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EXTRAÇÃO DE DNA

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Prévia do material em texto

INSTITUTO DE BIODIVERSIDADE E SUSTENTABILIDADE 
 
 
 
 
 
 
BEATRIZ DA CRUZ FARIAS 
 
 
 
 
 
 
AULA PRÁTICA- EXTRAÇÃO DE DNA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Trabalho apresentado ao Professor Eldo Campos 
para a disciplina de Biologia Molecular, da 
Universidade Federal do Rio de Janeiro, UFRJ – 
NUPEM. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Abril de 2021 
 
 
 
1.Introdução 
 As células dos organismos vivos possuem a característica importante de 
transferir e conservar a informação genética por meio de moléculas de ácidos 
nucleicos. A descoberta de um agente transformante através da experiência de 
Griffith inaugura as bases da biologia molecular. O agente transformante foi 
posteriormente chamado de DNA- ácido desoxirribonucleico. Suas principais funções 
são realizar a síntese de proteínas e guardar e repassar informações genéticas. A 
conformação da sua molécula ajuda na estabilização e propicia suas características. 
 A estrutura da molécula de DNA aceita atualmente é o modelo de dupla hélice 
formulado por Watson e Crick em 1953. Este modelo descreve que o DNA é composto 
por dois filamentos que são unidos por ligações de fosfodiéster e nucleotídeos que se 
ligam por ligações de hidrogênio.Os nucleotídeos são partes fundamentais da 
molécula de DNA, e são compostos por três elementos químicos: fosfato, açúcar e 
bases nitrogenadas, que se dividem em púricas e pirimídicas. As Leis de Paridades 
descrevem o comportamento das ligações desses nucleotídeos nas moléculas. 
 Com a evolução tecnológica e o surgimento da biologia molecular, diversas 
formas de extração do DNA se desenvolveram; esse procedimento de extração pode 
ser realizado em uma ampla gama de amostras, e o procedimento a ser utilizado 
dependerá da finalidade e do tipo de amostra. Essa extração tem por propósito 
separar o DNA de dentro das células dos outros componentes celulares para analisá-
lo. Essa análise possui aplicabilidade para determinar a paternidade de indivíduos, 
investigar doenças, análises forenses e criação de hormônios sintéticos como a 
insulina. 
 O presente relatório descreve o experimento prático de extração de material 
genético (DNA) a partir de mucosa bucal. No contexto da pandemia e a 
impossibilidade de realização de aulas presenciais, a aula prática foi realizada em 
casa através de roteiro disponibilizado no Youtube com o título “Como extrair DNA 
humano” de autoria de Gerson e produção da Multiverso Produções. 
 
2.Materiais e métodos 
3 copos do tipo americano 
150ml de água filtrada 
1 colher do tipo sobremesa 
1 colher do tipo sopa 
Aproximadamente 10ml de detergente neutro 
Aproximadamente 10g de sal de cozinha 
Aproximadamente 100ml de álcool etílico (gelado) 
1 Corante alimentício (opcional) 
1 Conta gotas (opcional) 
1 Palito de madeira 
 
Procedimento: 
1.Colocar a água e o sal de cozinha em um dos copos e diluir com auxílio da colher 
de sopa. 
2. Passar quatro colheres de sopa da mistura para o copo vazio. 
3.Fazer um bochecho com a mistura existente no copo 2. 
 
4.Colocar ½ colher de detergente na mistura de bocheco, mexer delicadamente e 
reservar. 
 
5. Pegar o terceiro copo e encher de álcool até a metade 
 
5.1.Aplicar duas gotas de corante e mexer delicadamente para diluir. (Passo opcional) 
 
6.Derramar cuidadosamente pela lateral do copo com bochecho a mistura de álcool 
(e corante) feita no terceiro copo. 
 
7.Misturar delicadamente com um palito de madeira. 
 
8.Observar o precipitado. 
 
3.Resultados e discussão 
 O processo de extração consistiu em duas etapas principais, a primeira foi a 
extração do DNA através da neutralização propiciada pela mistura de água e sal e a 
ação física do bochecho; posteriormente houve o rompimento das membranas 
celulares propiciada pelo uso do detergente, que pela sua polaridade interfere nos 
lipídios das membranas plasmáticas e é capaz de provocar a ruptura das células e 
consequentemente o derramamento dos componentes celulares, que ficam na 
solução; esse procedimento teve por consequência a expressão do DNA no líquido 
encontrado no copo 2. 
 A seguir foi feita a purificação do DNA, retirando componentes que podem 
contaminar e interferir na experiência, para isso foi adicionado o álcool gelado no meio 
salino, que por suas propriedades químicas faz com que as moléculas de DNA não 
se dissolvam, se aglutinem e fiquem em suspensão, realizando uma separação 
visual entre o DNA e os outros elementos que porventura poderiam conter no meio. 
 Ao final da experiência é possível observar o DNA aglutinado na cor branca ou 
na cor do corante escolhido, já que este serve para dar um maior destaque e melhorar 
a visualização. É importante destacar que não foi possível observar a molécula de 
DNA como comumente demonstrada nos livros, com suas bases nitrogenadas e dupla 
hélice, já que isso é possível apenas com auxílio de microscópio. 
4. Conclusão 
Através desta prática realizada com materiais de fácil acesso foi possível 
observar o emaranhado de DNA que ficou precipitado pelas características químicas 
da molécula e dos materiais utilizados. Essa é uma maneira simples, rápida e barata 
de aliar teoria e prática e melhorar o entendimento dos conceitos de química e biologia 
molecular. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 1-Materiais utilizados 
 
 
 
5.Bibliografia 
 
ARAUJO, Mariane Castardo et al. Adaptação de um método de extração de DNA a 
partir de células da mucosa bucal baseado em parâmetros de qualidade. Brazilian 
Journal of Development, v. 7, n. 4, p. 34697-34708, 2021. 
 
COMO extrair DNA humano. S.I: Multiverso Produções, 2020. (7 min.), color. 
Disponível em: https://www.youtube.com/watch?v=BcX3iinFRGQ. Acesso em: 14 
abr. 2021. 
 
DA CUNHA COSTA, Nadinaele et al. PRÁTICA PEDAGÓGICA: ENSINO DE 
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS ATRAVÉS DA EXTRAÇÃO DE DNA A PARTIR DE 
CÉLULAS DA MUCOSA ORAL. 
 
DE ROBERTIS, E. M. F.; HIB, Jose. Biologia celular e molecular. 16. ed. ed. Rio 
de Janeiro: Guanabara Koogan, 2016 
 
Gurr, Sarah. (1991). PCR Protocols-A Guide to Methods and Applications. 
Biochemical Education - BIOCHEM EDUC. 19. 45-45. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 2-Resultado. Expressão do DNA

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