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Interpretação do Eritrograma CONSTITUIÇÃO DO SANGUE ● Porção líquida (plasma): proteínas (também hormônios), água (90%), minerais e etc ● Elementos figurados (suspensão): leucócitos, hemácias e plaquetas ● Elementos gasosos: O 2 e CO 2 estão combinados às hemácias e também dissolvidos PRODUÇÃO DE HEMÁCIAS A produção de hemácias ocorre na medula óssea, ela é muito ativa em animais jovens. A eritropoiese é parte da hematopoiese, que é um sistema complexo envolvendo células indiferenciadas e citocinas. As células mielóides indiferenciadas produzem três tipos de células: os megacarioblastos, relacionados com a produção de plaquetas; proeritroblastos, relacionados com a produção de células vermelhas; e mieloblastos, relacionados com a produção de basófilos, neutrófilos, eosinófilos e monócitos. Além das citocinas, a eritropoietina também é essencial para estimular a replicação e diferenciação de unidades formadoras de explosão eritróide (BFU) em unidades formadoras de colônias eritróides, que ou irá responder a eritropoietina se dividindo ou se diferenciando em outras células até chegar em reticulócito. A eritropoietina é produzida no fígado durante a fase fetal e nos rins no animal adulto. As células renais intersticiais peritubulares produzem a eritropoietina em resposta a redução da oxigenação renal. A hipóxia renal é causada pela anemia, baixa oxigenação do sangue (por alta altitude ou problema pulmonar) ou baixa perfusão renal. A hemoglobinização é importante para regular o DNA da célula, definindo se ela é dividida outra vez, formando uma célula menor. Quando a célula eritrocitária chega no estágio de eritroblasto ortocromático, o núcleo é extrusado da célula, formando uma hemácia jovem (reticulócito), que ainda possui resquícios de RNA. Após a maturação o reticulócito se torna eritrócito. Nos animais hígidos, a hemocaterese é responsável por manter o equilíbrio das células sanguíneas, quando as hemácias estão velhas e deformadas, o baço realiza o sequestro delas, para então serem fagocitadas e destruídas pelos macrófagos. Dessa forma, a quantidade e condição do sangue fica sempre em um intervalo adequado de acordo com a espécie, fase da vida, região que o animal (ruminante), fase reprodutiva e etc. No hemograma, é observado um momento da composição sanguínea. A eritropoiese é dependente de fatores dietéticos e da função da medula óssea. Na medula óssea, existem interleucinas que são fatores estimuladores de colônias; além delas existe a atuação da eritropoietina. Já com relação aos fatores dietéticos, as vitaminas do complexo B e C, assim como o ácido fólico são fatores de reprodução, enquanto que minerais como Fe, Cu e Co são fatores de maturação; as proteínas, por sua vez, são tanto fatores de reprodução quanto de maturação. RETICULÓCITOS Os reticulócitos são células anucleadas, são eritrócitos imaturos com citoplasma manchado de ácidos nucleicos. Eles podem estar presente ou não na circulação, na dos equinos estão ausentes, já nos cães e gatos estão presente de 0,5-1%, enquanto que nos animais de laboratório podem estar presentes em até 4%. No geral, após liberados da medula óssea sofrem maturação em até 48h. Nos felinos, os reticulócitos podem ser encontrados de duas formas: agregados e ponteados. Os ponteados possuem de dois a seis grânulos de retículo, enquanto que no agregado as células possuem um largo agregado de retículos. EXAMES LABORATORIAIS ● Hemograma: eritrograma, leucograma e contagem de plaquetas ○ fase pré-analítica: dados do animal, porque o exame está sendo solicitado, caso clínico, como o material foi coletado ○ fase analítica: manual ou automatizada → manual geralmente