provocar a ruptura das células e consequentemente o derramamento dos componentes celulares, que ficam na solução; esse procedimento teve por consequência a expressão do DNA no líquido encontrado no copo 2. A seguir foi feita a purificação do DNA, retirando componentes que podem contaminar e interferir na experiência, para isso foi adicionado o álcool gelado no meio salino, que por suas propriedades químicas faz com que as moléculas de DNA não se dissolvam, se aglutinem e fiquem em suspensão, realizando uma separação visual entre o DNA e os outros elementos que porventura poderiam conter no meio. Ao final da experiência é possível observar o DNA aglutinado na cor branca ou na cor do corante escolhido, já que este serve para dar um maior destaque e melhorar a visualização. É importante destacar que não foi possível observar a molécula de DNA como comumente demonstrada nos livros, com suas bases nitrogenadas e dupla hélice, já que isso é possível apenas com auxílio de microscópio. 4. Conclusão Através desta prática realizada com materiais de fácil acesso foi possível observar o emaranhado de DNA que ficou precipitado pelas características químicas da molécula e dos materiais utilizados. Essa é uma maneira simples, rápida e barata de aliar teoria e prática e melhorar o entendimento dos conceitos de química e biologia molecular. Figura 1-Materiais utilizados 5.Bibliografia ARAUJO, Mariane Castardo et al. Adaptação de um método de extração de DNA a partir de células da mucosa bucal baseado em parâmetros de qualidade. Brazilian Journal of Development, v. 7, n. 4, p. 34697-34708, 2021. COMO extrair DNA humano. S.I: Multiverso Produções, 2020. (7 min.), color. Disponível em: https://www.youtube.com/watch?v=BcX3iinFRGQ. Acesso em: 14 abr. 2021. DA CUNHA COSTA, Nadinaele et al. PRÁTICA PEDAGÓGICA: ENSINO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS ATRAVÉS DA EXTRAÇÃO DE DNA A PARTIR DE CÉLULAS DA MUCOSA ORAL. DE ROBERTIS, E. M. F.; HIB, Jose. Biologia celular e molecular. 16. ed. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2016 Gurr, Sarah. (1991). PCR Protocols-A Guide to Methods and Applications. Biochemical Education - BIOCHEM EDUC. 19. 45-45. Figura 2-Resultado. Expressão do DNA
Compartilhar