só é feita se tiver alteração no automático ○ fase pós-analítica: interpretação das alterações, clínica corresponde ao analisado no animal? (troca de amostras e etc). ERITROGRAMA Fase analítica 1) N° de eritrócitos/mm 3 2) Concentração de hemoglobina 3) Volume globular ou hematócrito 4) Índices hematimétricos absolutos 5) Avaliação morfológica (exame de esfregaços sanguíneos corados) 6) Provas com finalidades específicas Fase pós-analítica ● Considerar a confiança nas análises ● Considerar o conjunto das determinações ● Comparar com valores de referência para a espécie em questão, idade, sexo, estado fisiológico, região, de acordo com o laboratório/padrão ● Confronto de resultado x quadro clínico - p. ex. mucosas normais, não pode ter hemácias extremamente aumentadas Número de eritrócitos 1. Aumento : policitemia ou poliglobulia a. Absoluto - realmente aconteceu i. primário- policitemia vera (verdadeira): alteração na medula óssea ii. secundário: origem do aumento não está na medula óssea, ex. déficit de oxigênio (ambiental, afecções cardiorrespiratórias graves e crônicas) e neoplasias renais b. Relativo: hemoconcentração, ocorre na desidratação, estresse (contração esplênica com liberação de hemácias- principalmente equinos após corrida) ou erro de técnica 2. Diminuição : eritrocitopenia a. Real: anemias- associada a algum fator/doença, anemia não é o diagnóstico final. É classificada conforme grau de diminuição: i. suave: queda de até ⅓ do valor normal ii. moderada: queda de até ½ valor do normal iii. grave: queda > ½ (¼ é o limite vital) b. Aparente : hemodiluição devido a retenção ou redistribuição de líquidos ou erro de técnica. Taxa de hemoglobina A taxa de hemoglobina acompanha o número de eritrócitos, é relevante se houver grande discrepância entre os dois. 1. Aumento: policitemias 2. Diminuição: anemias Volume globular (VG) ou hematócrito (Ht) ● VG: porcentagem de hemácias no sangue total ● Ht: quantidade de hemácias e seu volume celular médio. Um tubo microcapilar é preenchido com sangue até ¾ da sua capacidade, em seguida esse tubo é centrifugado na centrífuga de microhematócrito. O resultado da centrifugação são três camadas: um concentrado de hemácias na base; uma faixa fina de leucócitos e plaquetas no meio; e o plasma, na parte superior. O plasma pode ser utilizado para avaliar lipemia, hemólise e icterícia, além de proteína total no plasma por refratometria. O VG fornece rápidainformação sobre a massa de hemácias quando não há disponibilidade de analisador hematológico. A diminuição do VG é denominada anemia, enquanto o aumento é denominado policitemia ou, mais apropriadamente, eritrocitose. A mensuração do VG determina a presença ou a ausência de anormalidades da massa eritrocitária, porém não define a causa primária da enfermidade. A avaliação concomitante dos índices hematimétricos (VCM, CHCM) e o exame do esfregaço de sangue periférico frequentemente auxiliam na identificação da causa da anormalidade. Índices hematimétricos absolutos Os índices hematimétricos são utilizados para classificar anemias. 1. VCM- Volume corpuscular médio: (Ht x 10 / He) fL (μ 3 ) a. A medida é em milhões, ignora-se os zeros (ex. 3 milhões de hemácias, então divide por 3) b. Tamanho médio das hemácias 2. HCM - Hemoglobina Corpuscular Média: (Hb x 10 / He) pg (picograma) a. Peso de hemoglobina dentro da hemácia 3. CHCM - Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média: (Hb x 100 / Ht) % a. É mais relevante que o HCM, pois corrige o volume de He, sendo considerado um cálculo mais apropriado da concentração de Hb nas hemácias. b. Quanto a hemoglobina representa em porcentagem/ ocupa na hemácia Causas de achados anormais Valores elevados Valores diminuídos Relativos: hemoconcentração contração esplênica Anemia por inflamação/ doença crônica Deficiência de eritropoietina provocada por doença renal crônica Absolutos: Hipóxia (doença cardíaca ou pulmonar) Altitude elevada Tumores ou cistos produtores de eritropoietina Neoplasia renal (p. ex. linfoma) Eritrocitose primária (policitemia verdadeira) Hemorragia: Úlcera GI Anormalidade de hemostase Neoplasia Parasitismo Cirurgia Traumatismo Hemólise: Imunomediada (primária ou secundária) Parasitas de hemácias Oxidantes (p. ex. paracetamol, cebola) Intoxicação por zinco ou cobre Fragmentação (p. ex. coagulação intravascular disseminada, neoplasia, dirofilariose) Intoxicação por veneno de serpente Deficiência de ferro Doenças endócrinas (p. ex. hipotireoidismo) Doença de medula óssea (menor produção): Infecções (E. canis, FeLV, FIV, parvo) Mielofisite Lesão tóxica na medula óssea Aplasia de hemácia pura Doença mieloproliferativa ou mielodisplásica eritróide Deficiência nutricional (rara) Classificação hematimétrica ● VCM: tamanho das hemácias ○ Macrocitose- macrocítica: hemácias maiores que a média ○ Normocitose-normocítica: hemácias de tamanho normal ○ Microcitose- microcítica: hemácias de tamanho menor que a média ● HCM e CHCM: diz respeito a coloração das hemácias ○ Hipocromasia- hipocrômica: em média, as hemácias da amostra contêm menos Hb por medida de volume ○ Normocromia- normocrômica: hemácias da amostra com quantidade normal de Hb por medida de volume * Não existe hipercromia real: pois a hemácia possui capacidade máxima de 36% de hemoglobina- pela variação na contagem pode chegar até 38%, valores maiores indicam hemólise/ erro de coleta. * O VCM dos gatos é menor que dos cães porque suas hemácias são menores. Classificação hematimétrica- Etiologia ● VCM ↑ HCM/ CHCM (N): macrocítica/ normocrômica ● VCM ↑ HCM/CHCM ↓: macrocítica/ hipocrômica ● VCM (N) HCM/CHCM (N): normocítica/ normocrômica ● VCM (N) HCM/CHCM ↓: normocítica/ hipocrômica ● VCM ↓ HCM/CHCM (N): microcítica/ normocrômica ● VCM ↓ HCM/CHCM ↓: microcítica/ hipocrômica A hemoglobinização regula os ácidos nucleicos e a divisão celular, hemácias pequenas indicam que a hemoglobinização não foi completa e elas se dividiram mais uma vez. A anemia microcítica normocrômica pode indicar deficiência de ferro. A anemia grave, normocítica e normocrômica pode estar associada a uma infinidade de processos, o que dificulta identificar a origem do processo. Pode estar relacionada a problema na medula óssea, com hemácias normais, porém em menor quantidade, o que pode acontecer em qualquer doença crônica. A anemia grave macrocítica, podendo ser normo ou hipocrômica, pode significar falta de fator de reprodução ou alteração grave na medula óssea ou até mesmo um problema mais simples, como perda sanguínea após um atropelamento. Nos casos mais simples, a medula está funcionando normalmente e começa a mandar reticulócitos para o sangue, que são maior que as hemácias, então o VCM se eleva, o aumento de reticulócitos é um sinal de recuperação da anemia, porém para confirmar isso é necessário realizar a contagem de reticulócitos. Aspectos morfológicos e tintoriais das hemácias 1. Modificação do diâmetro/ tamanho 2. Modificação da forma 3. Modificação da coloração 4. Outras observações a. Presença de hematozoários b. Presença de inclusões c. Microfilárias 1. Modificação do tamanho das hemácias ● Anisocitose fisiológica: sempre existe alteração no tamanho de uma célula para outra, porém é pouca coisa ● Anisocitose patológica: os tamanhos são bem diferentes e geralmente misturados às normais ○ Macrócitos: VCM aumentado- aumento de eritrócitos imaturos (frequentemente) ○ Normócitos ○ Micrócitos: principal causa é a anemia por deficiência de ferro (redução do VCM). Pode ser feito por técnicas manuais (esfregaço sanguíneo) e técnica automatizada (RDW- Red Cell Distribution Width). Os exames automatizados estabelecem padrões numéricos para a anisocitose, pela amplitude de variação de tamanho da célula em porcentagem. A RDW , é o coeficiente de variação da distribuição de volume das hemácias, é calculada a partir do desvio padrão (DP) do histograma de hemácias e do VCM (RDW = VCM/DP). Ela, geralmente, é expressa em porcentagem e fornece um índice do grau de variação do tamanho (anisocitose) na população de hemácias. ● Classificação da anisocitose: ○ (+): meia cruz- só um pouquinho ○ ++: quantidade considerável ○ +++: muito Obs: Macrocitose sem policromasia ousem outra evidência de resposta regenerativa apropriada é um achado comum em gatos anêmicos com mielodisplasia e doença mieloproliferativa. Essa macrocitose está associada à infecção pelo vírus da leucemia felina (FeLV) e também pode ser constatada em gatos infectados por FeLV que não estejam anêmicos. 2. Modificação na forma das hemácias a. Forma bicôncava- normal b. Pecilocitose ou poiquilocitose : alteração ou perda da forma normal da hemácia- indica que a medula perdeu a capacidade de enviar células normais, está em esgotamento, portanto é uma situação séria. O formato normal das hemácias é arredondado e bicôncavo, dando a impressão de um halo mais claro no centro nas lâminas. Esse centro mais claro é por conta da menor quantidade de hemoglobina que cabe ali. Esse centro mais claro é melhor percebido no cão, visto que espécies como o gato, equino, bovinos, ovinos e caprinos possuem células de menores dimensões, então a concavidade é menos perceptível, sendo que o centro mais claro às vezes nem pode ser visualizado. normal pecilocitose/ poiquilocitose ● Esferócito: diâmetro = espessura (anemia hemolítica imunomediada - AHAI e pós transfusão sanguínea com sangue incompatível) ○ Geralmente nos cães, nos gatos também ocorre, mas eles são mais difíceis de identificar. ■ Aparece nos cães após picada de abelha ou intoxicação por zinco também. ● Falciforme : doença hereditária no homem. ● He em alvo/ codócitos: Hb acumulada na periferia e centro- processos anêmicos crônicos por depressão medular ○ Adaptação da hemácia para aumentar a troca gasosa. ○ Pouca importância, pode aparecer em cães com aumento de colesterol sérico ● He crenadas: artefato de técnica- lâmina secando naturalmente ou quando deixa muito tempo no microscópio, pois retira o líquido da hemácia. ● Esquizócitos: fragmentos de eritrócitos- anemias hemolíticas intensas, deficiência de ferro, hemangiossarcoma, CID. **segunda imagem- eritroblasto: com núcleo **dacriócitos: formato de lágrima 3. Modificação na coloração das hemácias a. Normocromia: halo centro mais claro- 31 a 36% no VCM b. Hipocromia: aumento do halo central claro, por redução da Hb (deficiência de Fe). c. Hipercromia : não existe hipercromia real- esferócitos parecem hipercromia pela falta do halo central. d. Policromasia/ policromatofilia: características acidófilas e basófilas- reticulócitos i. Mais puxado para o lilás/azul, acontece nos reticulócitos por conta dos resquícios do núcleo e organelas, é indicativo de reticulócitos, porém é necessário analisar. 4. Outros achados relacionados a. Corpúsculos de Howell Jolly: remanescente de material nuclear. Indica regeneração/ recuperação de uma anemia, esplenectomia e supressão da função esplênica. b. Corpúsculos de Heinz: hemoglobina desnaturada. Pode ser anemia hemolítica, pois formam esses corpúsculos bem na borda da célula. i. Acontece em cavalos que ingeriram muita cebola. ii. Em gatos é normal em pouca quantidade, pois a Hb do gato oxida com mais facilidade. Em gatos enfermos pode aparecer em grande quantidade. iii. O azul de metilento é tóxico, pode causar aparecimento de muitos Heinz. iv. A ingestão de alho em grande quantidade também causa o aparecimento de corpúsculos de Heinz. v. Medicamentos que induzem o aparecimento: benzocaína, paracetamol, propofol, fenazopiridina, fenotiazina, naftaleno. c. Ponteado basofílico: mudanças degenerativas do RNA. Anemias em bovinos e intoxicações por Pb em cães. d. Eritroblastos: hemácias jovens nucleadas. Podem aparecer normalmente em pequena quantidade, acima de 6 pode ser necessário realizar contagem de reticulócitos, pois indica que a quantidade de reticulócitos já está alta, o que demonstra anemia regenerativa, com isso os eritroblastos escapam. Eritroblastos podem indicar recuperação da anemia, porém o aparecimento de eritroblastos sem a presença de reticulócitos é indicativo de neoplasia. Corpúsculo de Howell Jolly ANEMIAS REGENERATIVAS X ARREGENERATIVAS ● Regenerativas : processo extramedular- perda de ferro, perda sanguínea, processo hemolítico, etc. A medula funciona direito e tenta compensar, reconhece anemia e envia células jovens p/ circulação. ● Arregenerativa : não tem resposta adequada, a medula não produz ou não chega informação de que está precisando produzir mais células, seja falta da chegada de eritropoietina ou outro. ○ DRC: falta de eritropoietina pelo rim, medula funciona normalmente mas não produz mais células- pode ser fornecida eritropoietina em alguns casos PROVAS COM FINALIDADES ESPECÍFICAS 1. Contagem de reticulócitos : indica ou não regeneração- contagem de reticulócitos em porcentagem e contagem absoluta (número de células por mm 3 ) O pico de reticulócitos circulantes ocorre de 4 a 7 dias. % de reticulócitos corrigida = % de reticulócitos x (Ht do animal/ Ht normal para a espécie) ● 45 para os cães ● 37 para os gatos A contagem corrigida irá indicar se o animal tem capacidade de voltar para os parâmetros normais. Acima de 2% é regenerativa, abaixo de 2% é arregenerativa (comprometimento medular), por conta disso a contagem corrigida sempre deve ser calculada. A contagem de reticulócitos sem a correção não indica verdadeiramente se é anemia regenerativa ou arregenerativa. 2. Outras: Hemosedimentação, Curva de Price-Jones, Resistência globular e Tipos de hemoglobina. Só são utilizados para pesquisa e em casos específicos- não precisa saber agora. EXEMPLOS ● Anemia moderada, microcítica e hipocrômica ● Anemia grave, normocítica e normocrômica ● Anemia grave, macrocítica e normocrômica Contagem corrigida de reticulócitos= 5*(17/45)= 1,88% ● Anemia leve a moderada, microcítica, hipocrômica e arregenerativa ○ falta de ferro? ○ acometimento de medula? baixa eritropoietina? ● Discreta policromasia: indicação de presença de reticulócitos, bate com os 5% (1,88% corrigido), que é pouco. ● Anemia grave: macrocítica e normocrômica ○ deprocesso grave na medula até processo de recuperação de perda sanguínea → células maiores podem ser reticulócitos ● Reticulócitoscorrigidos= 9*(19/45)= 3,8% → regenerativa ● Obs: eritroblastos bate porque tem muitos reticulócitos ○ hipocromia: bate porque CHCM tá no nível inferior e hemoglobina tá bem baixa ○ anisocitose bate porque é macrocítica ○ policromasia bate por conta dos reticulócitos ● Eritroblasto: apesar de ser célula vermelha, é contada junto com as células brancas pelo contador automático ● Anemia grave, normocítica, normocrômica, arregenerativa → relacionado a muitos processos ● Anisocitose: pouca anisocitose ● Policromasia discreta: arregenerativa, pequena quantidade de reticulócitos (1,88% corrigida)
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